【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物细胞分化，具体涉及一种禽类无血清成脂诱导分化培养基及诱导方法及应用。
技术介绍
1、细胞培育肉是通过提取动物干细胞，在体外进行增殖和定向分化，进而收集后加工而成的一种产品。脂肪是肉类的主要组成部分之一，对细胞培育肉的质地、口感和口腔感受起着关键作用。首先，脂肪细胞可以提供肉类的丰满感和口感。脂肪细胞中的脂滴可以赋予肉类多汁的特点，使其更加可口。此外，脂肪细胞还可以影响肉类的黏度和口腔感受，使其更接近传统肉类的口感。另外，脂肪细胞也对细胞培育肉的营养特性至关重要。
2、脂肪对禽类的健康和生理功能有着重要的影响。首先，脂肪在禽类中起到能量储存和供能的作用。脂肪还为禽类提供保护和绝缘，可以帮助禽类在寒冷环境中保持体温稳定。在禽类食品生产中，脂肪对于产品的品质和口感也非常重要。适量的脂肪可以赋予禽肉丰富的口感和风味，并使其更加多汁和美味。
3、脂肪细胞分化是指未分化的脂肪前体细胞转变为成熟的脂肪细胞的过程。这一过程对于正常的脂肪组织发育和功能的实现至关重要。首先，脂肪细胞分化是脂肪组织形成和增长的关键步骤。在脂肪细胞分化过程中，脂肪前体细胞会经历细胞增殖、细胞周期调控和细胞分化等多个阶段，最终分化成成熟的脂肪细胞。这些成熟的脂肪细胞可以合成和储存脂肪，形成脂肪组织，并对能量代谢和内分泌功能产生影响。
4、血清在细胞培养中常被用作细胞增殖与分化培养基的组分之一，它含有多种生长因子、营养物质和细胞外基质成分，可以提供对细胞生长和分化所需的支持。然而，血清在细胞培养中也存在一些潜在的风险和
5、禽类的脂肪主要是在肝脏合成，体外脂肪细胞的从头合成能力差，因此传统的哺乳动物使用的鸡尾酒法（胰岛素，地塞米松，ibmx）诱导效果很差，几乎没有脂滴产生。禽类脂肪细胞体外分化需要加入外源脂肪酸。目前普遍使用的禽类的脂肪前体细胞诱导分化的培养基配方是基础培养基加入10%胎牛血清和油酸。但是该培养基由于胎牛血清的添加，导致化学成分不明确，存在不同批次培养基成分不稳定，易存在病毒等病原体污染，成本昂贵等问题。此外分化效果差，不稳定。这使得无法使用该培养基大规模高效、稳定、廉价地生产细胞培养肉，阻碍了细胞培养肉产业化的进程。
6、因此，急需开发一种化学成分明确的、廉价的、高效的无血清成脂诱导分化培养基，解决目前因分化效率低和重复性差而阻碍细胞培养肉产业化进程的问题。
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述问题，本专利技术提供一种禽类无血清成脂诱导分化培养基及诱导方法，以解决现有细胞成脂分化技术因效率低和重复性差而阻碍细胞培养肉产业化进程的。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种禽类无血清成脂诱导分化培养基，由基础培养基和细胞培养辅助因子组成，所述细胞培养辅助因子由5~10 μg/ml的胰岛素、100~200 μmol/l的油酸钠、10~50 μmol/l的亚油酸、5~10 μg/ml的转铁蛋白、0.5%~1%体积百分比的必需氨基酸添加剂、0.05~0.1mmol/l的非必需氨基酸添加剂、1~2 mmol/l的glutamax™ 添加剂组成。
4、本专利技术的目的是提供一种用于脂肪前体细胞体外成脂诱导分化的化学成分明确的改良细胞成脂诱导分化培养基，所述改良细胞成脂诱导分化培养基不含血清成分。所述无血清是指不添加有包括胎牛血清，小牛血清，鸡血清，鸭血清，马血清等任何动物血清成分，所述改良细胞成脂诱导分化培养基为添加有细胞培养辅助因子的脂肪前体细胞分化培养基，通过添加细胞培养辅助因子，替代传统脂肪前体细胞成脂诱导分化培养基中的血清成分；基础培养基中也不包含青霉素链霉素双抗溶液。
5、作为优选地，所述基础培养基为dmem、dmem/f12培养基中的一种。
6、作为优选地，所述必需氨基酸添加剂包括l-精氨酸、l-胱氨酸、l-组氨酸、l-异亮氨酸、l-亮氨酸、l-赖氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-苏氨酸、l-色氨酸、l-酪氨酸、l-缬氨酸。
7、作为优选地，所述非必需氨基酸添加剂包括l-丙氨酸、l-谷氨酸、l-天门冬酰胺、l-天门冬氨酸、l-脯氨酸、l-丝氨酸和甘氨酸。
8、采用上述任意一项所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基进行细胞成脂诱导分化的诱导方法，包括如下步骤：
9、（1）取禽类的脂肪前体细胞并体外培养，生长至汇合度80%以上，弃掉增殖培养基，并加入禽类无血清成脂诱导分化培养基，将加入分化培养基的当天记为0 d；
