The invention discloses a high sensitive detection of amplified products of nucleic acid fluorescent probe and its application, the fluorescent probe for an oligonucleotide chain, the 5 'end labeled with fluorescence excitation group, 3' end labeled with fluorescence quenching group, consisting of two segments respectively with the target nucleic acid sequence of positive and reverse reverse chain chain complementary oligonucleotide sequences in the 5 'end and 3' end, and near the 5 'end of 2~5 BP and the target nucleic acid sequence specific binding but no reverse complementary base on the fluorescent probe, while the reverse complement sequence at both ends of junction region also has 2~5 nucleotides and the target nucleic acid sequence specificity but with no reverse complementary base on the fluorescence probe. The fluorescent probe has the advantages of high detection sensitivity, high fluorescence signal intensity, low background fluorescence background, simple design and good universality, etc., and can be used for detecting target nucleic acid sequence and single base mutation in real-time fluorescence quantitative PCR.
【技术实现步骤摘要】
一种可对核酸扩增产物高灵敏检测的荧光探针及其应用
本专利技术是涉及一种可对核酸扩增产物高灵敏检测的荧光探针及其应用,属于生物
技术介绍
实时聚合酶链式反应(Real-timePCR,简称实时PCR)是指扩增与检测同步进行,通过检测扩增循环中荧光信号的变化以指示核酸扩增过程。实时PCR核酸检测技术早期使用荧光染料,例如SYBRGREEN,EVEGREEN,指示PCR反应产物。染料法尽管简单,然而其无法识别非特异扩增,尤其是由于引物二聚体引起的非特扩增,虽然增加熔解曲线检测一步,但在实际应用中还是受到了很大限制。随后,实时PCR核酸检测技术中开始应用标记荧光基团的核酸片段作为指示探针,例如5’-核酸外切酶技术中使用的Taqman探针、分子信标、荧光能量转移探针(相邻探针)、蝎子引物、点亮探针等。实时PCR中加入探针对PCR扩增产物具有第二识别作用,从而避免了非特异扩增,结果更加可靠,也无需熔解曲线检测一步。但目前的荧光探针检测技术仍然存在一些缺陷,例如:探针结合的效率不高,造成检测灵敏度低,荧光信号强度低;探针的荧光激发和淬灭基团量不成比例,或因结构问题而不能足够靠近,造成检测系统荧光本底背景高;探针的结构和检测原理复杂,不易设计,且对目标核酸序列的GC含量、二级结构等较为挑剔,普适性差等。
技术实现思路
针对现有技术存在的上述问题,本专利技术的目的是提供一种检测灵敏度高、荧光信号强度高、荧光本底背景低、设计简单、普适性好的可对核酸扩增产物高灵敏检测的荧光探针及其应用。为实现上述专利技术目的,本专利技术采用的技术方案如下:一种可对核酸扩增产物高灵敏检测的 ...
【技术保护点】
一种可对核酸扩增产物高灵敏检测的荧光探针,所述荧光探针为一条寡核苷酸链,其5’端标记有荧光激发基团,3’端标记有荧光淬灭基团,其特征在于:在5’端与3’端之间包含两段分别与目标核酸序列正向链和反向链反向互补的寡核苷酸序列,且在靠近5’末端有2~5个碱基与目标核酸序列特异性结合但在所述荧光探针上无反向互补碱基,同时在两端反向互补的序列交界区域也有2~5个碱基与目标核酸序列特异性结合但在所述荧光探针上无反向互补碱基。
【技术特征摘要】
1.一种可对核酸扩增产物高灵敏检测的荧光探针,所述荧光探针为一条寡核苷酸链,其5’端标记有荧光激发基团,3’端标记有荧光淬灭基团,其特征在于:在5’端与3’端之间包含两段分别与目标核酸序列正向链和反向链反向互补的寡核苷酸序列,且在靠近5’末端有2~5个碱基与目标核酸序列特异性结合但在所述荧光探针上无反向互补碱基,同时在两端反向互补的序列交界区域也有2~5个碱基与目标核酸序列特异性结合但在所述荧光探针上无反向互补碱基。2.根据权利要求1所述的荧光探针,其特征在于:所述寡核苷酸链的总长为40~60碱基。3.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员:周玉庆,
申请(专利权)人:惠扬上海生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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