基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法技术

本发明专利技术提供一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法，所述方法包括：首先筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，然后利用液相色谱串联质谱法测定待测血制品中的特征多肽，并与食用动物血制品中各个物种的专属性多肽进行比对，根据保留时间、丰度信息及子离子的匹配度，从而判定对应的动物组分。本发明专利技术基于高效液相色谱‑串联质谱技术，结合筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，建立了鉴别食用动物血制品的方法，该方法可同时鉴别食用动物血制品中的多种动物组分，并且可以区分全血制品与非全血制品。经验证该方法可以实现对食用动物血制品的准确鉴别，是一种灵敏、稳定、特异、高通量、操作性强的分析方法。

【技术实现步骤摘要】
基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法
本专利技术涉及食品检测领域，尤其涉及一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法。
技术介绍
鸭血具有较高的营养价值，自古就有鸭血“解中生金、生银、砒霜诸毒”的说法；此外，鸭血含有较高的铁元素，一直被视为血红素铁的优质来源，被誉为“补血圣品”。但是，由于鸭血的产量较低，价格比较昂贵，因此市场上有些不良商家采用猪血、牛血、鸡血或羊血来滥竽充数，甚至是使用血粉来制作“人工鸭血”，这也被称为“经济利益驱使的掺假行为”。为了使“假鸭血”的外貌及口感做的像“真鸭血”，通常会将猪血等用福尔马林浸泡，然后添加明胶、色素以及添加剂等，这会对人体的肝脏和肾脏等造成伤害。因此，亟需建立一种快速、便捷、准确的检测方法，来维护市场秩序，保证消费者的安全。当前我国国家标准及相关检测标准是常采用聚合酶链反应(PCR)测定畜肉、禽肉以及饲料中的动物源性成分，但是PCR方法容易受到DNA降解，复杂基质的干扰和样品提取与扩增方法的影响，并且不能区分同一物种的全血制品和非全血制品。蛋白质组学是以物种专属性多肽作为标志物进行物种鉴别的一种方法，其中肽段是蛋白质中的一级结构，化学键更为稳定；并且可对同一物种的不同来源样品进行区别鉴定，如鸭肉和鸭血；此外液相色谱串联质谱的多反应监测模式(MRM)能够避免复杂基质的干扰，灵敏度高，准确性强，操作更为简便。因此，本专利技术旨在提供一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法。本专利技术提供一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法，包括：首先筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，然后利用液相色谱串联质谱法测定待测血制品中的特征多肽，并与血制品中各个物种的专属性多肽进行比对，根据保留时间、丰度信息及子离子的匹配度，从而判定对应的动物组分。上述技术方案中，基于高效液相色谱-串联质谱技术，结合筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，建立了鉴别食用动物血制品的方法，该方法可同时鉴别食用动物血制品中的多种动物组分，也可区分全血制品与非全血制品。从超市、市场等多渠道获取大批血制品，采用PCR方法进行辅助验证，最终证明该方法可以实现对食用动物血制品的准确鉴别。进一步地，所述筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽具体包括：利用高分辨质谱对各物种的血制品样品进行数据采集，并用蛋白质组学软件及Uniprot数据库进行数据分析，分别筛选出猪、牛、羊、鸡、鸭血制品的专属性多肽链；将得到的多肽链信息导入skyline软件中，创建适用于LC-MS/MS的MRM数据信息，并导入LC-MS/MS中，通过优化仪器条件，对样品信息进行数据采集及处理，筛选适用于LC-MS/MS的响应值高、稳定性好的多肽链及离子信息。这是本方法的关键之处，按照上述筛选方法，提高了血制品专属性多肽的筛选准确性、特异性及效率，使鉴别结果更准确，且能够一劳永逸，后续再进行检测时，可直接将待测血制品的特征多肽与之进行比对。进一步优选地，按照上述方法，筛选出鸭血和猪血的专属性多肽信息如下：表1鸭血和猪血的专属性多肽进一步地，所述利用液相色谱串联质谱法测定待测血制品前，先进行样品前处理，包括：蛋白变性提取、还原、烷基化、酶解和除盐等过程。进一步优选地，所述前处理具体包括：向样品加入提取液均质，取上清液，加入二硫苏糖醇溶液振荡反应，放至室温，加入碘乙酰胺溶液暗处反应，再加入二硫苏糖醇溶液暗处反应，待反应完成后，加入Tris-HCl缓冲溶液，混匀，加入胰蛋白酶于37℃水浴中反应，酶解反应结束后，取出静置至室温，调节pH小于2终止反应，除盐，收集滤液，过滤膜待测。