一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法技术

本发明专利技术公开了一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，包括以下步骤：(1)取待评价制剂，和内标样品一起制成待测溶液，然后重复进样UPLC‑QTOF‑MS系统；(2)在正负离子模式下，采集数据，然后进行批量归一化分析；(3)利用上述处理的数据文件，通过数据库搜索和分子匹配生成化合物信息；(4)对于多元数据分析，通过提取的数据文件，从质量、保留时间和峰值区域的角度，利用分析软件对待评价制剂进行判别分类；(5)进行化学成分半定量分析，结合以上结果进行化合物鉴定。该方法可作为中药制剂全组分，全药味系统质量控制和评价切实可行的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法
本专利技术公开了一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，属于中药制剂质量评价

技术介绍
目前，中药制剂质量标准的建立,基本上是采用建立中药或制剂中某一(或某些)成分定性或定性和定量分析的模式。选定其中的“有效成分”、“活性成分”或“指标成分”，借鉴化学药品和国外植物药的质量控制方法和手段，建立该中药或制剂相应的鉴别和含量测定方法，包括理化鉴别、光谱、色谱鉴别及含量测定，近些年发展起来的指纹图谱技术、“一测多评”分析方法也取得了一定进展。这些中药分析方法和质量控制标准被逐步推广，并得到提高和改进。但总体而言，中药及其制剂化学成分与有效成分的多样性、复杂性以及相互间的协同作用，决定了以单一或少数成分为指标难以准确、全面地表达中药的内在质量，这些分析方法及质量标准尚未能较好体现传统中医的整体观，体现中药及其制剂多成分、多层次、多靶点的复杂特性，以及发挥药效的整体协同作用。例如，银翘散为中国清代医家吴鞠通的名方，由金银花、连翘、薄荷、荆芥、牛蒡子、桔梗、淡豆豉、甘草、淡竹叶9味药组成，具有辛凉解表、清热解毒的功效，主要用于治疗流行性感冒、手足口病、咽喉炎、肺炎、急性扁桃腺炎、麻疹、流行性腮腺炎等病毒性感染疾病，是中医临床广泛使用且疗效确切的中药方剂之一。以银翘散为基础方，演变发展而来的一类中药制剂，统称为银翘类制剂[3]，如银翘解毒片、银翘解毒丸、银翘解毒胶囊、银翘解毒颗粒等十多种不同剂型的制剂被广泛使用，这些制剂处方、功能主治均与银翘散汤剂相同，但生产厂家众多，生产工艺、所用辅料不尽相同，质量标准各异，加之原料药材来源、品种、产地、采收、加工炮制均不同，其化学成分及临床疗效因受各种因素影响也确有不同，因此如何建立银翘散这类中药制剂科学的质量标准成为当前研究的重要课题。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术目的是公开一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，该方法可作为中药制剂全组分，全药味系统质量控制和评价切实可行的方法。技术方案：为达到上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，包括以下步骤：(1)取待评价制剂，和内标样品一起制成待测溶液，然后重复进样UPLC-QTOF-MS系统；(2)在正负离子模式下，采集数据，然后进行批量归一化分析；(3)利用上述处理的数据文件，通过数据库搜索和分子匹配生成化合物信息；(4)对于多元数据分析，通过提取的数据文件，从质量、保留时间和峰值区域的角度，利用分析软件对待评价制剂进行判别分类；(5)进行化学成分半定量分析，通过已知内标的浓度及特征，将其它化合物特征与峰值与内标比较，从而得到半定量分析结果。优选，包括以下步骤：(1)取待评价制剂，和内标样品一起制成待测溶液，然后重复进样UPLC-QTOF-MS系统；(2)在正负离子模式下，首先运用数据采集软件AgilentMassHunter定性分析软件，然后使用AgilentProfinder软件进行批量归一化分析；(3)将每一种剂型新的数据文件导入到Agilent专业(MPP)软件中，用于METLINAM数据库搜索和分子匹配生成化合物信息；(4)对于多元数据分析，通过Profinder软件提取的数据文件，从质量、保留时间和峰值区域的角度，导入MetaboAnalyst分析软件，分别选用PCA、PLS-DA、OPLS-DA3种模式识别方法对待评价制剂进行判别分类；(5)MassHunter定量分析软件用于化学成分半定量分析，通过已知内标的浓度及特征，将其它化合物特征与峰值与内标比较，从而得到半定量分析结果。进一步优选：步骤(2)的方法为：由Profinder软件的每个分子特性提取的数据文件和相应的数据文件由MassHunter数据采集软件导入到AgilentMassHunter定性分析软件中，提取一级、二级质谱数据，及保留时间等数据。步骤(5)中MassHunter定量分析软件用于化学成分半定量分析的方法为：每一组数据的化合物信息及其相应的原始文件上传到MassHunter定量分析软件，所有的特征化合物都显示在软件上，设置保留时间窗口，通过已知内标的浓度及特征，将其它化合物特征与峰值与内标比较，从而得到半定量分析结果。所述待评价制剂为利用中草药原料所制成的制剂。优选，所述待评价制剂为银翘类中药制剂。进一步优选，所述待评价制剂为银翘散汤剂、银翘散配方颗粒、银翘解毒丸和银翘解毒片。本专利技术基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，尤其适用于中药制剂的质量评价，本专利技术以中医临床常用的银翘类制剂(银翘散汤剂、银翘散配方颗粒、银翘解毒片、银翘解毒丸)为研究对象，运用代谢组学及稳定同位素分析技术，采用LC-QTOFMS/MS现代分析手段，进行模式识别、全域扫描以及大数据分析的方法，对不同银翘类制剂化学成分进行定性与半定量分析，对化学信息进行综合评价，从而以银翘类制剂为例，构建中药及其制剂质量控制评价体系新模式，以体现中医整体观要求，体现中药及其制剂多组分、多靶点发挥药效的整体协同作用，推进中药制剂质量标准现代化和国际化，从而指导临床用药。技术效果：相对于现有技术，本专利技术方法可作为中药制剂全组分，全药味系统质量控制和评价切实可行的方法，有利于尽快阐明中药“多组分”对复杂生物系统“多靶点、整体调节”作用的科学内涵，构建中药复方制剂多维结构的质量控制评价体系，并可广泛应用于不同产地、不同采收季节、不同药用部位中药材的质量评价，以及用不同炮制方法加工的中药饮片质量控制与标准研究，该方法的应用与推广将有利于指导创新药物研发，指导临床合理用药，推进中药质量标准的统一化和国际化。附图说明图1：银翘散四种剂型样品LC-QTOFMS/MSTIC色谱图--正离子模式(A-E)、负离子模式(F-J)；图2：银翘散四种剂型样品6种指标性成分EIC图(IS浓度为1.69μM)；图3：银翘散四种剂型样品VennDiagram图；图4：银翘散四种剂型样品PCA(A)、PLS(B)、OPLS(C)图。具体实施方式下面结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细的说明。实施例1.材料与方法1.1试药氢氧化铵与醋酸购于美国Sigma-Aldrich公司，乙腈与甲醇为色谱纯购于美国FisherScientific公司，超纯水由Barnstead净化系统制得，(美国ThermoScientific公司)，电阻率为18.2MΩ-cm，内标Etoposide-d3购于加拿大TorontoResearchChemicals公司。银翘散汤剂复方饮片购于江苏省中医院，经朱育凤主任中药师鉴定为金银花(批号：150320)；连翘(批号：150718)；薄荷(批号：150701)；荆芥(批号：150313)；牛蒡子(批号：150601)；桔梗(批号150601)；淡豆豉(批号：150401)；甘草(批号：150701)；淡竹叶(批号：150302)。银翘散配方颗粒购自南京中医药大学附属医院中药房，由中国江阴天江药业有限公司生产。炒牛蒡子(批号：1411156)；连翘(批号：1501092)；金银花(批号：1503112)；桔梗(批号：150本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待评价制剂，和内标样品一起制成待测溶液，然后重复进样UPLC‑QTOF‑MS系统；(2)在正负离子模式下，采集数据，然后进行批量归一化分析；(3)利用上述处理的数据文件，通过数据库搜索和分子匹配生成化合物信息；(4)对于多元数据分析，通过提取的数据文件，从质量、保留时间和峰值区域的角度，利用分析软件对待评价制剂进行判别分类；(5)进行化学成分半定量分析，通过已知内标的浓度及特征，将其它化合物特征与峰值与内标比较，从而得到半定量分析结果。

