一种基于环状RNA的鉴定脐带间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于环状RNA的鉴定脐带间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，包括用于测定hsa_circ_0052766、hsa_circ_0019389和hsa_circ_0077559表达水平的qPCR引物；所述鉴定脐带间充质干细胞传代次数指鉴定区分P1～P10代脐带间充质干细胞和P11～P20代脐带间充质干细胞。本发明专利技术可以快速确定待测冻存脐带间充质干细胞是1～10代还是11～20代脐带间充质干细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种基于环状RNA的鉴定脐带间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒
本专利技术属于基因检测领域，涉及一种鉴定间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒。
技术介绍
间充质干细胞中最热门、最具前景的当属骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞。人骨髓内间充质干细胞含量稀少，且随着年龄增加或体质衰弱细胞数量会逐渐减少，因此进行大量扩增非常必要，但目前关于扩增后各代骨髓间充质干细胞的生物学特性是否相同仍无准确定论。在常规培养条件下人骨髓间充质干细胞能生长10代左右，结合文献公开资料以及实验经验，1～5代增殖特性和细胞活力明显优于6～10代(参考文献：人骨髓间充质干细胞的体外连续传代及鉴定，广西中医学院学报，2012年第15卷第1期；比较不同传代人骨髓间充质干细胞的生物学特性，中国组织工程研究与临床康复，2009年第13卷第49期)。人脐带间充质干细胞源于胚胎发育早期中胚层，具有良好的多能性，在体外诱导可分化成脂肪、软骨、神经细胞和肝细胞等多种细胞。人脐带间充质干细胞比人骨髓内间充质干细胞具有更好的分裂传代能力，一般而言，研究人员可以接受1～20代内人脐带间充质干细胞用作研究的种子细胞。结合文献公开资料以及实验经验，1～10代增殖特性、细胞活力和染色体稳定性明显优于11～20代(参考文献：长期培养人脐带间充质干细胞的生物活性及其限制性，中国组织工程研究与临床康复，2011年第15卷第10期；脐带间充质干细胞体外传代培养后细胞核型稳定性，贵阳医学院学报，2013年第38卷第5期；人脐带间充质干细胞体外传代遗传特性的研究，现代医学，2015年第43卷第9期)。为了获得较好的实验结果，保证实验的可重复性，研究人员通常优选1～5代骨髓间充质干细胞或1～10代人脐带间充质干细胞作为研究细胞。但是，现有技术存在如下不足：第一，市面上购买到的骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞到底是第几代无法确证，商家标示信息不可信，作为种子细胞重复性差；第二，实验室自己冻存作为种子细胞的骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞常常因标签损坏而无法确定该骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞的代数；第三，虽然可以将购买或自行留存的骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞复苏后，通过测定其增殖活力和表型大概判断该细胞的代数，但该方法先要将冻存的骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞复苏，然后体外培养，再测试其增殖活力和表型，耗时费力。本专利技术旨在提供一种解决上述不足的技术方案，以鉴定骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞传代次数，同时不需要对冻存的细胞进行复苏即可操作。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种鉴定骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，以快速确定待测冻存骨髓间充质干细胞是1～5代还是6～10代骨髓间充质干细胞，或快速确定待测冻存脐带间充质干细胞是1～10代还是11～20代脐带间充质干细胞。上述目的通过如下技术方案实现：骨髓间充质干细胞-长链非编码RNA一种基于长链非编码RNA的鉴定骨髓间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，包括用于测定LncRNACASC2、LncRNABX357664和LncRNALINC00520表达水平的qPCR引物；所述鉴定骨髓间充质干细胞传代次数指鉴定区分P1～P5代骨髓间充质干细胞和P6～P10代骨髓间充质干细胞。所述测定LncRNACASC2、LncRNABX357664和LncRNALINC00520表达水平指测定LncRNACASC2、LncRNABX357664和LncRNALINC00520相对于内参U6的相对表达水平。LncRNACASC2的qPCR上游引物为5'-CGACTGGTGAGCTTGCTGATGATTC-3'；LncRNACASC2的qPCR下游引物为5'-AAGTGTTCCTGTTGCGCCTCTTGAT-3'。