短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）的发酵方法技术

本发明专利技术公开了短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的发酵方法。本发明专利技术提供的短小芽孢杆菌的发酵方法包括将短小芽孢杆菌接种至pH为7‑9的培养基中，得到发酵前液；将发酵前液在发酵温度为26‑34℃和转速为170‑230rpm的条件下进行发酵培养，得到短小芽孢杆菌发酵液，实现短小芽孢杆菌的发酵；所述培养基为能用于培养短小芽孢杆菌的培养基。实验证明，本发明专利技术提供的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的发酵方法较基础发酵工艺中该菌的生物量提高了431.23％。本发明专利技术解决现有短小芽孢杆菌培养基中生物量较低的不足，为短小芽抱杆菌菌株工业化生产和获得高产菌剂提供技术支撑和理论指导。

Fermentation of Bacillus pumilus

The invention discloses a fermentation method of Bacillus pumilus. The fermentation method of Bacillus pumilus provided by the invention includes inoculating Bacillus pumilus into a medium with pH of 7_9 to obtain the pre-fermentation liquid, fermenting the pre-fermentation liquid at the fermentation temperature of 26_34 C and the rotating speed of 170_230rpm to obtain the fermentation liquid of Bacillus pumilus to realize the fermentation of Bacillus pumilus, and the medium is suitable for the cultivation of small-sized Bacillus pumilus. Bacillus media. The experiment proves that the fermentation method of Bacillus pumilus provided by the present invention increases the biomass of the bacillus by 431.23% compared with the basic fermentation process. The invention solves the shortage of low biomass in the existing culture medium of Bacillus pumilus, and provides technical support and theoretical guidance for industrialized production of Bacillus pumilus strains and obtaining high-yielding bacterial agents.

