绝经后骨质疏松的诊疗标志物制造技术

本发明专利技术公开了绝经后骨质疏松的诊疗标志物，该标志物是miRNA‑3656。本发明专利技术通过QPCR证明了miRNA‑3656与绝经后骨质疏松的发生发展相关，同时本发明专利技术通过细胞实验证明了miRNA‑3656影响成骨细胞的分化，提示miRNA‑3656可作为分子靶标应用于绝经后骨质疏松的早期诊断和治疗。

Diagnostic and therapeutic markers of postmenopausal osteoporosis

The invention discloses a diagnostic and therapeutic marker for postmenopausal osteoporosis, which is microRNA3656. The invention proves that microRNA3656 is related to the occurrence and development of postmenopausal osteoporosis by QPCR. At the same time, the invention proves that microRNA3656 affects the differentiation of osteoblasts through cell experiments, suggesting that microRNA3656 can be used as a molecular target for early diagnosis and treatment of postmenopausal osteoporosis.

【技术实现步骤摘要】
绝经后骨质疏松的诊疗标志物
本专利技术属于生物医药领域，涉及绝经后骨质疏松的诊疗标志物，具体的该标志物为miRNA-3656。
技术介绍
绝经后骨质疏松症(postmenopausalosteoporosis，PMOP)是一类由雌激素缺乏引起的，以骨骼强度减弱为特点，可诱发骨折风险增加的全身性的骨代谢疾病。骨形成与骨吸收之间藕合的动态平衡是维持骨骼自身形态稳定的基础，当骨形成-骨吸收这一藕合的动态平衡被打破时，骨稳态就遭到破坏(EnsrudKE,CrandallCJ.Osteoporosis.Annalsofinternalmedicine2017；167(3}:Itc17-itc32.)。随着年龄逐渐增长或绝经后激素水平的迅速下降，以及其他因素导致骨形成的能力下降，同时伴随骨吸收上升，最终产生骨质疏松。PMOP常隐匿发病于绝经后妇女，脆性骨折是其最常见的临床并发症(EastellR,O`NeillTW,HofbauerLC,LangdahlB,ReidIR,GoldDT,etal.Postmenopausalosteoporosis.NaturereviewsDiseaseprimers2016；2:16069.)。骨折在非外伤或轻度外伤的情况下即可发生常累及髋骨、股骨和脊柱等部位并导致疼痛、畸形、功能障碍甚至死亡。这些并发症严重地影响中老年人的身体健康和生活质量，甚至缩短寿命(GamhaccianiM,LevanciniM.Managementofpostmenopausalosteoporosisandthenoonoffractures.Panminervamedica2014；56(2):115-131.)。因此，对PMOP进行早期诊断，早期预防，早期干预性治疗十分重要。骨重建是由骨吸收的破骨细胞和骨形成的成骨细胞协同调控。骨重建过程的主要功能细胞是破骨细胞和成骨细胞，二者经由多种信号通路影响着对方的分化、聚集和功能活动。成骨和破骨细胞之间协调有多种调控方式：雌激素调控如直接调节、旁分泌调节，非编码RNA调控如微小RNA、长链非编码RNA、环状RNA，氧化应激介导、CD4+T细胞调控以及肠道菌群调控等。近年来研究表明，在绝经后骨质疏松发生发展中miRNA表达谱明显异常，开拓了对绝经后骨质疏松研究的另一新的领地。据文献报道，现发现人类的miRNA已超过1000多种，调控着大约30％的人类基因。甲基化、基因组的丢失或扩增等可均导致miRNA在人类疾病中表达谱的异常。寻找与绝经后骨质疏松相关的miRNA标记物在临床上具有重要的诊断和治疗价值，目前关于miRNA在绝经后骨质疏松中的差异性表达研究较少，提供一种有效的分子标记物对于实现疾病的精准诊断和治疗具有重要的意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种miRNA诊疗标志物，该诊疗标志物为miRNA-3656。本专利技术的目的之二，提供一种诊断产品，实现绝经后骨质疏松的早期诊断。本专利技术的目的之三，提供一种治疗手段和治疗药物，实现绝经后骨质疏松的精准医疗和病人的个性化治疗。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了miRNA在制备诊断绝经后骨质疏松的产品中的应用，所述miRNA为miRNA-3656。