一种呼吸道病毒快速检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于检测呼吸道病毒的胶体金法检测试纸。本发明专利技术所述试纸包括样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中硝酸纤维素膜包括由甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体、腺病毒抗体形成的检测区和抗鼠免疫球蛋白抗体形成的控制区。若样品中存在呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒(FluA)和乙型流感病毒(FluB)中任一种或其任意组合，该抗原将被硝酸纤维素膜检测区中固定化的相应抗体捕捉，因胶体金的作用形成紫红色条带。采用本发明专利技术的试纸可通过一次操作实现快速检测呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒，从而简化操作过程，实现快速检测的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道病毒快速检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及医学诊断领域，具体涉及一种多用途的呼吸道病毒快速检测试剂盒及其制备方法。专利技术背景目前已证明，95％的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病是由细菌外的病原引起，其中以呼吸道病毒最常见，包括呼吸道合胞病毒(RSV)A型、B型、腺病毒(ADV)、流感病毒A(FluA)、流感病毒B(FluB)、副流感病毒1(PIV1)、副流感病毒2(PIV2)、副流感病毒3(PIV3)、柯萨奇B组病毒等。其中，多种病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点，并且近来新的致病性病毒还在不断地被发现，如人类偏肺病毒、SARS病毒、高致病性禽流感病毒以及如今风靡全球的H1N1甲型流感病毒等，给临床疾病诊断和治疗造成极大的困难。呼吸道感染是世界范围内低龄儿童(<5岁)死亡的首位原因，每年可造成约5百万儿童死亡。儿童上呼吸道感染的患病次数平均为3-8次/年，下呼吸道感染率比URTI低，在1岁儿童中感染的比例约1～3％，学龄儿童至5％～10％。呼吸道病毒习惯上是指侵害呼吸道的病毒，至少涉及到8个科，200多种型别的病毒。临床常见的可导致呼吸道感染的病毒有腺病毒(AdV)、甲型/乙型流感病毒(FluA和FluB)和呼吸道合胞病毒(RSV)等。腺病毒(AdV)是一种没有包膜的直径为70～90nm的颗粒，线状双链DNA病毒。分为两个属，6个亚群(A-F)，包括51个血清型。腺病毒可通过人、水、媒介物和器械传播,室温条件下,腺病毒在污物中存在周期可延长至3周。腺病毒在儿童和军营人员中更易发生感染和大规模流行,大多数婴幼儿在出生后的5年内至少感染过1种腺病毒株。该病毒可导致肺炎、发热上呼吸道疾病、结膜炎、膀胱炎、肠胃炎等，根据感染者的免疫和心肺功能的不同可导致严重的呼吸窘迫甚至死亡。ADV感染全年散发，冬春季相对较多，阳性检出率最高可达15％。可从呼吸道分泌物标本、眼拭、咽拭或粪便中分离到病毒，也可采用IFT、RIA或ELISA等方法测定病毒抗原作出快速诊断，在病毒分离阳性的病人中阳性率为60％～65％，在感染后7天可出现中和抗体、血凝抑制抗体和补体结合抗体。用血清学方法测定抗体可明确诊断。甲型流感病毒和乙型流感病毒(FluA和FluB)主要包括内部的核心和外部的病毒囊膜，核心是由核蛋白卷曲包绕螺旋形RNA组成，核蛋白的抗原稳定，很少发生变异，具有型特异性。根据核蛋白抗原性的不同，将流感病毒分甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，三型病毒具有相似的生化和生物学特征。猪和禽类可携带甲型流感，乙、丙型流感仅在人之间转播。甲型和乙型流感的临床症状相似，但是甲型流感病毒导致的住院率四倍于乙型流感病毒。乙型流感通常有肌炎及胃肠道症状。丙型流感很少有下呼吸道症状，但偶尔会造成上呼吸道疾病。可引起急起高热、显著乏力，全身肌肉酸痛，而鼻塞、流涕和喷嚏等上呼吸卡他症状相对较轻。本病具有自限性，但在婴幼儿、老年人和存在心肺基础疾病的患者容易并发肺炎等严重并发症而导致死亡。一般出现于冬季，北半球通常在1、2月份达到高峰，南半球的流行时间较晚，热带地区可常年发病。世界性大流行常有2～3个流行波，一般流行3～4周会自然停止。世界卫生组织估计北半球每年1亿人感染流感，5000万次就诊，30万次住院，主要是高危人群和老年人，每年1万人死于流感，主要是虚弱的老年人。呼吸道合胞病毒(RSV)是一种RNA病毒，于1950年首先从实验室患上呼吸道感染的猩猩中分离而得，是有包膜的单股RNA病毒，直径为120～200nm，属于副粘病毒科的肺病毒属，仅有1个血清型。多见于新生儿和6个月以内的婴儿，可由空气飞沫和密切接触传播，潜伏期3～7日，传染性强。应用单克隆抗体可将RSV分为A、B两个亚型,有文献报道RSVA亚型感染起病急,病情重；B亚型感染病情相对较轻。RSV是世界各地婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的主要病原体之一，严重威胁婴幼儿健康，尤其是早产儿、先天性心脏病患儿、免疫缺陷的婴儿和儿童易发严重性RSV感染。从新生儿到成年人任何年龄组都会感染合胞病毒。婴幼儿症状较重，可有高热、鼻炎、咽炎及喉炎，以后表现为细支气管炎及肺炎。少数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎等。成人和年长儿童感染后，主要表现为上呼吸道感染。有研究表明RSV流行季节集中于每年的冬春季(11月至翌年3月，高峰出现在12月至翌年1月)，我国北京地、杭州、苏州及其他温带国家(如日本、美国)均一致，就诊的儿童患者阳性率可达42.50％。