【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种喷雾制剂的制备方法，具体为一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法。
技术介绍
1、生物被膜(biofilm，bf) 是细菌为适应自然环境在固态表面生长时所采取的一种保护性的群体生活方式。细菌生物被膜广泛存在于自然界中，其中金黄色葡萄球菌是较易形成生物被膜的菌种之一，也是食品加工过程中的重要污染源。金黄色葡萄球菌(stpylococcus aureus) 是一种广泛存在于自然界的革兰氏阳性病原菌。目前，在食品加工中发现金黄色葡萄球菌生物被膜存在。生物被膜是自然条件下细菌为适应环境而形成的与浮游状态细菌相对应的一种保护型生长方式，细菌将细胞不可逆的嵌入一个自我分泌的胞外聚合物基质中，该基质由多糖、蛋白质、核酸和芳香族氨基酸组成。生物被膜菌具有不同于浮游菌生长率和基因表达的表型，导致生物被膜表面化学性质的变化，因此生物被膜菌对各种化学杀菌剂的敏感程度只有浮游菌的1/10-1/1000，其耐热性也相应增加，对环境变化不敏感，感染部位难以彻底清除。生物被膜的良好适应性可能导致毒力增强，在食品加工过程中增加了交叉污染的可能性，导致食品污染的风险增加。
2、现有技术之中对于金黄色葡萄球菌生物被膜的抑制大多采用的是抗生素。但是在实际的使用过程中，随着抗生素的不断使用，金黄色葡萄球菌生物被膜的耐药性不断的增强，导致对于金黄色葡萄球菌生物被膜抑制越来越不便。而中药作为天然药物且中药的来源广，在实际使用的过程中不良反应少且金黄色葡萄球菌生物被膜耐药性低。基于以上的原因，本专利技术提出一种针对金黄色葡萄球菌生物被
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：
3、一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，包括以下步骤：
4、s1：金黄色葡萄球菌菌种的选取和对金黄色葡萄球菌进行生物被膜的培养；
5、s2：药材选取，中药药材包括地榆、盐肤木、鹅掌楸叶、甘草、蒲公英和蜂胶；
6、s3：对药材进行成分的提取操作，并将提取后的中药材放置到一起，充分混合，得出不同浓度的针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂原料；
7、s4：将不同浓度的针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂原料与培养好的金黄色葡萄球菌进行生物被膜进行加注并培养指定时间；
8、s5：对培养后的金黄色葡萄球菌进行生物被膜进行检测，得出具有较好清除效果的针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂原料配比，并将其装入到喷剂盒内，完成制备操作。
9、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤1中的金黄色葡萄球菌菌种采用广东省微生物研究所的atcc 6538菌种，培养基为胰蛋白胨大豆肉汤培养基和胰蛋白胨大豆琼脂培养基。
10、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤1中对于金黄色葡萄球菌生物被膜的制备，包括以下的步骤：
11、s11：将冻干保存的金黄色葡萄球菌接种在胰蛋白胨大豆琼脂培养基上，在温度37摄氏度下培养8小时，然后取培养基上直径大于1毫米的菌落并置于无菌的胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，37摄氏度下振荡培养至对数生长期；
12、s12：将复苏一天的菌种接种与胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，37摄氏度下培养一天，置于超声仪上重新时菌团分散均匀，参照麦氏比浊法，用ph值为7.3无菌磷酸盐缓冲液调整菌悬液密度为cfu/ml；
13、s13：接入一定量菌悬液于96孔板中，加入胰蛋白胨大豆肉汤培养基，盖上盖子，在37摄氏度条件下恒温恒湿培养，培养一定时间后弃去96孔板中的培养物，用250μl、ph7.3的无菌磷酸盐缓冲液冲洗3次，去除培养基和浮游状态的细菌；
14、s14：在孔中加入甲醇250μl加盖静置15分钟，吸除甲醇后在30摄氏度环境下自然风干，固定吸附紧密的细菌。
15、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤3中对于地榆采用乙醇进行成分提取操作，对于盐肤木的树叶采用乙醇进行成分提取操作，对于鹅掌楸叶采用二氯甲烷进行成分提取操作，对于甘草采用微波提取法进行成分提取操作，对于蒲公英采用热水浸提法进行成分的提取操作。
