一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用。本发明专利技术包括如下步骤：步骤1，收集质控细胞；步骤2，将收集的质控细胞沉淀为松散状，聚集并塑形成规则的圆柱形细胞条；步骤3，将步骤2得到的圆柱形细胞条，制作成细胞蜡块；步骤4，将步骤3得到的细胞蜡块按合适厚度切片，形成蜡卷，并将蜡卷置于保存管中。在制备过程中，可以通过改变阳性质控细胞与阴性质控细胞的混合比例，调节其所含待测物的浓度。采用本发明专利技术所述方法制备的质控品能够较大程度的减小“基质效应”对检测结果的影响；能与临床待测标本平行进行前处理，对整个检测过程、试剂、设备、交叉污染等环节进行更好的质量控制；并且具有良好的稳定性和重复性。

An in vitro diagnostic reagent quality control product and its preparation method and Application

The invention relates to an external diagnostic reagent quality control product and a preparation method and application thereof. The present invention includes the following steps: Step 1, collecting the quality control cells; step 2, the collected quality control cells are precipitated into loose shape, and the regular cylindrical cell strips are formed and formed; step 3, a cylindrical cell strip obtained by step 2 is made into a cell wax block; step 4, the cell wax blocks obtained by step 3 are cut at the appropriate thickness. A wax roll is formed and the wax roll is placed in the retention tube. During the preparation process, the concentration of the tested substance can be adjusted by changing the mixture ratio of the positive QC cells and the negative QC cells. The quality control products prepared by this method can greatly reduce the impact of the \matrix effect\ on the detection results, can be processed in parallel with the clinical specimens, and make better quality control for the whole detection process, reagents, equipment, cross contamination and other links; and it has good stability and repetition. Sex.

