本发明专利技术涉及肿瘤基因检测技术领域，具体涉及一组用于肺癌诊断的circRNA标志物及其应用。本发明专利技术提供的标志物包括hsa_circRNA_104600和hsa_circRNA_105013，本发明专利技术还提供上述标志物的引物组合。本发明专利技术为肺癌的诊断提供参考数据，所提供的circRNA生物标志物对肺癌具有很高的灵敏性和特异性，可以作为新型的生物标志物用于肺癌的检测。
A group of circRNA markers for lung cancer diagnosis and their application
The invention relates to the technical field of tumor gene detection, in particular to a set of circRNA markers for lung cancer diagnosis and their applications. The markers provided by the invention include hsa_circRNA_104600 and hsa_circRNA_105013. The invention also provides a primer combination of the markers. The invention provides reference data for the diagnosis of lung cancer. The circRNA biomarker provided has high sensitivity and specificity for lung cancer, and can be used as a new biomarker for the detection of lung cancer.
【技术实现步骤摘要】
一组用于肺癌诊断的circRNA标志物及其应用
本专利技术涉及肺癌基因检测
，具体涉及一组用于肺癌诊断的circRNA标志物及其应用。
技术介绍
根据世界卫生组织(worldhealthorganization，WHO)发布的《全球癌症报告2014》可知，肺癌是世界上高发的恶性肿瘤之一，亚洲尤盛。2017美国癌症报告显示,在2017年美国癌症预估发病率方面，男、女新发病例中，肺癌均高居第二位，并且，肺癌仍是美国癌症致死的首要原因，超过1/4的癌症死亡患者的死因为肺癌。在中国，数据统计显示2015年有73.3万的肺癌新发病例，同时有61万人死于肺癌，肺癌的发病率在男性癌症病人中居于首位，而在女性癌症病人中居第二位，无论是在男性或女性中，肺癌也是造成癌症致死的主要原因。近年来，尽管对于肺癌的治疗手段已取得了进展，但肺癌的5年生存率仍低于15％。环状RNA(circularRNA，circRNA)是一种新发现的环形结构RNA，其在真核细胞中广泛表达，具有跨物种保守性，并具有时间和组织表达特异性。大多数circRNAs是由蛋白编码基因首尾共价连接而成的闭合环状结构，这样的环状结构使得circRNAs可以抵抗RNA酶的水解作用，这使得circRNAs比线性RNA更为稳定，同时，circRNAs不可依赖于5端的帽子结构来翻译蛋白。CircRNA因具有稳定性、时间、空间表达特异性等特性，使得circRNA更有潜力成为疾病诊断的潜在分子标志物。已有研究表明，circRNAs的表达异常与包括肿瘤在内的多种疾病有关。例如，一项研究证实hsa_circ_0047905，hsa_circ_0138960和has-circrna7690-15在胃癌组织中显著上调，体外抑制这些circRNAs能抑制胃癌细胞增殖、侵袭能力，这些均提示hsa_circ_0047905，hsa_circ_0138960和has-circrna7690-15可能在胃癌的形成过程中发挥作用。已有研究证明hsa_circ_0001785可能对乳腺癌的诊断具有一定的价值。其他报道也显示circRNAs在肺腺癌、结直肠癌、肝癌等肿瘤的发展中具有重要的作用。然而，circRNAs是否在肺癌发病过程中发挥作用尚不清楚。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一组用于肺癌诊断的circRNA标志物及其应用，为肺癌的诊断提供参考数据，本专利技术提供的circRNA生物标志物对肺癌具有很高的灵敏性和特异性，可以作为新型的生物标志物用于肺癌的检测。为了达到上述目的，本专利技术的技术方案是：本专利技术提供一组用于肺癌诊断的circRNA标志物，包括SEQIDNo.1所示的hsa_circ_0005927和SEQIDNo.2所示的hsa_circ_0001936两种circRNAs。上述标志物在制备诊断肺癌患者的试剂盒或试剂中的应用。上述标志物在诊断肺癌的circRNA芯片中的应用。上述标志物在制备或筛选肺癌靶向药物中的应用。本专利技术还提供一组用于肺癌诊断的circRNA标志物的引物组合，所述引物组合包括针对hsa_circ_0005927的特异性引物和针对hsa_circ_0001936的特异性引物；进一步，上述针对hsa_circ_0005927的特异性引物包括如SEQIDNo.3所示的上游引物，如SEQIDNo.4所示的下游引物；上述针对hsa_circ_0001936的特异性引物包括如SEQIDNo.5所示的上游引物，如SEQIDNo.6所示的下游引物。