【技术实现步骤摘要】
短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)的发酵方法
本专利技术涉及微生物发酵工艺
中，短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)的发酵方法。
技术介绍
微生物发酵受诸多因素的影响，微生物发酵的生产水平取决于生产菌的特性和发酵条件(包括培养基)，其中发酵条件对微生物发酵产物的形成有很大的影响。短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)为芽孢杆菌科、芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6-0.7μm×2.0-3.0μm，呈革兰氏阳性，能产生热稳定的内生芽孢，抗逆能力强，可抑制多种病原真菌、细菌，抗菌谱广泛。可防治小麦根腐病、草莓灰霉病、黄瓜枯萎病、棉花黄萎病等。也是一种饲用微生物菌种，适用于畜类、禽类、反刍动物，也适用于鱼、虾等水产动物。国家鼓励和倡导植物病害防治要向绿色环保方向进行，微生物菌剂广泛用于生物防治，因此短小芽孢杆菌具有开发为农用菌剂的潜力，极具开发价值。但目前其存在繁殖能力有限、生长速度缓慢等问题，严重制约了短小芽孢杆菌的工业化生产及应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何提高发酵中短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)的生物量。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)发酵方法，所述方法包括：将Bacilluspumilus接种至pH为7-9的培养基中，得到发酵前液；将所述发酵前液在发酵温度为26-34℃和转速为170-230rpm的条件下进行发酵培养，得到Bacilluspumilus发酵液，实现Bacilluspumilus的发酵；所述培养基为能用于培养Bacilluspumilus的培养基。上述方法中，所述培养基可为基础培养基，所述基础培养基由溶质和水组成，溶剂及其在所述基础培养基中的浓度分别为葡萄糖1.5g/100mL，牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨1.5g/100mL，NaCl0.5g/100mL。所述培养基的pH可为7-9。进一步，所述培养基的pH可为7-8。更进一步，所述培养基的pH可为7。上述方法中，所述发酵培养温度可为30-34℃。进一步，所述发酵培养温度可为34℃。上述方法中，所述将Bacilluspumilus接种至pH为7-9的培养基中包括将Bacilluspumilus的种子液接种至所述培养基中，得到所述发酵前液；所述种子液按照包括如下步骤的方法制备：将Bacilluspumilus接种至所述培养基中进行培养得到所述种子液。上述方法中，在制备种子液时的培养温度可为30℃。在制备种子液时可在摇床转速为170rpm的条件下进行。在制备种子液时的培养时间可为24h后。上述方法中，所述发酵前液中所述种子液的体积比可为0.5-3％。所述发酵前液中所述种子液的体积比进一步可为1-3％。更进一步，所述发酵前液中所述种子液的体积比可为2-3％，如2.17％。上述方法中，所述发酵培养的时间可为36-42小时。进一步，所述发酵培养的时间可为41-42小时，如41.61小时。上述方法中，所述发酵培养在容器中进行，所述发酵前液的体积与所述容器的容积比可为(80-140)：250。进一步，所述发酵前液的体积与所述容器的容积比可为(95-110)：250，如95.46:250。所述容器具体可为三角瓶。上述方法中，所述转速可为170-230rpm。进一步，所述转速可为200-230rpm。更进一步，所述转速可为230rpm。所述发酵在所述摇床中进行，所述转速为所述摇床的工作转速。所用摇床可为上海和呈仪器制造有限公司HS-200B摇床。所述短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)发酵方法在制备Bacilluspumilus菌剂中的应用，也属于本专利技术的保护范围。实验证明，本专利技术提供的短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)的发酵方法较基础发酵工艺中该菌的生物量提高了431.23％。本专利技术解决现有短小芽孢杆菌培养基中生物量较低的不足，为短小芽抱杆菌菌株工业化生产和获得高产菌剂提供技术支撑和理论指导。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中的发酵培养均在无菌条件下进行。下述实施例中的短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)为文献(周达，乌拉尔甘草内生菌的分离、典型菌种的生物学功能及抗逆特性的研究，宁夏医科大学硕士研究生学位论文，2016)中的G5短小芽孢杆菌，公众可从申请人处获得该生物材料，该生物材料只为重复本专利技术的相关实验所用，不可作为其它用途使用。下述实施例中所用摇床为上海和呈仪器制造有限公司HS-200B摇床。实施例1、利用Bacilluspumilus发酵方法培养Bacilluspumilus预实验：对筛选得到的Bacilluspumilus的发酵液进行全波长扫描，在OD275处有最大吸收峰，因此下文测定发酵液的浓度时采用波长275nm处的OD值进行测定。下文均对发酵液稀释100倍时进行比较分析。一、发酵过程中最佳单因素的确定1、最佳接种量将Bacilluspumilus接种在pH为7的牛肉膏蛋白胨培养基中，在温度为30℃、摇床转速为170rpm的条件下培养24h后，得到种子液。下文发酵培养所用培养基均为基础培养基，基础培养基由溶质和水组成，溶剂及其在基础培养基中的浓度分别为葡萄糖1.5g/100mL，牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨1.5g/100mL，NaCl0.5g/100mL，基础培养基的pH根据不同的实验需要利用HCl或NaOH进行调节。将种子液分别按照不同接种量(即移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例)接种至装有250mLpH为7的培养基的容量为250mL的三角瓶中，得到发酵前液。接种量设置为0.5％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％。接种后，将各三角瓶均置于温度为30℃、摇床转速为170rpm的条件下发酵培养24h，得到不同接种量的发酵液。测定各发酵液在275nm下的OD值，接种量为0.5％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％、4.5％、5.0％时的发酵液的OD275值分别为0.432、0.431、0.420、0.467、0.421、0.422、0.418、0.416、0.386、0.383。结果显示，接种量为2.0％时的OD275值最大。2、最佳装液量将步骤1的种子液按照2.0％接种量接种至pH为7的培养基中得到发酵前液，将发酵前液按照不同的装液量装至容量为250mL的三角瓶中，装液量分别为50mL、80mL、110mL、140mL、170mL、200mL和230mL，即发酵前液的体积与容器的容积比分别为50/250、80/250、110/250、140/250、170/250、200/250、230/250。然后将各装有发酵前液的三角瓶分别置于温度为30℃、摇床转速为170rpm的条件下发酵培养24h，得到不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Bacillus pumilus发酵方法，包括：将Bacillus pumilus接种至pH为7‑9的培养基中，得到发酵前液；将所述发酵前液在发酵温度为26‑34℃和转速为170‑230rpm的条件下进行发酵培养，得到Bacillus pumilus发酵液，实现Bacillus pumilus的发酵；所述培养基为能用于培养Bacillus pumilus的培养基。

【技术特征摘要】
1.Bacilluspumilus发酵方法，包括：将Bacilluspumilus接种至pH为7-9的培养基中，得到发酵前液；将所述发酵前液在发酵温度为26-34℃和转速为170-230rpm的条件下进行发酵培养，得到Bacilluspumilus发酵液，实现Bacilluspumilus的发酵；所述培养基为能用于培养Bacilluspumilus的培养基。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养基为基础培养基，所述基础培养基由溶质和水组成，溶剂及其在所述基础培养基中的浓度分别为葡萄糖1.5g/100mL，牛肉膏0.5g/100mL，蛋白胨1.5g/100mL，NaCl0.5g/100mL，所述基础培养基的pH为7-9。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述培养基的pH为a1)或a2)：a1)7-8；a2)7。4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述发酵培养温度为b1)或b2)：b1)30-34℃；b2)34℃。5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述将Bacilluspumilus接种至pH为7-9的培养基中包括将Bac...

【专利技术属性】
技术研发人员：张新慧，张晓佳，张文晋，郎多勇，余霞霞，张瑜，吴秀丽，余建强，付雪艳，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：宁夏,64