SCAD基因或SCAD蛋白在制备防治血管重构和重大血管疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种SCAD基因或SCAD蛋白在血管重构中的应用，具体公开了SCAD基因、SCAD蛋白、或SCAD蛋白的表达促进剂或激活剂在制备防治血管重构及相关重大血管疾病的药物中的应用。本发明专利技术通过动物模型的构建，首次揭示了SCAD在高血压血管重构中的重要作用，为血管重构及相关重大血管疾病的新药研发提供理论基础及可行性依据，可用于作为血管重构及相关重大血管疾病新的药物作用靶点。

The application of SCAD gene or SCAD protein in the preparation of drugs for the prevention and treatment of vascular remodeling and major vascular diseases

The invention discloses the application of SCAD gene or SCAD protein in vascular remodeling, and discloses the application of SCAD gene, SCAD protein or SCAD protein expression enhancer or activator in the preparation of drugs for preventing vascular remodeling and related major vascular diseases. The present invention by constructing animal model, for the first time reveals the important role of SCAD in vascular remodeling in hypertension, provide the basis and feasibility on the basis of the theory for vascular remodeling and vascular diseases related to major research and development of new drugs can be used as medicine for effect of vascular remodeling and vascular disease related to major new target.

【技术实现步骤摘要】
SCAD基因或SCAD蛋白在制备防治血管重构和重大血管疾病药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，更具体地，本专利技术涉及SCAD基因或蛋白在制备防治血管重构的药物中的应用，以及在制备防治重大血管疾病的药物中的应用。
技术介绍
高血压是严重危害人类健康的常见心血管疾病之一，高血压可引起血管结构和功能的改变，即高血压血管重构，可促进高血压进展和心血管致残率和死亡率升高。重大血管疾病的发生与高血压血管重构密切相关。长期以来，我们都将血管重构归于高血压和其他心血管疾病的次级并发症。然而，最新研究结果表明，血管重构和高血压并列存在，在观察3到4周龄自发性高血压大鼠血管时发现，血管重构甚至早于血压改变，血管重构很可能是引起血压升高的关键因素之一；其次，血管重构还是高血压持续恶化的结构基础。因此，早期预防或逆转血管重构必将对于高血压的预防和治疗产生不可忽视的积极意义。针对血管重构形成的关键环节进行药物干预，可能有助于控制高血压血管重构的发展。然而，现有的降压药物仅停留在降低血压层面，并没有涉及到直接改善血管重构的层面，而高血压发生血管重构，并进入恶性循环将使血压进一步升高，血管重构进一步加重。因此，深入进行高血压血管重构的发病机制研究，为探寻针对血管重构和重大血管疾病的药物作用新靶点，改善高血压的预后，将会是本领域重要的研究方向。
技术实现思路
基于此，为了克服上述现有技术对血管重构及重大血管疾病研究和治疗技术的不足，本专利技术提供了SCAD基因或SCAD蛋白在血管重构及重大血管疾病中的应用。短链酰基辅酶A脱氢酶(shortchainacyl-CoAdehydrogenase，SCAD)基因为与血管重构相关的一个基因，为血管重构的分子机制研究提供基础。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取了以下技术方案：SCAD基因、SCAD蛋白、或SCAD蛋白的表达促进剂或激活剂在制备防治血管重构的药物中的应用。在其中一些实施例中，所述血管重构由自发性高血压大鼠诱导发生。SCAD基因、SCAD蛋白、或SCAD蛋白的表达促进剂或激活剂在制备防治重大血管疾病的药物中的应用。本专利技术的专利技术人研究发现，脂肪酸β氧化的关键酶短链酰基辅酶A脱氢酶(short-chainacyl-CoAdehydrogenase，SCAD)在自发性高血压大鼠的主动脉中，其mRNA和蛋白表达、酶活性均明显减少，主动脉游离脂肪酸含量明显增加，ROS生成增多，表明自发性高血压大鼠主动脉SCAD蛋白表达及酶活性的下降，可能导致了主动脉脂肪酸β氧化能力下降，脂肪酸利用减少，从而引起游离脂肪酸含量的增加。