一种具有荧光标记的核酸分型标准物及其制备方法和应用技术

技术编号：17807548 阅读：70 留言：0更新日期：2018-04-28 02:33

本发明专利技术公开了一种具有荧光标记的核酸分型标准物及其制备方法和应用。本发明专利技术首先保护一种核酸电泳标准物，由20个DNA片段组成；所述20个DNA片段的末端均具有荧光染料标记；所述20个DNA片段用于标识如下20种核酸大小：75bp、90bp、100bp、115bp、135bp、150bp、160bp、180bp、200bp、225bp、250bp、275bp、300bp、340bp、350bp、380bp、400bp、450bp、490bp、500bp。本发明专利技术提供的具有荧光标记的核酸分型标准物，标准片段的数量增多，提高了内标校准能力，减少了偏差，校准结果更加准确。

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【技术实现步骤摘要】
一种具有荧光标记的核酸分型标准物及其制备方法和应用
本专利技术涉及一种具有荧光标记的核酸分型标准物及其制备方法和应用。
技术介绍
毛细管凝胶电泳技术(CapillaryElectrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)或毛细管分离法(CESM)，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力，当带电溶质在电场作用下通过凝胶的多孔性结构时，将会因溶质分子大小不同而产生不同的阻力，根据样品中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。1987年，Cohen发表了毛细管凝胶电泳的工作。电泳从凝胶板上转移到毛细管中以后，分析灵敏度提高到能检测一个碱基的变化，分离效率高达百万理论塔板数；分析片段能大能小，小到能分辨单个核苷酸的序列，大到能分离Mb的DNA；分析时间由原来的以小时计算缩减到以分、秒计算。被广泛用于DNA片段大小分析，应用于测序、SNP检测、法医DNA分型等。核酸分型标准物是指一组分子量已知的DNA分子的混合物，电泳后按照其分子量的大小和迁移率的不同，在凝胶上形成一个DNA片段分布的梯度，用以指示电泳过程中的未知DNA样本的分子量。与传统的分子量标准相比，核酸分型标准物(又称分子量内对照)与待测样品在同一泳道内电泳，二者运动规律完全一致，因此校对结果更加准确。结合毛细管凝胶电泳技术的高灵敏度、高分离效果，能够同时对大量差异不小于1bp的DNA片段实现快速准确分离。目前市面上常用的分子量内标，如ABI的LIZ-500，其由15条带有LIZ荧光素标记的双链DNA片段组成(分子量分别是：50bp、75bp、100bp、...
一种具有荧光标记的核酸分型标准物及其制备方法和应用

【技术保护点】
一种核酸电泳标准物，由20个DNA片段组成；所述20个DNA片段的末端均具有荧光染料标记；所述20个DNA片段用于标识如下20种核酸大小：75bp、90bp、100bp、115bp、135bp、150bp、160bp、180bp、200bp、225bp、250bp、275bp、300bp、340bp、350bp、380bp、400bp、450bp、490bp、500bp。

【技术特征摘要】
1.一种核酸电泳标准物，由20个DNA片段组成；所述20个DNA片段的末端均具有荧光染料标记；所述20个DNA片段用于标识如下20种核酸大小：75bp、90bp、100bp、115bp、135bp、150bp、160bp、180bp、200bp、225bp、250bp、275bp、300bp、340bp、350bp、380bp、400bp、450bp、490bp、500bp。2.如权利要求1所述的核酸电泳标准物，其特征在于：所述核酸电泳标准物为权利要求4、权利要求5、权利要求6或权利要求7所述方法制备得到的核酸电泳标准物。3.一种用于制备核酸电泳标准物的试剂盒，包括模板质粒、引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19和引物对20；所述模板质粒为具有SEQIDNO:22中第119-621位核苷酸所示DNA片段的质粒；引物对1由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:2所示下游引物组成；引物对2由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:3所示下游引物组成；引物对3由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:4所示下游引物组成；引物对4由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:5所示下游引物组成；引物对5由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:6所示下游引物组成；引物对6由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:7所示下游引物组成；引物对7由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:8所示下游引物组成；引物对8由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:9所示下游引物组成；引物对9由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:10所示下游引物组成；引物对10由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:11所示下游引物组成；引物对11由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:12所示下游引物组成；引物对12由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:13所示下游引物组成；引物对13由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:14所示下游引物组成；引物对14由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:15所示下游引物组成；引物对15由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:16所示下游引物组成；引物对16由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:17所示下游引物组成；引物对17由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:18所示下游引物组成；引物对18由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:19所示下游引物组成；引物对19由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:20所示下游引物组成；引物对20由SEQIDNO:1所示上游引物和SEQIDNO:21所示下游引物组成；每个引物对中，一条引物的5’末端具有荧光染料标记。4.一种核酸电泳标准物的制备方法，包括如下步骤：以权利要求3中的模板质粒为模板，进行20个体系的PCR扩增，得到20种扩增产物；所述20个体系的PCR扩增分别采用权利要求3中的引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19或引物对20；将20种扩增产物混合，得到核酸电泳标准物。5.一种核酸电泳标准物的制备方法，包括如下步骤：以权利要求3中的模板质粒为模板，进行20个体系的PCR扩增，得到20种扩增产物；所述20个体系的PCR扩增分别采用权利要求3中的引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19或引物对20；将20种扩增产物分别进行DNA纯化，得到20种纯化产物；将20种纯化产物混合，得到核酸电泳标准物。6.一种核酸电泳标准物的制备方法，包括如下步骤：以权利要求3中的模板质粒为模板，进行20个体系的PCR扩增，得到20种扩增产物；所述20个体系的PCR扩增分别采用权利要求3中的引物对1、引物对2、引物对3、引物对4、引物对5、引物对6、引物对7、引物对8、引物对9、引物对10、引物对11、引物对12、引物对13、引物对14、引物对15、引物对16、引物对17、引物对18、引物对19或引物对20；采用引物对1时扩增得到的DNA片段命名为片段1，采用引物对2时扩增得到的DNA片段命名为片段2，采用引物对3时扩增得到的DNA片段命名为片段3，采用引物对4时扩增得到的DNA片段命名为片段4，采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：李生斌，伏东科，杨日华，李波，
申请(专利权)人：深圳华大法医科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44

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