检测ACE基因多态性的引物、探针及应用、试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术涉及指导高血压用药指导的基因检测。包括检测ACE(rs4646994)多态性的引物、探针及其应用。所述引物和探针能在荧光定量PCR平台上有效地检测出插入/缺失突变型的ACE(rs4646994)基因，操作方法简单易行，即降低污染风险，又提高效率，为高血压的临床用药提供了一个简捷判断的新途径，具有极高的临床应用价值。

Primers, probes, applications, kits and detection methods for detection of ACE gene polymorphism

The invention relates to gene detection for guiding hypertension medication guidance. It includes primers, probes and their applications to detect ACE (rs4646994) polymorphism. The primers and probes can effectively detect the insertion/deletion mutant ACE (rs46994) gene on the fluorescence quantitative PCR platform. The operation method is simple and easy, which can reduce the risk of contamination and improve the efficiency. The primers and probes provide a new simple way to judge the clinical medication of hypertension and have high clinical application value.

【技术实现步骤摘要】
检测ACE基因多态性的引物、探针及应用、试剂盒和检测方法
本专利技术涉及分子生物学和医学领域，具体涉及指导高血压用药相关性SNP位点的检测组合物、试剂盒和检测方法。
技术介绍
目前临床常用的抗高血压药物有5大类：利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂。药物在体内代谢过程中涉及到多种药物代谢酶、转运体和受体，它们存在的基因多态性最终导致了患者以相同方式服用同种药物时，其治疗效果、产生的不良发展及其对药物的耐受性等方面存在明显的个体差异。目前，基于药物基因学组的高血压研究主要关注基因的多样性与药物降压疗效的关系，不同人种、年龄、性别以及饮食和生活环境造成的基因差异对药物降压疗效的影响等，较少关注基因突变对药物降压后远期影响。未来高血压药物基因学组研究应是多学科，包括分子生物学、临床医学、遗传学、数学、社会学等共同协作的系统研究工程，不但关注基因与生理、病理之间的关系，还要关注基因与环境、人文、社会之间的关系，为最终高血压等疾病预防和治疗提供依据。由于不同个体的遗传差异、人种、年龄、性别及饮食和生活环境等各种因素的相互作用，使不同个体和群体对于高血压的易感性和降压药物的反应在性别、种族和年龄方面也呈现出不同的效应。对于高血压的治疗应是防治并举。随着基因防治时代的来临，通过基因测试，对于不同的易感人群进行不同个体的早期预防，通过基因测试和综合因素的评估，为其提供适宜的个体化治疗，使其用药达到安全、有效、经济。
技术实现思路
为克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种指导高血压用药的检测组合物，包括分别检测CYP2C9*3基因、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性的试剂。更进一步地，检测的是CYP2C9*3基因的rs1057910位点、CYP2D6基因的rs1065852位点、CYP3A5*3基因的rs776746位点、ADRB1基因的rs1801253位点、AGTR1基因的rs5186位点、ACE基因的rs4646994位点和NPPA基因的rs5065位点的多态性。检测上述基因多态性的试剂可以根据不同的检测原理和方法选择不同的试剂作为检测组合物。其中一种类型的检测组合物的试剂包括基于上述基因多态性位点而设计的扩增引物和探针，探针是分别针对基因多态性位点设计的野生型和突变型的两条探针。将所述检测组合物应用于指导高血压用药的检测试剂盒，其中组合物包括检测CYP2C9*3基因多态性、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性的试剂。本专利技术还提供了操作便捷的指导高血压用药的检测试剂盒，包括分别检测CYP2C9*3基因多态性、CYP2D6基因、CYP3A5*3基因、ADRB1基因、AGTR1基因、ACE基因和NPPA基因多态性的试剂。上述提到的扩增引物和探针，分别选自：扩增CYP2C9*3(rs1057910)的引物和探针序列：CYP2C9*3(rs1057910)上游引物：ATTTAATGTCACAGGTCACTGC(SEQNO1)CYP2C9*3(rs1057910)下游引物：CACATGCCCTACACAGAT(SEQNO2)探针1：AGATACATTGACCTT(SEQNO16)探针2：AGATACCTTGACCTT(SEQNO17)扩增CYP2D6(rs1065852)的引物和探针序列：CYP2D6(rs1065852)上游引物：TGCTCCTGGTGGACCTGA(SEQNO3)CYP2D6(rs1065852)下游引物：AGTCCACATGCAGCAGGT(SEQNO4)探针3：CGCTACTCACCAG(SEQNO18)探针4：CGCTACCCACCAG(SEQNO19)扩增CYP3A5*3(rs776746)的引物和探针序列：CYP3A5*3(rs776746)上游引物：AGCTTAACGAATGCTCTAC(SEQNO5)CYP3A5*3(rs776746)下游引物：AGCAAGAGTCTCACACAGG(SEQNO6)探针5：CTTTCAATATCTCTT(SEQNO20)探针6：CTTTCAGTATCTCTT(SEQNO21)扩增ADRB1(rs1801253)的引物和探针序列：ADRB1(rs1801253)上游引物：CCTTCAACCCCATCATCT(SEQNO7)ADRB1(rs1801253)下游引物：GGTCTCCGTGGGTCGCG(SEQNO8)探针7：TTCCAGGGACTGC(SEQNO22)探针8：TTCCAGCGACTGC(SEQNO23)扩增AGTR1(rs5186)的引物和探针序列：AGTR1(rs5186)上游引物：CATTCCTCTGCAGCACTTCACT(SEQNO9)AGTR1(rs5186)下游引物：CGGTTCAGTCCACATAATGCAT(SEQNO10)探针9：AATGAGCATTAGCTAC(SEQNO24)探针10：AATGAGCCTTAGCTAC(SEQNO25)扩增ACE(rs4646994)的引物和探针序列：ACE(rs4646994)上游引物：TTTCTCCCATTTCTCTAGACCT(SEQNO11)ACE(rs4646994)下游引物1：ATCCCGCCACTGCACT(SEQNO12)ACE(rs4646994)下游引物2：TCAGAGAATTTCAGAGCTG(SEQNO13)探针11：CGCTCTGTCGCCCAGGC(SEQNO26)探针12：CTATACAGTCACTTTTATGTGGTTT(SEQNO27)扩增NPPA(rs5065)的引物和探针序列：NPPA(rs5065)上游引物：CCAGCCCTGCTTGT(SEQNO14)NPPA(rs5065)下游引物：AGGATGGGCACACTCAT(SEQNO15)。探针13：TTATCTTCAGTACTG(SEQNO28)探针14：TTATCTTCGGTACTG(SEQNO29)。本专利技术还提供了一种指导高血压用药的检测方法，包括以下步骤：(a)提取样品中的基因组DNA；(b)扩增并检测CYP2C9*3基因rs1057910位点的多态性、CYP2D6基因rs1065852位点的多态性、CYP3A5*3基因rs776746位点的多态性、ADRB1基因rs1801253位点的多态性、AGTR1基因rs5186位点的多态性、ACE基因rs4646994位点的多态性、NPPA基因rs5065位点的多态性。本专利技术所述的高血压用药包括了利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂和钙离子拮抗剂。本专利技术的技术方案具有以下优点：本专利技术囊括了与五大类高血压药物相关的基因多态性位点的分析，通过7位点多态性的检测和分析，能有效指导主流抗高血压药物(五大类药物分别是利尿剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂)的临床使用，较市面上的同类产品，覆盖的类型更广。并且检测时采用特异性高的野生型探针和突变型探针的双探针设计，避免使用目前荧光定量PCR检测需要的内参引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测ACE基因多态性的寡核苷酸，包括检测ACE基因的rs4646994位点的引物，所述引物序列为：ACE(rs4646994)上游引物：TTTCTCCCATTTCTCTAGACCT(SEQ NO11)ACE(rs4646994)下游引物1：ATCCCGCCACTGCACT(SEQ NO12)ACE(rs4646994)下游引物2：TCAGAGAATTTCAGAGCTG(SEQ NO13) 。