【技术实现步骤摘要】
一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用
本专利技术涉及体外诊断试剂领域，具体涉及一种可用做体外诊断试剂中的质控品及其制备方法与应用。
技术介绍
体外诊断试剂中的质控品是指，被其制造商预期用于验证体外诊断试剂性能特征的物质、材料或物品。质控品的基本特性应满足：第一，基质应尽可能与临床实际检验的待测标本一致，以避免可能的“基质效应”的存在；第二，其所含待测物的浓度尽可能接近试验的cut-off值或临床决定性水平；第三，具有较好的稳定性和重复性。目前，体外诊断试剂中普遍使用质粒或者人工合成的基因片段作为质控品，当临床待测标本为石蜡切片时，这类质控品不能符合上述对质控品的基本要求。
技术实现思路
针对现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用。本专利技术为临床待测标本为石蜡切片的体外诊断，提供了更为适合的质控品。为达到以上目的，本专利技术采取的技术方案是：一种体外诊断试剂质控品的制备方法，包括如下步骤：步骤1，收集质控细胞：具体操作为：计数细胞后，以1000转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液，得到质控细胞；步骤2，将步骤1得到的质控细胞沉淀为松散状，聚集并塑形成规则的圆柱形细胞条；步骤3，将步骤2得到的圆柱形细胞条，制作成细胞蜡块；步骤4，切片：将步骤3得到的细胞蜡块按合适厚度切片，形成蜡卷，并将蜡卷置于保存管中。在上述方案的基础上，步骤1中所述质控细胞为阳性质控细胞或阴性质控细胞。在上述方案的基础上，步骤1中所述质控细胞为将阳性质控细胞和阴性质控细胞按照一定比例混合的混合细胞。在上述方案的基础上，步骤2的具体操作为：敲打质控细胞使之沉淀松散；按照1-2*108细胞加入2ml的无水乙醇，充分混匀；将混匀后的细胞悬液加入圆柱形塑型模具中，以2500转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液；将形成的圆柱形细胞条从模具中取出。在上述方案的基础上，步骤3中，将步骤2得到的圆柱形细胞条制作成细胞蜡块的具体操作为：A、固定：将细胞条放入组织包埋盒中，置于10％中性福尔马林固定液中固定过夜(固定温度为4℃)；B、脱水：细胞条依次用浓度梯度的乙醇进行脱水：所述浓度梯度的乙醇依次为70％→80％→95％Ⅰ→95％Ⅱ→100％Ⅰ→100％Ⅱ，脱水时间依次为：50分钟、50分钟、30分钟、30分钟、30分钟和20分钟；C、透明：将脱水后的细胞条依次用无水乙醇/二甲苯→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ进行处理，处理时间依次为：20分钟、20分钟和20分钟；所述无水乙醇/二甲苯中无水乙醇与二甲苯的体积比为1：1；D、浸蜡：将步骤C得到的细胞条依次浸入二甲苯/石蜡→石蜡Ⅰ→石蜡Ⅱ进行处理，处理时间依次为：30分钟、1小时和1小时；所述二甲苯/石蜡中二甲苯与石蜡的体积比为1：1；E、切割：将步骤D得到的细胞条用切割工具切割成高度为3mm的小细胞柱；F、包埋：向包埋底膜内加入适量融化的石蜡，随即迅速将浸蜡的小细胞柱用加温的镊子送于包埋底膜的样品区，盖好包埋框，平置底面，待石蜡冷固后将蜡块从包埋框内脱出，并将蜡块修齐，4℃存放备用。在上述方案的基础上，将细胞条放入组织包埋盒中，于10％中性福尔马林固定液中固定过夜的固定温度为4℃。本专利技术还提出一种由所述的体外诊断试剂质控品的制备方法所制得的质控品。本专利技术还提出了上述质控品在体外诊断试剂中的应用。本专利技术所述的体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用，具有如下优点：对于临床待测标本为石蜡切片的体外诊断，石蜡切片质控品相较于目前普遍使用的质粒或者人工合成的基因片段质控品，能够更好的保持与临床待测标本的制备介质的同一性，更大程度的减小“基质效应”对检测结果的影响；并且能与临床待测标本平行进行前处理，对整个检测过程、试剂、设备、交叉污染等环节进行更好的质量控制。在细胞蜡块的制备过程中，可以通过改变阳性质控细胞与阴性质控细胞的混合比例，调节其所含待测物的浓度。按照该制备流程制备的石蜡切片，经实验验证具有良好的稳定性和重复性。附图说明本专利技术有如下附图：图1为质控品基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图；图2为质控品基因组DNA多重PCR琼脂糖凝胶电泳图；图3为不同批次质控品提取的基因组DNA量的比较图；图4为不同批次质控品的基因组DNA荧光定量PCR结果示意图；图5为质控品的保存稳定性结果示意图；图6为人类IDH1基因突变检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法)中的阳性质控品的荧光PCR-毛细管电泳测序结果示意图；图7为人类IDH1基因突变检测试剂盒(荧光PCR-毛细管电泳法)中的阴性质控品的荧光PCR-毛细管电泳测序结果示意图。具体实施方式本专利技术提供了一种体外诊断试剂质控品及其制备方法与应用。所述质控品的制备方法包括：1、收集质控细胞，可以是一种细胞(如阳性质控细胞或阴性质控细胞)，也可以是按照一定比例混合后的混合细胞(如将阳性质控细胞和阴性质控细胞按一定比例混合)；具体操作为：计数细胞后，以1000转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液，得到质控细胞。2、将步骤1收集的细胞沉淀，聚集并塑形成规则的圆柱形细胞条；所述将细胞塑形成规则的圆柱形是通过自制模具进行的；具体操作为：敲打细胞使之沉淀松散；按照1-2*108细胞加入2ml无水乙醇，充分混匀；将混匀后的细胞悬液加入自制圆柱形塑型模具中，以2500转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液；将形成的圆柱形细胞条从模具中取出。3、将步骤2得到的圆柱形细胞条，制作成细胞蜡块；具体操作为：A、固定：将细胞条放入组织包埋盒中，置于10％中性福尔马林固定液中固定过夜(固定温度为4℃)。B、脱水：细胞条依次用浓度梯度的乙醇进行脱水，所述浓度梯度的乙醇依次为：70％→80％→95％Ⅰ→95％Ⅱ→100％Ⅰ→100％Ⅱ，脱水时间依次为：50分钟、50分钟、30分钟、30分钟、30分钟和20分钟。C、透明：将脱水后的细胞条依次用无水乙醇/二甲苯→二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ进行处理，处理时间依次为：20分钟、20分钟和20分钟；所述无水乙醇/二甲苯中无水乙醇与二甲苯的体积比为1：1。D、浸蜡：将步骤C得到的细胞条依次浸入二甲苯/石蜡→石蜡Ⅰ→石蜡Ⅱ进行处理，处理时间依次为：30分钟、1小时和1小时；所述二甲苯/石蜡中二甲苯与石蜡的体积比为1：1。E、切割：将步骤D得到的细胞条用自制的切割工具切割成高度为3mm的小细胞柱。F、包埋：向包埋底膜内加入适量融化了的石蜡，随即迅速将浸蜡的小细胞柱用加温了的镊子送于包埋底膜的样品区，盖好包埋框，平置底面，待石蜡冷固后将蜡块从包埋框内脱出，并将蜡块修齐，4℃存放备用。4、切片按合适厚度切片，将步骤F的蜡块制成蜡卷，并将蜡卷置于保存管中；进一步的，本专利技术对于这种体外诊断试剂中质控品评价标准包括：1、质控品基因组完整度的评估按照上述方法制备的蜡卷，使用石蜡切片基因组提取试剂盒提取基因组DNA，所得基因组DNA的降解程度会影响后续PCR扩增的效果，如基因组DNA降解严重，可造成较长片段扩增效率降低，甚至无法扩增。所述基因组完整度的评估，是通过：A、基因组琼脂糖凝胶电泳观察，主带完整，弥散带较弱且在200bp以上。B、多重PCR扩增，靶基因为150-1000bp的基因片段，选择3个不同长度的基因片段进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳观察扩增结果，条带清晰。2、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外诊断试剂质控品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，收集质控细胞：具体操作为：计数细胞后，以1000转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液，得到质控细胞；步骤2，将步骤1得到的质控细胞沉淀为松散状，聚集并塑形成规则的圆柱形细胞条；步骤3，将步骤2得到的圆柱形细胞条，制作成细胞蜡块；步骤4，切片：将步骤3得到的细胞蜡块按合适厚度切片，形成蜡卷，并将蜡卷置于保存管中。