LncRNABX357664的qPCR上游引物为5'-AGTCGTATAGCACTTGATAGAGAGGC-3'；LncRNABX357664的qPCR下游引物为5'-CGCAGTTCTTCACCGTCGGTAGGAAA-3'。LncRNALINC00520的qPCR上游引物为5'-ATGCTCAGGTATATAACGATGAGTCGC-3'；LncRNALINC00520的qPCR下游引物为5'-CACACAAACATAGACGGGGACCATG-3'。内参U6的qPCR上游引物为5'-TTTAGGCTTGCCTCTGTAGTA-3'；内参U6的qPCR下游引物为5'-GAACCCTGCCAGGTGATTTTG-3'。优选地，还包括逆转录试剂和qPCR试剂等。骨髓间充质干细胞-微小RNA一种基于微小RNA的鉴定骨髓间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，包括用于测定hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-325和hsa-miR-511-3p表达水平的qPCR引物；所述鉴定骨髓间充质干细胞传代次数指鉴定区分P1～P5代骨髓间充质干细胞和P6～P10代骨髓间充质干细胞。优选地，所述测定hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-325和hsa-miR-511-3p表达水平指测定hsa-miR-378a-5p、hsa-miR-325和hsa-miR-511-3p相对于内参U6的相对表达水平。hsa-miR-378a-5p的qPCR上游引物为5'-CTACACTGACGTGTGTATCACAGAC-3'；hsa-miR-378a-5p的qPCR下游引物为5'-ATGGTAGAAAACAGGCTACGACGG-3'。hsa-miR-325的qPCR上游引物为5'-TGACGGATTGATGTTAGAGGGATG-3'；hsa-miR-325的qPCR下游引物为5'-CGGAAAGCCCTAGCAGGATAATCT-3'。hsa-miR-511-3p的qPCR上游引物为5'-GTTACTTAGGCCTGCGGTTGGAAG-3'；hsa-miR-511-3p的qPCR下游引物为5'-GTCTAGTGGATCTTCGTCTGCGTC-3'。内参U6的qPCR上游引物为5'-TTTAGGCTTGCCTCTGTAGTA-3'；内参U6的qPCR下游引物为5'-GAACCCTGCCAGGTGATTTTG-3'。优选地，还包括逆转录试剂和qPCR试剂等。骨髓间充质干细胞-环状RNA一种基于环状RNA的鉴定骨髓间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，包括用于测定hsa_circ_0079888、hsa_circ_0010283和hsa_circ_0019223表达水平的qPCR引物；鉴定骨髓间充质干细胞传代次数指鉴定区分P1～P5代骨髓间充质干细胞和P6～P10代骨髓间充质干细胞。优选地，测定hsa_circ_0079888、hsa_circ_0010283和hsa_circ_0019223表达水平指测定hsa_circ_0079888、hsa_circ_0010283和hsa_circ_0019223相对于内参U6的相对表达水平。hsa_circ_0079888的qPCR上游引物为5'-CCCACGATTGTGAGACTACCAATGA-3'；hsa_circ_0079888的q本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于环状RNA的鉴定脐带间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，其特征在于：包括用于测定hsa_circ_0052766、hsa_circ_0019389和hsa_circ_0077559表达水平的qPCR引物；所述鉴定脐带间充质干细胞传代次数指鉴定区分P1～P10代脐带间充质干细胞和P11～P20代脐带间充质干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种基于环状RNA的鉴定脐带间充质干细胞传代次数的基因检测试剂盒，其特征在于：包括用于测定hsa_circ_0052766、hsa_circ_0019389和hsa_circ_0077559表达水平的qPCR引物；所述鉴定脐带间充质干细胞传代次数指鉴定区分P1～P10代脐带间充质干细胞和P11～P20代脐带间充质干细胞。2.根据权利要求1所述的基因检测试剂盒，其特征在于：所述测定hsa_circ_0052766、hsa_circ_0019389和hsa_circ_0077559表达水平指测定hsa_circ_0052766、hsa_circ_0019389和hsa_circ_0077559相对于内参U6的相对表达水平。3.根据权利要求2所述的基因检测试剂盒，其特征在于：hsa_circ_0052766的qPCR上游引物为5'-ACTGAAGCACTTTAGACAGATA-3'；hsa_circ_0052766的qPCR下游引物为5'-CTCAGACCCACGTTGGAC...

【专利技术属性】
技术研发人员：田红青，
申请(专利权)人：南京千年健干细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32