一种检测或辅助检测β-珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了检测或辅助检测β‑珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物及其应用。本发明专利技术提供了一种检测或辅助检测β‑珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物，包括如下A1‑A8所示的引物对中的至少两对引物：引物对A1由序列1和序列2所示的单链DNA组成；引物对A2由序列3和序列4所示的单链DNA组成；引物对A3由序列5和序列6所示的单链DNA组成；引物对A4由序列7和序列8所示的单链DNA组成；A5引物对由序列9和序列10所示的单链DNA组成；引物对A6由序列11和序列12所示的单链DNA组成；引物对A7由序列13和序列14所示的单链DNA组成；引物对A8由序列15和序列16所示的单链DNA组成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学检验领域，具体涉及一种检测β-珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物及其应用。
技术介绍
β-地中海贫血是严重危害人类生命健康的单基因遗传病，β-地中海贫血是一种由于β-珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传血液病，多由β-珠蛋白基因点突变所致。然而由于β-珠蛋白基因序列庞大并且没有点突变热区，在临床上只能对缺失、重复突变以及常见的点突变进行检测，而其它点突变致病的病人或携带者往往存在被漏诊或得不到基因诊断的风险，这就意味着其它点突变致病的病人或携带者的家族不能进行DMD的产前诊断，从而导致中重度患儿的出生。目前，β-地中海贫血的基因诊断方法主要有：Sanger测序法、限制性片段长度多态性(RFLP)、反向点杂交(RDB)、等位基因特异性PCR(ARMS-PCR)。Sanger测序法是β-地中海贫血基因点突变检测的金标准，但是该方法操作较繁琐，极大地限制了其在临床诊断中的应用，测序的检测通量也有限，并且对检测结果需要人工分析，分析耗时耗力。RFLP是通过识别特异性序列位点进行酶切反应，方法简便成本低廉，但其局限性是只能对有限的可产生酶切位点的突变进行检测，由于不完全或部分酶切反应还会导致假阳性或假阴性结果。反向点杂交技术的结果是用肉眼判读，失误率高，往往造成一份样本反复检测。ARMS-PCR需针对每个突变设计相应引物，每一对引物扩增条件都需优化，若需同时检测多种突变时则操作繁琐，而且也会出现假阳性或假阴性结果。基于地贫缺陷基因的市场和社会检测需求，以及目前地贫缺陷基因检测现状的落后，利用Sanger法测序技术开发地贫基因突变位点检测试剂盒势在必行。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何快速、准确的对β-珠蛋白基因突变位点进行检测。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种检测或辅助检测β-珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物，包括如下A1-A8所示的引物对中的至少两对引物：引物对A1由引物A1F和引物A1R组成；引物对A2由引物A2F和引物A2R组成；引物对A3由引物A3F和引物A3R组成；引物对A4由引物A4F和引物A4R组成；引物对A5由引物A5F和引物A5R组成；引物对A6由引物A6F和引物A6R组成；引物对A7由引物A7F和引物A7R组成；引物对A8由引物A8F和引物A8R组成；所述引物A1F为如下a1)或a2)或a3)：a1)序列1所示的单链DNA分子；a2)将a1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；a3)将a1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A1R为如下b1)或b2)或b3)：b1)序列2所示的单链DNA分子；b2)将b1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；b3)将b1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A2F为如下c1)或c2)或c3)：c1)序列3所示的单链DNA分子；c2)将c1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；c3)将c1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A2R为如下d1)或a2)或d3)：d1)序列4所示的单链DNA分子；d2)将d1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与d1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；d3)将d1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与d1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A3F为如下e1)或e2)或e3)：e1)序列5所示的单链DNA分子；e2)将e1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与e1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；e3)将e1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与e1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A3R为如下f1)或f2)或f3)：f1)序列6所示的单链DNA分子；f2)将f1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与f1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；f3)将f1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与f1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A4F为如下g1)或g2)或g3)：g1)序列7所示的单链DNA分子；g2)将g1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与g1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；g3)将g1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与g1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A4R为如下h1)或h2)或h3)：h1)序列8所示的单链DNA分子；h2)将h1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与h1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；h3)将h1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与h1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A5F为如下i1)或i2)或i3)：i1)序列9所示的单链DNA分子；i2)将i1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与i1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；i3)将i1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与i1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A5R为如下j1)或j2)或j3)：j1)序列10所示的单链DNA分子；j2)将j1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与j1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；j3)将j1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与j1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A6F为如下k1)或k2)或k3)：k1)序列11所示的单链DNA分子；k2)将k1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与k1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；k3)将k1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与k1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A6R为如下l1)或l2)或l3)：l1)序列12所示的单链DNA分子；l2)将l1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与l1)限定的单链DNA分子具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测或辅助检测β‑珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物，包括如下A1‑A8所示的引物对中的至少两对引物：引物对A1由引物A1F和引物A1R组成；引物对A2由引物A2F和引物A2R组成；引物对A3由引物A3F和引物A3R组成；引物对A4由引物A4F和引物A4R组成；引物对A5由引物A5F和引物A5R组成；引物对A6由引物A6F和引物A6R组成；引物对A7由引物A7F和引物A7R组成；引物对A8由引物A8F和引物A8R组成；所述引物A1F为如下a1)或a2)或a3)：a1)序列1所示的单链DNA分子；a2)将a1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；a3)将a1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A1R为如下b1)或b2)或b3)：b1)序列2所示的单链DNA分子；b2)将b1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；b3)将b1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A2F为如下c1)或c2)或c3)：c1)序列3所示的单链DNA分