【技术特征摘要】
1.一种体外诊断试剂质控品的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤1，收集质控细胞：具体操作为：计数细胞后，以1000转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液，得到质控细胞；步骤2，将步骤1得到的质控细胞沉淀为松散状，聚集并塑形成规则的圆柱形细胞条；步骤3，将步骤2得到的圆柱形细胞条，制作成细胞蜡块；步骤4，切片：将步骤3得到的细胞蜡块按合适厚度切片，形成蜡卷，并将蜡卷置于保存管中。2.如权利要求1所述的体外诊断试剂质控品的制备方法，其特征在于：步骤1中所述质控细胞为阳性质控细胞或阴性质控细胞。3.如权利要求1所述的体外诊断试剂质控品的制备方法，其特征在于：步骤1中所述质控细胞为将阳性质控细胞和阴性质控细胞按照一定比例混合的混合细胞。4.如权利要求1所述的体外诊断试剂质控品的制备方法，其特征在于：步骤2的具体操作为：敲打质控细胞使之沉淀松散；按照1-2*108细胞加入2ml的无水乙醇，充分混匀；将混匀后的细胞悬液加入圆柱形塑型模具中，以2500转/分钟的转速离心5分钟，弃掉上清液；将形成的圆柱形细胞条从模具中取出。5.如权利要求1所述的体外诊断试剂质控品的制备方法，其特征在于：步骤3中，将步骤2得到的圆柱形细胞条制作成细胞蜡块的具体操作为：A、固定：将细胞条放入组织包埋盒中，置于10％中性福尔马...

【专利技术属性】
技术研发人员：王华颖，刘明坤，叶锋，
申请(专利权)人：北京旌准医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11