【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及实验动物，尤其是一种膜性肾病动物模型建立方法的优化。
技术介绍
1、膜性肾病（membranous nephropathy，mn)）是一种靶抗原与抗体结合形成免疫复合物后沉积于肾小球引起的一种自身免疫性疾病，是成人肾病综合征常见的病因，病理特征为肾小球基底膜脏层上皮细胞下免疫复合物弥漫性沉积，基底膜弥漫性增厚伴钉突形成。据统计，该疾病约1/3的患者未经药物治疗即自发缓解，其余患者对症治疗后，病情进展缓慢，但仍有30%~40%患者在起病后5至15年内进展至终末期肾脏病，甚至死亡。目前，mn的发病机制尚不清楚且非常复杂，是靶抗原、自身抗体、补体及环境因素等多因素作用的结果。随着m型磷脂酶a2受体（m-type phospholipase a2 receptor，pla2r）与1型血小板反应蛋白7a域（thrombospondin domain-containing 7a，thsd7a）等自身抗原的发现，普遍认为该病发病机制为循环/原位免疫复合物形成后，激活补体形成膜攻击复合物，从而导致足细胞损伤，最终引起蛋白尿的过程。
2、体外动物模型是研究疾病发生发展及病理生理特点的一大手段，人们可以通过构建动物模型的方式，应用科学方法，从研究疾病动物模型找出疾病病因及发病机制。小鼠作为常用的动物模型之一，被广泛应用于各种疾病的研究。早在1959年，heymann等学者首次将小鼠均质化近端肾小管上皮细胞刷状缘提取物注射入小鼠体内，研制出heymann肾炎模型，在heymann肾炎中，足细胞足突靶向循环抗内吞受体巨蛋白，使
3、通过检索文献，尚未发现有关抗thsd7a抗体诱导mn动物模型的专利，但国外学者已研制出抗thsd7a抗体诱发小鼠mn的动物模型，通过向小鼠注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者的全血清诱发小鼠发生免疫反应，产生特异性抗体，临床表现上见快速且持续的蛋白尿，肾脏组织可见足突融合及c3沉积等典型病理改变。但注射纯化后的抗thsd7a抗体小鼠只能产生一过性蛋白尿，并随抗体的消耗疾病逐渐自愈。目前thsd7a相关膜性肾病小鼠动物模型的制备只能使用患者全血清注射，若血清抗thsd7a抗体滴度较低，可能会导致该模型的病理改变不显著，甚至难以诱导典型的mn发生，不能满足研究需求，而单次注射量过大又会可能增加小鼠的死亡风险，模型失败率高。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种thsd7a相关膜性肾病动物模型建议方法的优化。首次提出通过2次重复腹腔注射抗thsd7a抗体阳性的膜性肾病患者的全血清诱导mn小鼠模型，以降低小鼠模型的死亡率，提高模型稳定性和成功率，为进一步探讨膜性肾病发病机制提供了有利条件。该专利技术使用抗thsd7a抗体阳性mn患者的全血清构建了mn动物模型，证明了人抗thsd7a抗体诱导mn动物模型的可行性，扩大了抗thsd7a相关mn动物模型的应用前景。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案。
3、本专利技术提供了一种膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：选取啮齿动物作为动物模型，在造模期间重复腹腔注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者全血清，70天后即表现出明显的膜性肾病临床及病理特点。
4、进一步地，所述啮齿动物为balb/c小鼠。
5、进一步地，所述重复腹腔注射为分别于造模第1天和第15天腹腔注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者全血清。
6、优选地，所述抗thsd7a抗体的滴度为1:100。
7、优选地，所述抗thsd7a抗体的注射剂量分别为1.1ml和0.5ml。
8、进一步地，上述任一项所述的方法在制备膜性肾病动物模型中的引用。
9、本专利技术还提供了抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者的全血清在制备膜性肾病动物模型中的应用，其特征在于，分别于造模第1天和第15天腹腔注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者全血清。
10、进一步地，所述动物模型为balb/c小鼠。
11、进一步地，所述抗thsd7a抗体的滴度为1:100。
12、进一步地，所述抗thsd7a抗体的注射剂量分别为1.1ml和0.5ml。
13、与现有技术比，本专利技术的有益效果如下。
14、（1）本专利技术首次提出通过2次重复腹腔注射抗thsd7a抗体阳性的膜性肾病患者的全血清诱导mn小鼠模型，以降低小鼠模型的死亡率，提高模型稳定性和成功率，为进一步探讨膜性肾病发病机制提供了有利条件。
15、（2）本专利技术使用抗thsd7a抗体阳性mn患者的全血清构建了mn动物模型，证明了人抗thsd7a抗体诱导mn动物模型的可行性，扩大了抗thsd7a相关mn动物模型的应用前景。
16、（3）本专利技术首次尝试利用重复腹腔注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者的全血清来诱导膜性肾病小鼠模型。通过该方法制得的动物模型稳定性好，造模时间短，造模成功率及造模效率高，且更接近人类膜性肾病的改变，用于探讨膜性肾病发病机制及筛选治疗膜性肾病的药物和疗效验证有极大实用的价值。
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1.一种膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：选取啮齿动物作为动物模型，在造模期间重复腹腔注射抗THSD7A抗体阳性膜性肾病患者全血清，70天后即表现出明显的膜性肾病临床及病理特点。
2.根据权利要求1所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于：所述啮齿动物为Balb/c小鼠。
3.根据权利要求1所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于：所述重复腹腔注射为分别于造模第1天和第15天腹腔注射抗THSD7A抗体阳性膜性肾病患者全血清。
4.根据权利要求3所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述抗THSD7A抗体的滴度为1:100。
5.根据权利要求3所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述抗THSD7A抗体的注射剂量分别为1.1mL和0.5mL。
6.权利要求1～5任一项所述的方法在制备膜性肾病动物模型中的引用。
7.抗THSD7A抗体阳性膜性肾病患者的全血清在制备膜性肾病动物模型中的应用，其特征在于，分别于造模第1天和第15天腹腔注射抗THSD7A抗体阳性膜性肾
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述动物模型为Balb/c小鼠。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗THSD7A抗体的滴度为1:100。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗THSD7A抗体的注射剂量分别为1.1mL和0.5mL。
...【技术特征摘要】
1.一种膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：选取啮齿动物作为动物模型，在造模期间重复腹腔注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者全血清，70天后即表现出明显的膜性肾病临床及病理特点。
2.根据权利要求1所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于：所述啮齿动物为balb/c小鼠。
3.根据权利要求1所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于：所述重复腹腔注射为分别于造模第1天和第15天腹腔注射抗thsd7a抗体阳性膜性肾病患者全血清。
4.根据权利要求3所述的膜性肾病动物模型的构建方法，其特征在于，所述抗thsd7a抗体的滴度为1:100。
5.根据权利要求3所述的膜性肾病动物...
【专利技术属性】
技术研发人员：王艳秋，徐佳奕，汪凤，
申请(专利权)人：中国医科大学附属盛京医院，
类型：发明
国别省市：
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