大量游离脂肪酸刺激的后果是ROS生成增多，从而启动了氧化应激机制，导致高血压血管重构的发生。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过动物模型的构建，首次揭示了SCAD在高血压血管重构中的重要作用，为血管重构及相关重大血管疾病的新药研发提供理论基础及可行性依据，可用于作为血管重构及相关重大血管疾病新的药物作用靶点。附图说明图1为本专利技术实施例1中不同周龄自发性高血压大鼠血压的变化；图2为本专利技术实施例2中各组大鼠胸主动脉形态学变化；图3为本专利技术实施例3中各组大鼠胸主动脉SCAD的mRNA、SCAD蛋白表达及SCAD酶活性变化；图4为本专利技术实施例4中各组大鼠胸主动脉中ATP及胸主动脉和血清中游离脂肪酸含量的变化；图5为本专利技术实施例5中各组大鼠胸主动脉ROS含量的变化。具体实施方式以下结合附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。本专利技术以下实施例所用的血管重构大鼠为自发性高血压大鼠，所用的Wistar大鼠为正常对照大鼠。以下实施例及说明书附图中所用的术语的缩写定义如下：SHR：自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats)；ROS：活性氧(reactiveoxygenspecies)SCAD：短链酰基辅酶A脱氢酶(shortchainacyl-CoAdehydrogenase)；α-tubulin：α-微管蛋白；以下实施例中所使用的实验方法如下：1、实验动物分组实验分为四组：(1)正常组：正常饲养8只雄性15周龄Wistar大鼠9周。(2)正常游泳组：8只雄性15周龄Wistar大鼠试游泳运动1周后进行游泳耐力训练，试游泳运动阶段的时间从第1d的15min逐渐增加到第5d的60min，从第2周开始每天上午9时持续游泳60min，每周进行6次游泳训练，游泳池体积和水深分别为100cm×60cm×60cm，水温控制到30～35℃，维持此运动量8周。(3)SHR组：正常饲养8只雄性15周龄自发性高血压大鼠9周。(4)SHR游泳组：雄性15周龄自发性高血压大鼠8只，试游泳运动1周后进行游泳耐力训练8周，游泳耐力训练方法同正常游泳组。2、鼠尾收缩压的测定利用大鼠尾动脉间接测量法测定各组大鼠尾动脉收缩压，每隔两周测定一次，直至游泳结束，美国Ken大鼠血压无创血压仪(CODAMonitor)购于美国肯特公司。3、血清和主动脉游离脂肪酸含量的测定戊巴比妥钠(45mg/kg)麻醉动物后，开腹腔暴露腹主动脉，立即用真空采血管腹主动脉取血大约5mL，3500r/min离心10min，小心收集血清并分装至EP管中，-80℃超低温冰箱保存血清。取血后用预冷生理盐水充分灌注心脏，迅速分离大鼠主动脉组织，剥离主动脉周围多余脂肪组织，生理盐水清洗干净，液氮速冻后-80℃保存进行后续实验游离脂肪酸含量测定。严格按照游离脂肪酸测定试剂盒说明书进行血清和主动脉游离脂肪酸含量测定，根据吸光度计算血清和主动脉中游离脂肪酸的含量。4、ROS含量测定取血后用预冷生理盐水充分灌注心脏，迅速分离大鼠主动脉组织，剥离主动脉周围多余脂肪组织，生理盐水清洗干净，一部分液氮速冻后-80℃保存进行后续实验，剩余部分冰冻切片，二氢乙啶(dihydroethidium，DHE)染色，荧光显微镜观察和拍摄图像，分析ROS在胸主动脉的产生情况。5、主动脉形态学研究取血后预冷的生理盐水充分灌注心脏，迅速分离大鼠主动脉组织，剥离主动脉周围多余脂肪组织，生理盐水清洗干净后置于4％多聚甲醛中固定，石蜡包埋后切片，利用苏木精-伊红染色(HE染色)进行后续的主动脉形态学分析，在光学显微镜下通过图像分析仪测量管腔内径、血管壁中层厚度，计算中层厚度与管腔直径比值。6、实时荧光定量PCR检测主动脉SCAD的mRNA表达严格按照Trizol试剂盒说明书提取主动脉组织中总RNA，260nm、280nm波长下紫外分光光度计测定RNA样品吸光度，检测RNA纯度并计算出RNA浓度。参照RT-PCR试剂盒说明书进行逆转录反应，两步法进行PCR扩增反应，按照SYBRGreen说明书反应体系加入荧光染料、引物和RT产物后在Bio-RadCFX96PCR仪中进行real-timePCR反应。反应程序为：95℃10s；95℃5s；60℃30s，循环40次。采用比较阈值法，即2-△△Ct方法计算结果，实验重复3次。引物由上海生工合成，SCAD的上游引物为5’-CCAGTCTGTGGAACTAC本文档来自技高网...

【技术保护点】
SCAD基因、SCAD蛋白、或SCAD蛋白的表达促进剂或激活剂在制备防治血管重构的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.SCAD基因、SCAD蛋白、或SCAD蛋白的表达促进剂或激活剂在制备防治血管重构的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：周四桂，徐立朋，李忠洪，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44