【技术特征摘要】
1.一种基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待评价制剂，和内标样品一起制成待测溶液，然后重复进样UPLC-QTOF-MS系统；(2)在正负离子模式下，采集数据，然后进行批量归一化分析；(3)利用上述处理的数据文件，通过数据库搜索和分子匹配生成化合物信息；(4)对于多元数据分析，通过提取的数据文件，从质量、保留时间和峰值区域的角度，利用分析软件对待评价制剂进行判别分类；(5)进行化学成分半定量分析，通过已知内标的浓度及特征，将其它化合物特征与峰值与内标比较，从而得到半定量分析结果。2.根据权利要求1所述的基于代谢组学与全成分半定量分析的中药制剂质量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待评价制剂，和内标样品一起制成待测溶液，然后重复进样UPLC-QTOF-MS系统；(2)在正负离子模式下，首先运用数据采集软件AgilentMassHunter定性分析软件，然后使用AgilentProfinder软件进行批量归一化分析；(3)将每一种剂型新的数据文件导入到Agilent专业(MPP)软件中，用于METLINAM数据库搜索和分子匹配生成化合物信息；(4)对于多元数据分析，通过Profinder软件提取的数据文件，从质量、保留时间和峰值区域的角度，导入MetaboAnalyst分析软件，分别选用PCA、PLS-DA、OPLS-DA3种模式识别方法对待评价制剂进行判别分类；(5...

【专利技术属性】
技术研发人员：束雅春，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32