上述circRNA标志物的引物组合在制备诊断肺癌的试剂盒或试剂中的应用。上述circRNA标志物的引物组合在制备或筛选肺癌靶向药物的应用。本专利技术还提供一种诊断肺癌的试剂盒，其中包括上述的circRNA标志物的引物的任意一种或两种。有益效果：(1)本专利技术通过基因芯片技术和RT-qPCR技术，筛选出用于检测肺癌的生物标志物，通过上述两种方法联合筛选的生物标记物，在肺癌发生时表达量变化差异性大，利于应用于临床检测；(2)针对两种筛选出的生物标记物的特异性引物，其具有特异性强和敏感性高等优点，通过RT-qPCR技术，可以准确地检测出所筛选的生物标志物的含量；(3)两种筛选出的生物标志circRNAs在肺癌发生时表达量发生显著的变化，在制备或筛选肺癌靶向药物中具有应用价值。(4)两种筛选出的生物标志circRNAs在制备诊断肺癌患者的试剂盒或试剂方面具有应用价值。附图说明图1是RNA变性琼脂糖凝胶电泳图(泳道内为部分提取的RNA)；图2是样本芯片扫描后的箱图(图中：Ⅰ-A、Ⅱ-A、ⅢA/Ⅰ-P、Ⅱ-P、Ⅲ-P分别表示I期、II期、III期癌组织/癌旁组织)；图3是样本芯片扫描后的火山图(垂直线相当于肺癌组织相较于癌旁组织的2倍上调或下调，水平线代表P值)；图4是I、II、III期肺癌标本共有的显著差异表达的circRNAs的数量统计图；图5是候选circRNAs的RT-qPCR产物琼脂糖凝胶电泳图(每个样本重复两次电泳，每图最左边是marker)；图6是肺癌和癌旁的候选circRNA的相对表达量统计图(LCXW：肺癌组织；Normal：癌旁组织)；图7是候选circRNA的表达量芯片检测结果与RT-qPCR结果比较图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一：肺癌circRNAs标志物的初步筛选1实验对象收集2011年9月到2015年12月昆明医科大学第一附属医院并且胸外科病理学诊断为肺癌的癌组织及癌旁组织，患者术前未接受过化疗和放疗。收集患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、肿瘤分期、是否发生淋巴结转移及肿瘤类型等临床资料。本实验经昆明医科大学伦理委员会审查批准。2实验方法2.1样品RNA抽提及质量检测样品RNA用TRIZOL法提取，溶解后保存于-80℃；利用紫外吸收法和凝胶电泳法检测所提取的RNA质量；线性转录本去除效率评估：将totalRNA分为等量2份，1份采用RNaseR处理，另一份不作处理。经过纯化和反转录后，用荧光定量PCR检测GAPDH和circRNA-7表达。RNaseR处理组GAPDH基因PCR的Ct值远大于未处理组，circRNA-7Ct值变化明显小于GAPDH基因。2.2cDNA/aRNA样品合成和标记采用ArraystarSuperRNALabelingKit试剂盒(美国Arraystar公司)，将RNaseR处理后的RNA用随机引物反转录为带有T7promoter的cDNA序列，再将cDNA转录为荧光标记的cRNA序列。2.3芯片杂交将26对LCXW样本分别提取RNA后，按照分期(Ⅰ期：10/26；Ⅱ期：9/26；Ⅲ期：7/26)及组织来源(癌和癌旁)分为6组，每组内各样本混合后利用ArraystarHumancircRNAArrayV2分析circRNAs表达情况。在标准条件下将标记好的探针和高密度基因组芯片进行杂交。2.4图像采集使用GenePix4000B芯片扫描仪扫描本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组用于肺癌诊断的circRNA标志物，其特征在于：包括SEQ ID No.1所示的hsa_circ_0005927和SEQ ID No.2所示的hsa_circ_0001936。
【技术特征摘要】
1.一组用于肺癌诊断的circRNA标志物，其特征在于：包括SEQIDNo.1所示的hsa_circ_0005927和SEQIDNo.2所示的hsa_circ_0001936。2.权利要求1所述的用于肺癌诊断的circRNA标志物在制备诊断肺癌患者的试剂盒或试剂中的应用。3.权利要求1所述的用于肺癌诊断的circRNA标志物在诊断肺癌的circRNA芯片中的应用。4.权利要求1所述的用于肺癌诊断的circRNA标志物在制备或筛选肺癌靶向药物中的应用。5.一组用于肺癌诊断的circRNA标志物的引物组合，其特征在于：所述引物组合包括针对hsa_circ_0005927的特异性引物和针对hsa_circ_0001936的特异性引物。...
【专利技术属性】
技术研发人员：张艳亮，郭翀，陈正辉，卯建，段勇，
申请(专利权)人：昆明医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：云南,53
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