用于检测实蝇Idgf4基因表达量的引物对制造技术

本发明专利技术公开了用于检测实蝇Idgf4基因表达量的引物对。本发明专利技术公开的引物对由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成。实验证明，本发明专利技术提供的用于检测实蝇Idgf4基因表达量的引物对可以特异、快速、准确地对橘小实蝇和番石榴果实蝇的Idgf4基因进行定量检测，可用于实蝇Idgf4基因干扰效率的评价。另外，定量检测解决了同一基因在不同实蝇之间表达量的比较问题，并且操作方便、快捷、成本低。本发明专利技术还能够为Idgf4基因的研究和实蝇的防治提供工具及相关靶点，对实蝇的防治具有重要的意义，并为有效控制危险性实蝇的扩散、保护农业生产和生态安全、促进我国经济贸易发展提供潜在靶标基因参考。

【技术实现步骤摘要】
用于检测实蝇Idgf4基因表达量的引物对
本专利技术涉及生物
中，用于检测实蝇Idgf4基因表达量的引物对。
技术介绍
橘小实蝇Bactroceradorsalis(Hendel)隶属双翅目Diptera、实蝇科Tephritidae、果实蝇属Bactrocera，该虫为多食性害虫，可取食柑橘、番石榴、芒果等46科250多种水果蔬菜。以幼虫在水果、蔬菜的果实内部取食以及成虫在果实表皮产卵形成孔洞，造成落果或整个果实腐烂为害，这不仅给果蔬生产带来严重危害，而且给进出口贸易带来严重影响。由于该虫寄主范围广，繁殖力高，适应能力强，许多国家都将其列为重点检疫对象(张彬等，2008)。橘小实蝇原产于亚洲的热带地区，现分布范围广，涉及亚太地区和非洲地区的热带、亚热带和温带地域。此虫的种群发生数量大，往往对新入侵地的果蔬生产造成严重损失(陈乃中，2009)。自2012年以来，来自澳大利亚等国家和地区的实蝇工作者从形态测量学、遗传学、行为学、化学生态学等方面研究了橘小实蝇复合体中的橘小实蝇、木瓜果实蝇B.papayaeDrew&Hancock、菲律宾果实蝇B.philippinensisDrew&Hancock、入侵果实蝇B.invadensDrew和杨桃果实蝇B.carambolaeDrew&Hancock，结果显示，木瓜果实蝇、菲律宾果实蝇和入侵果实蝇均为橘小实蝇，是其同物异名，而杨桃果实蝇为另一物种(Schutzeetal,2012；2014a；2014b)。此研究已于2014年10月被FAO官方网站进行了报道。这一“四合一”的新发现，使橘小实蝇的分布范围有了更大的拓展，形成了全球性的扩散，这对全球实蝇类害虫的科学研究产生了重要影响，对入侵防控工作也提出了进一步的要求。番石榴果实蝇B.correcta(Bezzi)原产于亚洲热带和亚热带地区(汪兴鉴及赵明珠，1989)，现主要分布于泰国、越南、缅甸、尼泊尔、印度、巴基斯坦等国家。在国内仅发生于云南省(梁广勤等，1996)。多食性害虫，以热带和亚热带果蔬为主(梁广勤等，1996)，包括番石榴、芒果、樱桃等30科60余种瓜果蔬菜(WhiteIMetal,1992)。其危害在于成虫产卵于果皮内侧，幼虫蛀果，引发真菌感染并导致果实腐烂脱落。该虫早在1992年就被列入《中华人民共和国进境植物检疫危险性病、虫、杂草名录》，且在口岸检疫截获频率较高，对番石榴果实蝇的重要基因相关研究和有效检测存在重要的经济意义。昆虫表皮由几丁质和表皮蛋白组成，其主要功能是保持身体结构，抑制水分蒸发和抵御外界不良环境的影响，在抗药性方面，昆虫表皮作为化学杀虫剂进入昆虫体内的第一道防线，发挥着不可忽视的重要作用。CG5210基因(Idgf6基因)和Idgf4基因隶属于对表皮发育起重要作用的糖苷水解酶18家族，两个基因作为成虫盘生长因子(Imaginal-disc-growth-factor)对于实蝇的正常发育和羽化起着重要的作用。在近似种果蝇Drosophila中两个基因的沉默均被证明会造成果蝇幼虫时期的表皮损伤以及畸形发育，甚至会造成发育过程中的死亡。在家蚕Bombyxmori翅芽发育的重要阶段一种Idgf基因一直呈现一个非常高的水平，并且Idgf基因与翅形成的细胞分化与发育相关。在害虫防治的研究中，鉴于两种基因在昆虫类群中的保守性及其在生长发育中的重要作用，两种基因均可为新杀虫剂的研究提供特异性靶标基因位点。生产相应的双链产品或者制剂会使昆虫因上皮屏障受损而导致过早死亡，并且增加昆虫对于致病菌的感染率，可作为开发害虫防治的新型农药的目标基因。橘小实蝇和番石榴果实蝇作为重要经济性检疫害虫，对果蔬生产贸易危害巨大。且两种实蝇均具有较强的扩散能力与抗药性，所以研究CG5210基因和Idgf4基因的表达水平可以为两种重要经济实蝇的入侵防控提供重要参考。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供橘小实蝇和番石榴果实蝇Idgf4基因的实时荧光PCR定量检测方法。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供一种引物对，所述引物对由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成。