基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物、检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物、试剂盒及其应用，属于基因工程领域。本发明专利技术提供的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，针对性的检测Sox10基因启动子区域甲基化水平，因此将检测引物应用于外周血Sox10基因甲基化水平检测以及制备Sox10基因甲基化的检测试剂盒具有较好的效果；Sox10基因甲基化的检测试剂盒操作简便，利于实施，具有较高的医学应用前景。

Primers and detection kit based on methylation of Sox10 gene in peripheral blood and its application

The invention provides detection primers, kits and applications based on Sox10 gene methylation in peripheral blood, and belongs to the field of genetic engineering. The detection primer provided by the invention is based on the methylation of the Sox10 gene in peripheral blood to detect the methylation level of the promoter region of the Sox10 gene. Therefore, the detection primer is applied to the detection of the methylation level of the Sox10 gene in peripheral blood and the detection kit for the preparation of the methylation of the Sox10 gene has good effect. The detection kit is easy to operate, and has high medical application prospect.

【技术实现步骤摘要】
基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物、检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及基因工程领域，具体而言，涉及基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物、检测试剂盒及其应用。
技术介绍
Sox10基因定位于22q13.1，cDNA全长1.4kb，含有5个外显子，其中只有3、4、5号外显子编码蛋白，5’非编码区含有一个或一个以上的非编码外显子。Sox10最先在神经嵴干细胞迁徙早期的背神经管中表达，在小鼠胚胎发育第9.5天(E9.5)，Sox10开始表达，至第16.5天(E16.5)时表达开始下降。然后随着神经嵴干细胞逐渐分化而在其衍生物如周围神经系统、胃肠道系统及黑素细胞中表达。Sox10在人和成年小鼠中广泛地表达于各种组织器官中，如大脑、心脏、肺、肾上腺、结肠、膀胱、胰腺、前列腺、睾丸、内耳等。Sox10是神经嵴发育中的一个关键转录因子，在黑素细胞和肠道神经节的发育中发挥重要作用，可促进胚胎神经细胞和外周神经系统的发育。目前关于Sox10基因甲基化的研究还不够充分，对该基因的检测还比较少。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，该检测引物能较好的检测Sox10基因甲基化。本专利技术的第二目的在于提供上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在Sox10基因甲基化检测中的应用。本专利技术的第三目的在于提供上述基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在制备检测Sox10基因甲基化的检测试剂盒中的应用。本专利技术的第四目的在于提供Sox10基因甲基化的检测试剂盒，方便对Sox10基因甲基化的检测。本专利技术的第五目的在于提供上述的Sox10基因甲基化的检测试剂盒在Sox10基因甲基化的检测中的应用。为了实现本专利技术的上述目的，采用以下技术方案：基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，检测引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在Sox10基因甲基化检测中的应用。上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在制备检测Sox10基因甲基化的检测试剂盒中的应用。Sox10基因甲基化的检测试剂盒，检测试剂盒包括上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物。上述的Sox10基因甲基化的检测试剂盒在Sox10基因甲基化的检测中的应用。与现有技术相比较，本专利技术的有益效果包括：本专利技术提供的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，针对性的检测Sox10基因甲基化水平，因此将检测引物应用于检测以及制备Sox10基因甲基化的检测试剂盒具有较好的效果；Sox10基因甲基化的检测试剂盒操作方便，利于实施，具有较高的医学应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例2提供的电泳结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员应当理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物、检测试剂盒及其应用进行具体说明。基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，检测引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。检测引物的上游引物：SEQIDNO.1，Sox10-F:5’-GGAGAGAGAGATGTTAGGTAGGTAG-3’。