子；c2)将c1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；c3)将c1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A2R为如下d1)或a2)或d3)：d1)序列4所示的单链DNA分子；d2)将d1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与d1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；d3)将d1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与d1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A3F为如下e1)或e2)或e3)：e1)序列5所示的单链DNA分子；e2)将e1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与e1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；e3)将e1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与e1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A3R为如下f1)或f2)或f3)：f1)序列6所示的单链DNA分子；f2)将f1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与f1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；f3)将f1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与f1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A4F为如下g1)或g2)或g3)：g1)序列7所示的单链DNA分子；g2)将g1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与g1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；g3)将g1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与g1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A4R为如下h1)或h2)或h3)：h1)序列8所示的单链DNA分子；h2)将h1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与h1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；h3)将h1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与h1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A5F为如下i1)或i2)或i3)：i1)序列9所示的单链DNA分子；i2)将i1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与i1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；i3)将i1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与i1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A5R为如下j1)或j2)或j3)：j1)序列10所示的单链DNA分子；j2)将j1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与j1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；j3)将j1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与j1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A6F为如下k1)或k2)或k3)：k1)序列11所示的单链DN...

【技术特征摘要】
1.一种检测或辅助检测β-珠蛋白基因突变位点的多重PCR引物，包括如下A1-A8所示的引物对中的至少两对引物：引物对A1由引物A1F和引物A1R组成；引物对A2由引物A2F和引物A2R组成；引物对A3由引物A3F和引物A3R组成；引物对A4由引物A4F和引物A4R组成；引物对A5由引物A5F和引物A5R组成；引物对A6由引物A6F和引物A6R组成；引物对A7由引物A7F和引物A7R组成；引物对A8由引物A8F和引物A8R组成；所述引物A1F为如下a1)或a2)或a3)：a1)序列1所示的单链DNA分子；a2)将a1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；a3)将a1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与a1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A1R为如下b1)或b2)或b3)：b1)序列2所示的单链DNA分子；b2)将b1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；b3)将b1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与b1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A2F为如下c1)或c2)或c3)：c1)序列3所示的单链DNA分子；c2)将c1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；c3)将c1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与c1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A2R为如下d1)或a2)或d3)：d1)序列4所示的单链DNA分子；d2)将d1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与d1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；d3)将d1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与d1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A3F为如下e1)或e2)或e3)：e1)序列5所示的单链DNA分子；e2)将e1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与e1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；e3)将e1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与e1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A3R为如下f1)或f2)或f3)：f1)序列6所示的单链DNA分子；f2)将f1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与f1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；f3)将f1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与f1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A4F为如下g1)或g2)或g3)：g1)序列7所示的单链DNA分子；g2)将g1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与g1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；g3)将g1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与g1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A4R为如下h1)或h2)或h3)：h1)序列8所示的单链DNA分子；h2)将h1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与h1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；h3)将h1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与h1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A5F为如下i1)或i2)或i3)：i1)序列9所示的单链DNA分子；i2)将i1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与i1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；i3)将i1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与i1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A5R为如下j1)或j2)或j3)：j1)序列10所示的单链DNA分子；j2)将j1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与j1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；j3)将j1)限定的单链DNA分子进行一个或几个碱基的缺失、插入和/或改变得到的、与j1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；所述引物A6F为如下k1)或k2)或k3)：k1)序列11所示的单链DNA分子；k2)将k1)限定的单链DNA分子的3’端延长或截短0～3个碱基后所得的、与k1)限定的单链DNA分子具有相同功能的单链DNA分子；k3)将k1)限定的单链...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴国栋，李大军，
申请(专利权)人：北京慧普康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11