scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用制造技术

本发明专利技术属于白血病诊断技术领域，尤其是一种scaRNA9基因的检测方法及其应用，特别是作为AML诊断新标志物的应用。本发明专利技术通过scaRNA9的表达高低对急性髓系白血病患者危险度分层或预后评估，为个性化医疗方案的设计与选择提供理论依据。

【技术实现步骤摘要】
scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用
本专利技术涉及白血病诊断
，具体涉及scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用。
技术介绍
急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)是一种异质性极强的恶性血液疾病，占成人急性白血病的80％左右。目前标准化疗可以获得约70～80％的完全缓解率(Completeremission,CR),但大部分CR后的患者可能复发，甚至一部分患者难以达到CR而成为难治性白血病，治疗无效而死亡。AML预后具有高度的异质性的一个主要原因在于高度的肿瘤细胞遗传异质性。染色体异位是其中最常见的诊断和预后标记物，此外，大约一半的患者没有染色体异常，称之为正常核型AML(cytogeneticallynormalAML,CN-AML)。现有技术对AML的预后判断主要根据患者年龄、染色体核型等指标。但即使是年龄、染色体核型等因素完全相同的患者，他们的预后也不尽相同。因此，为了获得更好的治疗效果，提高患者的存活率，需要早起判断AML的预后指标指导制定合适的治疗方案。故寻找早期判断预后的敏感性指标具有重要的现实意义。但是，现阶段有效的判断指标严重不足，从基因水平上研究寻找预后相关的指标已成为研究热点。基于荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)和下一代测序技术(Nextgenerationsequencing,NGS)的AML鉴定方法多强调异质性，且所需检定周期较长，不利于AML的快速鉴定。一般而言，AML多停滞于髓系祖细胞分化早期，多为原始细胞或者早期幼稚细胞，这是区别于慢性髓系白血病(Chronicmyeloidleukemia,CML)与淋系白血病的显著特征之一，因此理论上不同类型的AML细胞中存在共有的特异性表达基因，对其表达变化的检测可直接用于AML的便捷快速诊断。目前基因检测期标志物有FLT3、IDH1、IDH2等基因，但是每一种基因均不能在细胞分裂期给出明确的信息数据，确定未来疾病的发生、发展及转归。若能超早期给出疾病的分析数据，对AML患者来讲可能提高疾病的治愈率和生存期。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用。本专利技术的再一目的在于提供早期判断急性髓系白血病预后中方法。scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用。SEQIDNO：1：scaRNA9的mRNA序列，353bp：CTTTCTGAGATCTGCTTTTAGTGAAGTGGATCAATGATGAAACTAGCCAAATCTGAGCATCAGAAGTCTTTCCAGTCTACCTGATGCATGATCTCTACAGTTCTGAGAAGCAAAACTATAAAACAATGTAAAACAATAAGGGCATATGTCTGGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTGTACGCACATGTGTTTATAAAGATAACAGCTGTAGGAATGAATGAGATTGAGGGTGGGGGGGTGCGTATGTATGTCTATGAAAGCCTAATCATTTCTGGGCAATGATGAAAAGGTTTTACTACTGATCTTTGTAACTATGATGGTTTCTACACTTGACCTGAGCTCA本专利技术根据AML细胞的基因组不稳定性的细胞学特征，选择scaRNA9基因作为通用的诊断标志物用于初诊AML潜在患者的临床诊断，推测scaRNA9可通过调控AML细胞染色体的行为参与肿瘤的发生发展过程，并进行了验证。本专利技术发现scaRNA9高表达可提示AML细胞的存在，并且可以提示AML患者较高的危险度分层和较差的临床预后。因此，本专利技术提供scaRNA9作为AML的标志物，其敏感性高、通用性好、特异性强，能用来帮助判断AML患者的危险度分层或临床预后。scaRNA9(SmallCajal-bodyspecificRNA9)又称为Z32、mgU2-19/30，位于主基因CEP295内含子，其5’端存在引导序列，介导RNA进入卡哈尔小体，mgU2-19和mgU2-30两个结构域分别介导U2剪接体RNA第19位和第30位核苷酸的甲基化。体内scaRNA9可分别以全长和片段化的形式存在，且两者之间的摩尔比在不同的应激反应中会发生不同的变化，比如说依托泊苷处理可增加全长scaRNA9的比例，而氧化胁迫则降低scaRNA9的比例。CEP295是scaRNA9的主基因，编码一个保守的蛋白CEP295。该蛋白作用于保守的中心粒形成途径的上游，并促进子代到母体的中心粒转化为母中心粒。而scaRNA一般通过调控主基因的表达发挥功能。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病预后中方法，包括利用引物对caRNA9基因进行扩增的步骤，其中，引物序列如下：SEQIDNO.2：scaRNA9上游引物:5'-TGAGCATCAGAAGTCTTTCCAGTC-3'；SEQIDNO.3：scaRNA9下游引物:5'-CACCCTCAATCTCATTCATTCCTAC-3'。在本专利技术的一个具体实施方案中，提供一种检测AML细胞或组织中scaRNA9表达高低的方法，使用scaRNA9基因的引物对。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，所述方法还包括以下步骤：(1)收集患者的细胞，提取总RNA；(2)RNA反转录；(3)利用引物对scaRNA9基因进行实时荧光定量PCR检测；(4)进行单因素和多因素分析。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，步骤(1)中，向收集的细胞中加入QIAZOL试剂，震荡混匀，使细胞裂解。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，步骤(1)中，向裂解的细胞中加入氯仿，低温离心。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，步骤(1)中，加入氯仿后，在4℃条件下，12600rpm离心10min。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，步骤(2)中，PCR的反应程序为37℃，2小时；4℃，forever。根据本专利技术具体实施方式的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，步骤(1)中，离心后，上清液转移至新的EP管中，并加入异丙醇，上下颠倒混匀，低温静置10分钟，离心：4℃，12600rpm离心15分钟。本专利技术提供了测定AML患者的预后的方法，其包括，测量来自受试者的受试样品中scaRNA9基因产物的水平(其与AML的特定预后，例如好的或积极的预后、差的或不利的预后相关)。根据这些方法，与对照样品中相应的scaRNA9基因产物的水平相比，受试样品中与特定预后相关的scaRNA9基因产物水平的改变，指示受试者患有具有特定预后的AML。scaRNA9基因产物表达高与不利预后相关。不利预后的实例包括但不限于，低存活率和疾本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.scaRNA9基因在早期判断急性髓系白血病预后中的应用。


2.早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，其特征在于，所述方法包括利用引物对scaRNA9基因进行扩增的步骤，其中，引物序列如下：
scaRNA9上游引物:5'-TGAGCATCAGAAGTCTTTCCAGTC-3'；
scaRNA9下游引物:5'-CACCCTCAATCTCATTCATTCCTAC-3'。


3.根据权利要求2所述的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：
(1)收集急性髓系白血病患者的细胞，提取总RNA；
(2)RNA反转录；
(3)利用引物对caRNA9基因进行实时荧光定量PCR检测；
(4)进行单因素和多因素分析。


4.根据权利要求3所述的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，其特征在于，步骤(1)中，向收集的细胞中加入QIAZOL试剂，震荡混匀，使细胞裂解。


5.根据权利要求4所述的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，其特征在于，步骤(1)中，向裂解的细胞中加入氯仿，低温离心。


6.根据权利要求5所述的早期判断急性髓系白血病患者预后的方法，其特征在于，步骤(1)中，加入氯仿后...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶锋，
申请(专利权)人：北京旌准医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11