检测引物的下游引物：SEQIDNO.2，Sox10-R:5’-AGTTTAATAAAAATTTTCTCTTTCTCTC-3’。产物长度388bp。上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在Sox10基因甲基化检测中的应用。上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在制备检测Sox10基因甲基化的检测试剂盒中的应用。Sox10基因甲基化的检测试剂盒，检测试剂盒包括上述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，检测试剂盒包括基因组DNA提取试剂，亚硫酸氢钠，乙酸钠，无水乙醇，PCR反应试剂。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，基因组DNA提取试剂包括PBS缓冲液、蛋白酶K和STE溶液。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，STE溶液由0.1mol/LNaCl，10mmol/LTris.cl，1mmol/LEDTA制得。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，PCR反应试剂包括PCR反应缓冲液、Taq酶和ddH2O；PCR反应缓冲液包括100mMTris-HCl(pH8.8at25℃)，500mMKCl，15mMMgCl2，0.8％(v/v)NonidetP40。上述的Sox10基因甲基化的检测试剂盒在Sox10基因甲基化的检测中的应用。进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，包括以下步骤：提取待检样本的基因组DNA，用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，用SEQIDNO.1-2所示的检测引物进行PCR扩增，得到扩增片段，将扩增片段连接至克隆载体并筛选得到阳性菌；将阳性菌进行测序，并分析待检样本甲基化结果；PCR扩增的反应条件为98℃预变性4min，94℃变性45s，66℃退火45s，72℃延伸1min；20个循环；94℃变性45s，56℃退火45s，72℃延伸1min，72℃修复延伸8min。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例1本实施例提供基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，检测引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。检测引物的上游引物：SEQIDNO.1，Sox10-F:5’-GGAGAGAGAGATGTTAGGTAGGTAG-3’。检测引物的下游引物：SEQIDNO.2，Sox10-R:5’-AGTTTAATAAAAATTTTCTCTTTCTCTC-3’。产物长度388bp。因此，可以将述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在Sox10基因甲基化检测中应用。当然，也可以将基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物应用于制备Sox10基因甲基化的检测试剂盒。实施例2本实施例提供Sox10基因甲基化的检测试剂盒，该试剂盒包括基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，检测引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。检测引物的上游引物：SEQIDNO.1，Sox10-F:5’-GGAGAGAGAGATGTTAGGTAGGTAG-3’。检测引物的下游引物：SEQIDNO.2，Sox10-R:5’-AGTTTAATAAAAATTTTCTCTTTCTCTC-3’。产物长度388bp。检测试剂盒包括基因组DNA提取试剂，亚硫酸氢钠，乙酸钠，无水乙醇，PCR反应试剂中的至少一种。基因组DNA提取试剂包括PBS缓冲液、蛋白酶K和STE溶液。STE溶液由0.1mol/LNaCl，10mmol/LTris.cl，1mmol/LEDTA制得。PCR反应试剂包括PCR反应缓冲液、Taq酶和ddH2O；PCR反应缓冲液包括10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，其特征在于，所述检测引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑2所示。

【技术特征摘要】
1.基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物，其特征在于，所述检测引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-2所示。2.如权利要求1所述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在Sox10基因甲基化检测中的应用。3.如权利要求1所述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物在制备Sox10基因甲基化的检测试剂盒中的应用。4.Sox10基因甲基化的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如权利要求1所述的基于外周血Sox10基因甲基化的检测引物。5.根据权利要求4所述的Sox10基因甲基化的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括基因组DNA提取试剂，亚硫酸氢钠，乙酸钠，无水乙醇，PCR反应试剂中的至少一种。6.根据权利要求5所述的Sox10基因甲基化的检测试剂盒，其特征在于，所述基因组DNA提取试剂包括PBS缓冲液、蛋白酶K和STE溶液。7.根据权利要求6所述的Sox10基因甲基化的检测试剂盒，其特征在于，所述STE溶液由0.1mol/LNaCl，10mmol/LTris.cl，1mmol/LEDTA制得。8.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：张树成，程兰杰，黄文凯，
申请(专利权)人：中国医科大学附属盛京医院，
类型：发明
国别省市：辽宁,21