16、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤4中对于金黄色葡萄球菌进行生物被膜抑制培养操作，包括以下的步骤：
17、s21：将提取后的地榆、盐肤木、鹅掌楸叶、甘草、蒲公英和蜂胶有效成分以相同分量进行混合，并使得混合原液浓度为100克每升；
18、s22：将制备好的浓度为cfu/ml金黄色葡萄球菌生物被膜菌种和混合原液一起加注到培养基之中，保持ph值为7，培养温度为35摄氏度和培养时间为24小时；
19、s23：重复上述操作，至少经过三次实验。
20、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤5中对于培养后的金黄色葡萄球菌生物被膜进行检测，包括以下的步骤：
21、s31：提取培养后的培养液，并加入250μl的1%结晶紫溶液，静置染色20分钟后弃去染色液；
22、s32：采用无菌且ph值为7.3的磷酸盐缓冲液冲洗直至无色、晾干，在染色的培养液中加入250μl、体积分数为95%的乙醇脱色；
23、s33：测定595nm 波长处光密度值，从而得出混合原液对金黄色葡萄球菌生物被膜抑制效果。
24、作为本专利技术的一种优选技术方案，所述步骤32中利用空白的以250μl胰蛋白胨大豆肉汤培养基作为空白调零。
25、本专利技术实施例提供了一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，具备以下有益效果：
26、本专利技术通过引入地榆、盐肤木、鹅掌楸叶、甘草、蒲公英和蜂胶的有效成分制成混合原液，并通过中药的各种有效成分对金黄色葡萄球菌生物被膜进行生长抑制，可以有效的实现对金黄色葡萄球菌生物被膜类病原菌的治疗，并且因为采用的是中药成分的治疗操作，可以有效的减少不良反应的发生，并且降低金黄色葡萄球菌生物被膜的耐药性和突变，使用效果好；本专利技术通过将针对金黄色葡萄球菌生物被膜治疗的混合原液采用喷雾制剂的形式进行保存，便于对混合原液的使用，治疗方便。
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1.一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，包括以下步骤，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的金黄色葡萄球菌菌种采用广东省微生物研究所的ATCC 6538菌种，培养基为胰蛋白胨大豆肉汤培养基和胰蛋白胨大豆琼脂培养基。
3.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1中对于金黄色葡萄球菌生物被膜的制备，包括以下的步骤：
4.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3中对于地榆采用乙醇进行成分提取操作，对于盐肤木的树叶采用乙醇进行成分提取操作，对于鹅掌楸叶采用二氯甲烷进行成分提取操作，对于甘草采用微波提取法进行成分提取操作，对于蒲公英采用热水浸提法进行成分的提取操作。
5.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤4中对于金黄色葡萄球菌进行生物被膜抑制培养操作，包括以下的步骤：
6.根据权利要求
7.根据权利要求6所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤32中利用空白的以250μL胰蛋白胨大豆肉汤培养基作为空白调零。
...【技术特征摘要】
1.一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，包括以下步骤，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1中的金黄色葡萄球菌菌种采用广东省微生物研究所的atcc 6538菌种，培养基为胰蛋白胨大豆肉汤培养基和胰蛋白胨大豆琼脂培养基。
3.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤1中对于金黄色葡萄球菌生物被膜的制备，包括以下的步骤：
4.根据权利要求1所述的一种针对金黄色葡萄球菌生物被膜喷雾制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤3中对于地榆采用乙醇进行成分提取操作，对于盐肤木的树叶采用乙醇进行成...
【专利技术属性】
技术研发人员：程明明，朱熠，
申请(专利权)人：九江市检验检测认证中心，
类型：发明
国别省市：
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