呼吸道病毒感染是临床最常见的疾病之一，且病原学复杂，精确的病原学分析不仅是确诊依据，也是合理选择治疗方案的基础。因此了解呼吸道病毒检测手段和开展快速病毒检测，已成为当务之急。临床目前对于病毒感染主要是检测机体对病毒产生的相关抗体，由于受机体免疫力等多种因素的影响而不能满足临床诊断需要。检测呼吸道感染主要病毒，目前国内外多采用病毒分离培养法、间接免疫荧光法(IF)、直接免疫荧光法、碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标法(APAAP)、生物素-链霉亲和素-过氧化物酶法、酶联免疫吸附法(ELISA)、病毒快速检测法、分子生物学法，如多重逆转录聚合酶链反应(mRT-PCR)、巢式PCR及核酸杂交、多重实时PCR、基因芯片技术、悬浮阵列技术等多种检测手段。但是上述检测方法均需要特殊的仪器设备和专业培训人员，并且在实验室才能进行检测，费用高昂、操作复杂，耗时长，不适于临床筛查，更不适宜于现场即时检测。例如病毒培养是病毒检测的金标准，但这种检测方法周期很长，一般要3～7天的时间，灵敏度不高。RT-PCR能够4-8小时内对样本实现检测，且灵敏度和特异性很高，但是并不适于在机场、口岸、火车站、医院等人口密度大、人流量大、不易让人群长时间聚集的公共场所。因此，目前临床上急需建立一种快速、简便、高效，能够一次同时鉴定多种病毒并能广泛推广的快速呼吸道病毒检测方法。
技术实现思路
针对现有检测技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于检测呼吸道病毒的胶体金法检测试纸及其制备方法。采用本专利技术的试纸条或试剂盒，可通过一次操作实现快速检测呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒(FluA)和乙型流感病毒(FluB)，从而简化操作过程，实现快速检测的目的。本专利技术所述用于检测呼吸道病毒的胶体金法检测试纸，所述试纸包括样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸顺次搭接粘贴在底板上，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区、包被有乙型流感病毒抗体的检测区、包被有呼吸道合胞病毒抗体的检测区、包被有腺病毒抗体的检测区和包被有抗鼠免疫球蛋白抗体的控制区，所述胶体金颗粒标记物包括胶体金标记抗腺病毒抗体、胶体金标记抗呼吸道合胞病毒抗体、胶体金标记甲型流感病毒抗体和胶体金标记乙型流感毒抗体。本专利技术所述的胶体金法检测试纸的原理为：将待测样品滴入检测试剂板的样品垫后，玻璃纤维膜上的胶体金颗粒标记物被溶解。若样品中存在呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒(FluA)和乙型流感病毒(FluB)中任一种或其任意组合，则胶体金颗粒标记物分别与样品中的相应病毒抗原形成免疫复合体。该免疫复合体因毛细管作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测呼吸道病毒的胶体金法检测试纸，所述试纸包括样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸顺次搭接粘贴在底板上，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区、包被有乙型流感病毒抗体的检测区、包被有呼吸道合胞病毒抗体的检测区、包被有腺病毒抗体的检测区和包被有抗鼠免疫球蛋白抗体的控制区，所述胶体金颗粒标记物包括胶体金标记抗腺病毒抗体、胶体金标记抗呼吸道合胞病毒抗体、胶体金标记甲型流感病毒抗体和胶体金标记乙型流感毒抗体。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测呼吸道病毒的胶体金法检测试纸，所述试纸包括样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，其中样品垫、含有胶体金颗粒标记物的玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸顺次搭接粘贴在底板上，所述硝酸纤维素膜包括包被有甲型流感病毒抗体的检测区、包被有乙型流感病毒抗体的检测区、包被有呼吸道合胞病毒抗体的检测区、包被有腺病毒抗体的检测区和包被有抗鼠免疫球蛋白抗体的控制区，所述胶体金颗粒标记物包括胶体金标记抗腺病毒抗体、胶体金标记抗呼吸道合胞病毒抗体、胶体金标记甲型流感病毒抗体和胶体金标记乙型流感毒抗体。2.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：检测区固定的抗体与相对应同一病毒的胶体金标记的抗体为不同的抗体。3.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：检测试纸中玻璃纤维膜上的胶体金标记抗腺病毒抗体、胶体金标记抗呼吸道合胞病毒抗体、胶体金标记甲型流感病毒抗体和胶体金标记乙型流感毒抗体的用量分别为25-45μg/cm2。4.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：检测试纸中硝酸纤维素膜上检测区含有的甲型流感病毒抗体、乙型流感病毒抗体、呼吸道合胞病毒抗体和腺病毒抗体的用量为0.1-0.5μg/mm。5.根据权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：检测试纸中硝酸纤...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈健，陈功祥，吴寰宇，朱国刚，姜晨彦，
申请(专利权)人：上海市疾病预防控制中心，杭州创新生物检控技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31