10、（2）诱导分化2~6 d实现禽类成脂诱导分化，诱导分化过程中，每隔1~2 d换一次分化培养基。
11、所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基在制备禽类生物培育肉过程中作为种子细胞的分化培养基的应用。
12、所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基在利用细胞分化法检验禽类种子细胞分化性能过程中作为检验试剂的应用。
13、综上所述，相比于现有技术，本专利技术具有如下优点及有益效果：
14、1、本专利技术提供的禽类无血清成脂诱导分化培养基，不含任何血清成分，化学成分明确，便于推进细胞培养肉的产业化进程；
15、2、本专利技术提供的禽类无血清成脂诱导分化培养基成脂分化效果好，经试验研究表明，采用本专利技术所述的改良细胞成脂诱导分化培养基对脂肪前体细胞进行体外诱导分化6d后，几乎所有细胞均出现脂滴，且细胞分化效率达到100%；
16、3、本专利技术提供了一种禽类通用的无血清成脂诱导分化培养基及诱导方法，对于禽类脂肪发育的机制的研究，细胞培育肉的制备具有重要意义。
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1.一种禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，由基础培养基和细胞培养辅助因子组成，所述细胞培养辅助因子由5~10 μg/mL的胰岛素、100~200 μmol/L的油酸钠、10~50 μmol/L的亚油酸、5~10 μg/mL的转铁蛋白、0.5%-1%体积百分比的必需氨基酸添加剂、0.05-0.1 mmol/L的非必需氨基酸添加剂、1-2 mmol/L的GlutaMAX™ 添加剂组成。
2.如权利要求1所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，所述基础培养基为DMEM、DMEM/F12培养基中的一种。
3.如权利要求1所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，所述必需氨基酸添加剂包括L-精氨酸、L-胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸。
4.如权利要求1所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，所述非必需氨基酸添加剂包括L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天门冬酰胺、L-天门冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸。
5.采用如
6.如权利要求1~4任意一项所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基在制备禽类生物培育肉过程中作为种子细胞的分化培养基的应用。
7.如权利要求1~4任意一项所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基在利用细胞分化法检验禽类种子细胞分化性能过程中作为检验试剂的应用。
8.如权利要求1~4任意一项所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基在利用体外细胞分化研究脂肪发育机理的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，由基础培养基和细胞培养辅助因子组成，所述细胞培养辅助因子由5~10 μg/ml的胰岛素、100~200 μmol/l的油酸钠、10~50 μmol/l的亚油酸、5~10 μg/ml的转铁蛋白、0.5%-1%体积百分比的必需氨基酸添加剂、0.05-0.1 mmol/l的非必需氨基酸添加剂、1-2 mmol/l的glutamax™ 添加剂组成。
2.如权利要求1所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，所述基础培养基为dmem、dmem/f12培养基中的一种。
3.如权利要求1所述的禽类无血清成脂诱导分化培养基，其特征在于，所述必需氨基酸添加剂包括l-精氨酸、l-胱氨酸、l-组氨酸、l-异亮氨酸、l-亮氨酸、l-赖氨酸、l-蛋氨酸、l-苯丙氨酸、l-苏氨酸、l-色...
【专利技术属性】
技术研发人员：王守伟，梁小娟，李雨爽，李莹莹，李石磊，时宏霞，唐铎，
申请(专利权)人：中国肉类食品综合研究中心，
类型：发明
国别省市：
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