进一步优选地，利用高效液相色谱-串联质谱仪检测待测血制品时，色谱条件：色谱柱HypersilGOLDC18(2.1mm×100mm，1.9μm)；流速0.2mL/min；柱温40℃，进样量20μL；流动相：A相0.1％FA/H2O，B相0.1％FA/ACN，色谱梯度为：0～0.2min，3％～10％B；0.2～16min，10％～40％B；16～17min，40％～80％B；17～17.5min，80％B；17.5～18.5min，80％～3％B；18.5～25min，3％B。质谱条件：喷雾电压3500V；鞘气38Arb；辅气15Arb；离子传输管温度275℃；离子源雾化温度380℃；离子源温度380℃；碰撞气为1.5mTorr；Q1和Q3分辨率均为0.7。进一步地，所述食用动物血制品中动物成分来自猪、牛、羊、鸡和鸭中的一种或多种。进一步地，当所述待测血制品的特征多肽与食用动物血制品中某个物种的专属性多肽有至少3条吻合时，则判定待测血制品中含有该动物组分。其中所述吻合指多肽的保留时间的偏差在±2.5％以内，且相对离子丰度的最大偏差符合表2规定，各个子离子完全匹配。表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/％＞50＞20～50＞10～20＜10允许的最大偏差/％±20±25±30±50进一步地，判定待测血制品中只含有一种动物组分后，将所述待测血制品的特征多肽与该动物组分标准肉样的专属性多肽进行比对，判定待测血制品是否为全血制品。根据《食用动物血制品质量安全标准》中所述，食用动物血制品包括全血制品和非全血制品，其中全血制品的原料全部为食用畜禽血液，非全血制品则是用食用畜禽血液为原料，混合畜禽肉或舌、皮、脂肪以及蔬菜味辅助材料。由于动物肉与动物血液中所含有的多肽的种类不同，因此可通过测定多肽的种类进行区分，其中动物肉样的专属性多肽可根据现有技术获得。当测出含有动物肉样的专属性多肽时，则说明待测血制品为非全血制品。同理，若测出含有动物皮、舌或其它组织的专属性多肽，也能说明待测血制品为非全血制品。本专利技术基于高效液相色谱-串联质谱技术，结合筛选出食用动物血制品中各个物种的专属性多肽，建立了鉴别食用动物血制品的方法，该方法可同时鉴别食用动物血制品中的多种动物组分，也可区分全血制品与非全血制品。经验证该方法可以实现对食用动物血制品的准确鉴别，是一种灵敏、稳定、特异、高通量、操作性强的分析方法。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1中猪的总离子流图和提取离子流图；图2为本专利技术实施例1中鸭的总离子流图和提取离子流图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本实施例提供一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品(人为的将猪血混入至鸭血中)的方法，包括以下步骤：(1)鸭血和猪血专属性多肽的筛选：利用高分辨质谱分别对纯猪血和纯鸭血进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法，其特征在于，包括：首先筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，然后利用液相色谱串联质谱法测定待测血制品中的特征多肽，并与食用动物血制品中各物种的专属性多肽进行比对，根据保留时间、丰度信息及子离子的匹配度，从而判定对应的动物组分。

【技术特征摘要】
1.一种基于液相色谱串联质谱法鉴别食用动物血制品的方法，其特征在于，包括：首先筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，然后利用液相色谱串联质谱法测定待测血制品中的特征多肽，并与食用动物血制品中各物种的专属性多肽进行比对，根据保留时间、丰度信息及子离子的匹配度，从而判定对应的动物组分。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述筛选出食用动物血制品中各物种的专属性多肽，具体包括：利用高分辨质谱对各物种的血制品样品溶液进行数据采集，并用蛋白质组学软件和Uniprot数据库进行数据分析，分别筛选了猪、牛、羊、鸡、鸭血制品的专属性多肽链；将得到的多肽链信息导入skyline软件中，创建适用于LC-MS/MS的MRM数据信息，并导入LC-MS/MS中，通过优化仪器条件，对样品信息进行数据采集及处理，筛选适用于LC-MS/MS的响应值高、稳定性好的多肽链及离子信息。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用液相色谱串联质谱法测定待测血制品前，先进...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖颖，李莹莹，王守伟，郭文萍，郭超，马燕红，赵文涛，李石磊，李志刚，李慧晨，赵奕昕，
申请(专利权)人：中国肉类食品综合研究中心，
类型：发明
国别省市：北京,11