进一步，所述产品通过测定miRNA-3656或其同源物的表达水平来诊断绝经后骨质疏松。进一步，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-3656或其同源物的水平以诊断绝经后骨质疏松的产品。miRNA-3656或其同源物在绝经后骨质疏松组织中呈高表达，当患者的miRNA-3656显著升高时，可以判断患者患绝经后骨质疏松。本专利技术提供了一种诊断绝经后骨质疏松的产品，所述产品能够通过检测miRNA-3656或其同源物的水平来诊断绝经后骨质疏松。进一步，所述产品包括芯片、阵列或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述的miRNA-3656的部分或全部序列。所述试剂盒包括用于检测miRNA-3656的表达水平的试剂。进一步，所述检测miRNA-3656表达水平的试剂包括针对miRNA-3656的引物和/或探针。所述试剂还包括针对现有技术中已经报道的诊断绝经后骨质疏松miRNA的引物和/或探针。将多种miRNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种miRNA指标联合诊断绝经后骨质疏松的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。进一步，针对miRNA-3656的引物的序列如SEQIDNO.2～3所示。本专利技术提供了miRNA-3656在制备治疗绝经后骨质疏松药物中的应用。进一步，所述药物包含miRNA-3656或其同源物的抑制剂。进一步，所述miRNA-3656的抑制剂是miRNA-3656或其同源物的反义寡核苷酸或拮抗剂。根据miRNA-3656序列设计出它的特异性反义寡核苷酸，将反义寡核苷酸转移到人体内后，它们能够明显下调miRNA-3656的表达。反义miRNA可包括总计5-100或10-60个核苷酸。反义miRNA还可包括总计为至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸。优选的，反义miRNA的序列可包括(a)至少5个与miRNA5′端完全相同的核苷酸以及至少5-12个与所述miRNA5′端靶位点的侧翼区完全互补的核苷酸，或(b)至少5-12个与所述miRNA3′端靶位点的侧翼区完全互补的核苷酸。根据miRNA-3656序列设计出它的拮抗剂，拮抗剂是经过特殊标记与化学修饰的单链小RNA，将拮抗剂转移到生物体后，能够高效阻断miRNA-3656的表达，下调miRNA-3656表达水平。本专利技术提供了一种治疗绝经后骨质疏松的药物，所述药物包括包含miRNA-3656或其同源物的抑制剂。所述的miRNA-3656抑制剂能够抑制miRNA-3656的表达或者能够抑制miRNA-3656的功能。所述miRNA-3656抑制剂的抑制靶标不限于miRNA-3656本身，还包括miRNA-3656的上下游，例如：编码miRNA-3656的基因组序列，miRNA-3656靶基因、调控miRNA-3656的蛋白或者基因。进一步，miRNA-3656抑制剂包括蛋白、寡核苷酸、小分子化合物。优选的，所述抑制剂是miRNA-3656或其同源物的反义寡核苷酸或拮抗剂。进一步，所述药物还包括药学上可接受的载体。所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体。所述药物可以制成包括但不限于显微注射剂、适于转染的剂型、注射液、片剂、粉剂、粒剂、胶囊剂。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。对于固体药物，可使用常规的无毒性固体药学上可接受的载体例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。例如，用于口服给药的固体药物可包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miRNA在制备诊断绝经后骨质疏松的产品中的应用，其特征在于，所述miRNA为miRNA‑3656。

【技术特征摘要】
1.miRNA在制备诊断绝经后骨质疏松的产品中的应用，其特征在于，所述miRNA为miRNA-3656。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品通过测定miRNA-3656或其同源物的表达水平来诊断绝经后骨质疏松。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-3656或其同源物的水平以诊断绝经后骨质疏松的产品。4.一种诊断绝经后骨质疏松的产品，其特征在于，所述产品能够通过检测miRNA-3656或其同源物的水平来诊断绝经后骨质疏松。5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，向常娟，
申请(专利权)人：固安博健生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13