【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于病原检测，涉及念珠菌的引物探针组，尤其涉及用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组及试剂盒。
技术介绍
1、重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification)一种新型dna扩增技术。与pcr不同，rpa在恒定温度下进行，通常在37-42℃之间。相比于pcr复杂的高温变性和退火步骤，rpa更省时、更易于操作。rpa的扩增过程相对较快，通常在10-30分钟内完成，大大缩短了实验时间。rpa技术还可与侧流层析试纸条结合使用，实现快速、低成本、可视化的检测，适用于常规检查。rpa在病原体检测、基因突变分析、环境监测等领域都有应用。
2、rpa技术产物的检测有两种主流方法，结合核酸酶exo、fpg、nfo进行实时荧光检测和结合核酸酶nfo进行侧流层析试纸条(核酸试纸条)检测。
3、念珠菌性阴道炎是女性阴道最常见的感染之一，会给患者带来不适和不便，念珠菌性阴道炎主要由念珠菌属真菌感染引起，有白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌等。当机体免疫机能下降时，念珠菌的数量可能会增多，导致感染的发生。
4、不同念珠菌对抗真菌药的耐药性不同，对治疗药物选择和预后也有所不同，快速准确鉴别念珠菌种类可以为治疗提供帮助。目前临床常用念珠菌检测方法包括悬滴法、涂片法、培养法、抗原检测法、核酸检测法。
5、上述方法具有以下缺陷：悬滴法和涂片法操作复杂，对人员要求高，灵敏度和特异性低。培养法耗时较长。抗原检测法主要针对白色念珠菌，但念珠菌
技术实现思路
1、为了解决目前没有同时检测和区分多种念珠菌的试剂盒的问题，现有技术中检测方法复杂、检测时间长、成本高的问题，本专利技术提供了一种方便快速可视化检测引起念珠菌性阴道炎的五种念珠菌的rpa引物探针组及试剂盒和应用，本专利技术的试剂盒可以快速检测五种念珠菌，检测方法具有简单、快速、结果可视化、低成本的优点，对临床迫切需要明确念珠菌感染有很大帮助，可以协助临床缩短诊断时间及选择最合适的抗真菌药。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、本专利技术提供了用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，所述的五种念珠菌为白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌以及热带念珠菌；
4、所述引物探针组包括两组或多组的用于检测五种念珠菌的引物与探针；
5、所述白色念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:1、seq id no:16或seq id no:17所示的ca-f，核苷酸序列如seq id no:2、seq id no:18或seq id no:19所示的ca-r与核苷酸序列如seq id no:3所示的ca-p；
6、所述光滑念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:4、seq id no:22或seq id no:21所示的cg-f，核苷酸序列如seq id no:5、seq id no:23或seq id no:24所示的cg-r与核苷酸序列如seq id no:6所示的cg-p；
7、所述克柔念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:7、seq id no:24或seq id no:25所示的ck-f，核苷酸序列如seq id no:8、seq id no:26或seq id no:27所示的ck-r与核苷酸序列如seq id no:9所示的ck-p；
8、所述近平滑念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:10、seq id no:28或seq id no:29所示的cp-f，核苷酸序列如seq id no:11、seq id no:30或seq id no:31所示的cp-r与核苷酸序列如seq id no:12所示的cp-p；
9、所述热带念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:13、seq id no:32或seq id no:33所示的ct-f，核苷酸序列如seq id no:14、seq id no:34或seq id no:35所示的ct-r与核苷酸序列如seq id no:15所示的ct-p。
10、作为本专利技术的一种优选方案，所述引物探针组包括同时检测白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌以及热带念珠菌的五组引物与探针。
11、作为本专利技术的一种优选方案，所述探针ca-p、cg-p、ck-p、cp-p与ct-p中间修饰四氢呋喃，在其5’侧任意位置标记一个抗原基团，探针3’末端使用封闭基团进行封闭。
12、作为本专利技术的一种优选方案，所述的抗原基团包括fam、fitc、生物素、地高辛或tamra；3’末端的封闭基团包括氨基基团、磷酸基团、spacer c3、倒置核苷酸或双脱氧核苷酸。
13、作为本专利技术的一种优选方案，所述白色念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:1所示的ca-f，核苷酸序列如seq id no:2所示的ca-r与核苷酸序列如seq idno:3所示的ca-p；
14、所述光滑念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:4所示的cg-f，核苷酸序列如seq id no:5所示的cg-r与核苷酸序列如seq id no:6所示的cg-p；
15、所述克柔念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:7所示的ck-f，核苷酸序列如seq id no:8所示的ck-r与核苷酸序列如seq id no:9所示的ck-p；
16、所述近平滑念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:10所示的cp-f，核苷酸序列如seq id no:11所示的cp-r与核苷酸序列如seq id no:12所示的cp-p；
17、所述热带念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如seq id no:13所示的ct-f，核苷酸序列如seq id no:14所示的ct-r与核苷酸序列如seq id no:15所示的ct-p。
18、本专利技术还提供了包含上述的引物探针组、rpa扩增用组分和rpa扩增产物检测用组分的试剂盒。
19、作为本专利技术的一种优选方案，所述rpa扩增产物检测用组分包括核酸试纸条。
20、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸试纸条由样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜、检测线、质控线与吸水垫组成。
21、作为本专利技术的一种优选方案，rpa扩增用组分包括rpa-nfo试剂冻干粉，280mm醋酸镁与2×再水化缓冲液。
22、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
【技术保护点】
1.用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述的五种念珠菌为白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌以及热带念珠菌；
2.根据权利要求1所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括同时检测白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌以及热带念珠菌的五组引物与探针。
3.根据权利要求1所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述探针CA-P、CG-P、CK-P、CP-P与CT-P中间修饰四氢呋喃，在其5’侧任意位置标记一个抗原基团，探针3’末端使用封闭基团进行封闭。
4.根据权利要求3所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述的抗原基团包括FAM、FITC、生物素、地高辛或TAMRA；3’末端的封闭基团包括氨基基团、磷酸基团、spacer C3、倒置核苷酸或双脱氧核苷酸。
5.根据权利要求1-4任一项所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述白色念珠菌的引物探针组包括核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的CA
6.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-5任一项所述的引物探针组、RPA扩增用组分和RPA扩增产物检测用组分。
7.根据权利要求6所述的一种试剂盒，其特征在于，所述RPA扩增产物检测用组分包括核酸试纸条。
8.根据权利要求6所述的一种试剂盒，其特征在于，所述核酸试纸条由样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜、检测线、质控线与吸水垫组成。
9.根据权利要求6所述的一种试剂盒，其特征在于，RPA扩增用组分包括RPA-nfo试剂冻干粉，280mM醋酸镁与2×再水化缓冲液。
...【技术特征摘要】
1.用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述的五种念珠菌为白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌以及热带念珠菌；
2.根据权利要求1所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括同时检测白色念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、近平滑念珠菌以及热带念珠菌的五组引物与探针。
3.根据权利要求1所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述探针ca-p、cg-p、ck-p、cp-p与ct-p中间修饰四氢呋喃，在其5’侧任意位置标记一个抗原基团，探针3’末端使用封闭基团进行封闭。
4.根据权利要求3所述的用于快速可视化检测五种念珠菌的引物探针组，其特征在于，所述的抗原基团包括fam、fitc、生物素、地高辛或tamra；3’末端的封闭基团包括氨基基团、磷酸基团、spacer c3、倒置核苷酸或双脱...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙龙，施新颜，周旭，丁佳女，
申请(专利权)人：杭州百迈生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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