【技术特征摘要】
1.检测ACE基因多态性的寡核苷酸，包括检测ACE基因的rs4646994位点的引物，所述引物序列为：ACE(rs4646994)上游引物：TTTCTCCCATTTCTCTAGACCT(SEQNO11)ACE(rs4646994)下游引物1：ATCCCGCCACTGCACT(SEQNO12)ACE(rs4646994)下游引物2：TCAGAGAATTTCAGAGCTG(SEQNO13)。2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其特在在于，还包括针对基因多态性位点设计的野生型和突变型的两条探针。3.根据权利要求2所述的寡核苷酸，其特征在于，检测ACE(rs4646994)多态性的探针序列为：探针11：CGCTCTGTCGCCCAGGC(SEQNO26)探针12：CTATACAGTCACTTTTATGTGGTTT(SEQNO27)。4.根据权利要求1至5之一所述的寡核苷酸在指导高血压用药的检测试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的高血压用药为血管紧张素抑制剂转化酶。6.指导高血压用药的检测试剂盒，包括检测ACE基因多态性的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括检测ACE基因的rs4646994位点的引物，所述引物序列为：ACE(rs4646994)上游引物：TTTCTCCCATTTCTCTAGACCT(SEQNO11)ACE(rs4646994)下游引物1：ATCCC...

【专利技术属性】
技术研发人员：林源吉，丁佳女，
申请(专利权)人：杭州百迈生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33