所述引物对可用于检测实蝇Idgf4基因表达量。所述引物对中的两条单链DNA的摩尔比可为1:1。两条单链DNA可独立包装。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了用于检测实蝇Idgf4基因表达量的系统，所述系统所述引物对。上述系统中，所述系统还包括进行定量PCR检测基因表达量所需的其他试剂和/或仪器。所述进行定量PCR检测基因表达量所需的其他试剂可为北京华博德亿生物技术有限公司的TakaraPremixExTaqTMII(TliRNaseHPlus)试剂盒中试剂。所述仪器可为AppliedBiosystems7500Real-TimePCRSystem。所述可由所述引物对和进行定量PCR检测基因表达量所需的其他试剂和/或仪器组成。所述系统可为仅包括试剂的试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测实蝇Idgf4基因表达量的方法，所述方法包括：利用所述引物对检测待测实蝇的Idgf4基因表达量，得到所述待测实蝇Idgf4基因表达量。上述方法中，所述待测实蝇可为橘小实蝇和/或番石榴果实蝇。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述引物对或所述系统的下述任一应用：X1)在检测实蝇Idgf4基因表达量中的应用；X2)在制备检测实蝇Idgf4基因表达量产品中的应用；X3)在检测实蝇Idgf4基因中的应用；X4)在制备检测实蝇Idgf4基因产品中的应用；X5)在防治实蝇中的应用；X6)在鉴定实蝇中的应用；X7)在制备鉴定实蝇产品中的应用；X8)在检测实蝇Idgf4基因干扰效率中的应用；X9)在检测实蝇防治产品对实蝇Idgf4基因干扰效率中的应用；X10)在检测实蝇防治效果中的应用；X11)在检测实蝇防治产品对实蝇防治效果评估中的应用。本专利技术中，所述实蝇可为橘小实蝇和/或番石榴果实蝇。所述实蝇具体可为所述实蝇的幼虫、蛹和/或成虫。实验证明，本专利技术提供的用于检测实蝇Idgf4基因表达量的引物对可以特异、快速、准确地对橘小实蝇和番石榴果实蝇的Idgf4基因进行定量检测，可用于实蝇Idgf4基因干扰效率的评价。另外，定量检测过程中的成本低、操作简单，解决了同一基因在不同实蝇之间表达量的比较问题，并且在实际生产中两种实蝇同一基因使用同一对引物检测更加方便、快捷、成本低。本专利技术还能够为Idgf4基因的研究和实蝇的防治提供工具及相关靶点，对实蝇的防治具有重要的意义，并为有效控制危险性实蝇的扩散、保护农业生产和生态安全、促进我国经济贸易发展提供潜在靶标基因参考。附图说明图1为内参基因(18srRNA)在橘小实蝇(Bd)和番石榴果实蝇(Bc)中的检测结果。图2为CG5210-rt在橘小实蝇(Bd)和番石榴果实蝇(Bc)中的特异性检测结果。图3为Idgf4-rt在橘小实蝇(Bd)和番石榴果实蝇(Bc)中的特异性检测结果。图4为CG5210-rt在橘小实蝇(Bd)和番石榴果实蝇(Bc)1龄幼虫(L1)、3龄早期幼虫(L3-1)、3龄末期幼虫(L3-3)、早期蛹(P-E)、中期蛹(P-M)、末期蛹(P-L)、刚羽化未性成熟成虫(A1)和十日龄性成熟成虫(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.引物对，由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成。

【技术特征摘要】
1.引物对，由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成。2.根据权利要求1所述的引物对，其特征在于：所述引物对用于检测实蝇Idgf4基因表达量。3.检测实蝇Idgf4基因表达量的系统，包括权利要求1或2所述的引物对。4.根据权利要求3所述的系统，其特征在于：所述系统还包括进行定量PCR检测基因表达量所需的其他试剂和/或仪器。5.根据权利要求4所述的系统，其特征在于：进行定量PCR检测基因表达量所需的其他试剂为北京华博德亿生物技术有限公司的TakaraPremixExTaqTMII(TliRNaseHPlus)试剂盒中试剂。6.检测实蝇Idgf4基因表达量的方法，包括：利用权利要求1所述的引物对检测待测实蝇的Idgf4基因表达量，得到所述待测实蝇Idgf4基因表达量。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述待测实蝇为橘小实蝇和/或番石榴果实蝇。8.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志红，顾欣悦，柳丽君，粟耘，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11