【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及合成生物学领域，具体涉及一种胶原蛋白抗原表位的设计、制备方法。
技术介绍
1、类风湿性关节炎是一类自身免疫性疾病，自身抗体的大量产生能够促进关节炎症，进而导致软骨组织的退行性变化以及关节畸形。在现阶段，抗类风湿药物辅以非甾体类抗炎药和糖皮质激素是治疗类风湿性关节炎的主要手段。但有部分患者由于难以忍受药物副作用而耽误治疗，导致关节严重损伤，影响日常生活。因此针对现有研究与医疗现状，利用纳米抗体/单域抗体屏蔽自身免疫抗体表位，继而阻断患者后续自身免疫产生的炎症反应，这成为了更为理想的治疗方案。
2、在之前的研究工作中，多个研究小组发现欧美早期类风湿性关节炎患者中，有~20%的患者血液中检测出了典型的ii型胶原蛋白自身免疫抗体，并且抗体滴度、种类量与患者早期的病程发展速度、严重程度呈正相关性。动物实验中也证明，部分ii型胶原抗体可以直接诱导类风湿性关节炎症状。我们在前期的研究工作中，针对国内早期类风湿性关节炎患者展开了血液样本筛查，发现国内的相关患者血液样本中也出现了ii型胶原蛋白自身免疫情况。因此，针对ii型胶原自身免疫抗体设计靶向性治疗药物，是相关疾病治疗的一个重要研究方向。
3、如何筛查ii型胶原蛋白自身免疫抗体抗原表位是相关研究的关键制约步骤。天然ii型胶原蛋白呈现典型的三螺旋结构。如果仅按照传统多肽合成方法制备表位筛查序列，产生的长度较短的多肽链的tm值较低，容易在室温或实验过程中变性为单链结构则产物无法应用于后续的抗体/抗原筛查研究。利用化学基团修饰、封闭并交联多肽n/c端是一种维持多
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的是提供一种类胶原蛋白抗原表位的设计、制备方法。本专利技术利用类胶原蛋白cl结构域作为骨架序列，将cii表位插入骨架序列，通过微生物表达的方式获得具有三螺旋结构的cii抗原蛋白，解决了难以直接获得具有三螺旋结构的cii表位问题。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案。
3、本专利技术公开了一种获得具有三螺旋结构的ii型胶原蛋白抗原表位的方法，其特征在于，以原核类胶原蛋白作为骨架序列，将ii型胶原蛋白表位序列插入骨架中进行原核表达获得具有三螺旋结构的ii型胶原蛋白抗原表位。
4、进一步地，所述原核类胶原蛋白源自 streptococcus pyogenescollagen-likeprotein cl结构域。
5、优选地，所述骨架的氨基酸序列如seqidno:4~6所示。
6、进一步地，所述ii型胶原蛋白表位序列插入骨架序列中任意连续的两组gly-x-y之间。
7、进一步地，根据上述所述的方法制备得到的具有三螺旋结构的ii型胶原蛋白抗原表位蛋白在制备检测ii型胶原蛋白相关产品中的应用。
8、本专利技术还公开了一种ii型胶原蛋白检测用重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
9、s1表位肽设计：根据上述所述方法设计、合成重组抗原表位dna序列；
10、s2将s1设计、合成的dna序列构建原核表达载；
11、s3将s2构建的原核表达载转化于宿主细胞中，并在宿主细胞中表达，得到表达的重组抗原蛋白；
12、s4镍离子层析柱纯化s3获得的重组抗原蛋白。
13、本专利技术还公开了一种ii型胶原蛋白检测用重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的氨基酸序列如seqidno:1~3所示。
14、本专利技术还公开了一种ii型胶原蛋白检测用试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括elisa反应液和抗体检测板，且所述抗体检测板上包被有根据权利要求1所述的重组抗原蛋白。
15、进一步地，所述elisa反应液至少包括tbst缓冲液、封闭液、酶标二抗、显色液和终止液。
16、与现有技术比，本专利技术的有益效果如下。
17、本专利技术所述方法利用一类可以在室温自组装为三螺旋、且不包含任何已知生物活性位点的原核类胶原蛋白（源自 streptococcus pyogenescollagen-like protein cl结构域）作为骨架序列，将需要筛查的ii型胶原蛋白表位序列插入骨架中，从而保证了待筛查抗原表位与天然ii型胶原蛋白（后文简称cii）一致的三螺旋结构，且蛋白表达量高，纯化方式简单，生产成本低。
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1.一种获得具有三螺旋结构的II型胶原蛋白抗原表位的方法，其特征在于，以原核类胶原蛋白作为骨架序列，将II型胶原蛋白表位序列插入骨架中进行原核表达获得具有三螺旋结构的II型胶原蛋白抗原表位。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原核类胶原蛋白源自Streptococcus pyogenes collagen-like protein CL结构域。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述骨架的氨基酸序列如SEQ ID No:4~6所示。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述II型胶原蛋白表位序列插入骨架序列中任意连续的两组Gly-X-Y之间。
5.根据权利要求1所述的方法制备得到的具有三螺旋结构的II型胶原蛋白抗原表位蛋白在制备检测II型胶原蛋白相关产品中的应用。
6.一种II型胶原蛋白检测用重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
7.一种II型胶原蛋白检测用重组抗原蛋白，其特征在于，所述重组抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No:1~3所示。
8.一种
9.根据权利要求8所述的检测用试剂盒，其特征在于，所述ELISA反应液至少包括TBST缓冲液、封闭液、酶标二抗、显色液和终止液。
...【技术特征摘要】
1.一种获得具有三螺旋结构的ii型胶原蛋白抗原表位的方法，其特征在于，以原核类胶原蛋白作为骨架序列，将ii型胶原蛋白表位序列插入骨架中进行原核表达获得具有三螺旋结构的ii型胶原蛋白抗原表位。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原核类胶原蛋白源自streptococcus pyogenes collagen-like protein cl结构域。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述骨架的氨基酸序列如seq id no:4~6所示。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ii型胶原蛋白表位序列插入骨架序列中任意连续的两组gly-x-y之间。
5.根据权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦晓松，孙粤，许瑶征，刘建华，
申请(专利权)人：中国医科大学附属盛京医院，
类型：发明
国别省市：
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