改进的酮还原酶突变体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及改进的酮还原酶突变体及其制备方法和应用，所述酮还原酶突变体具有(I)、(II)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(II)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的12至214位氨基酸经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；所述取代为取代1‑14个氨基酸；其中，所述突变体具有酮还原酶的活性。本发明专利技术中通过设计12至214位氨基酸的多个不同位点的突变，发现这些突变体提高了酮还原酶的活性、稳定性、可溶性表达、选择性、还可以降低酮还原酶的使用量。

Improved ketone reductase mutant and preparation method and application thereof

The present invention relates to the field of genetic engineering, in particular an improved ketone reductase mutant and its preparation method and application. The ketone reductase mutant has a sequence of amino acids in the amino acid sequence shown by (I) and (II): (I) and the amino acid sequence shown by SEQ ID NO.1; (II) and SEQ The amino acid sequence of the amino acid sequence shown by ID NO.1 is modified, substituted, missing or added one or a few amino acids, and is substituted for the substitution of 1 amino acids, 14 amino acids, in which the mutant has the activity of a ketone reductase. In the present invention, by designing multiple dislocations of 12 to 214 amino acids, these mutants have found that these mutants increase the activity, stability, soluble expression and selectivity of ketone reductase, and can also reduce the use of ketone reductase.

【技术实现步骤摘要】
改进的酮还原酶突变体及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及改进的酮还原酶突变体及其制备方法和应用。
技术介绍
手性醇是一类非常重要的手性化合物，是合成手性药物和天然产物等的重要中间体。含手性因素的化学药物的对映体在人体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异，当前手性药物的研究已成为国际新药研究的主要方向之一。手性醇化合物在药物合成、农用化学品及其他精细化学品中有着重要应用，如3-氯-1-(4-氟苯基)丙-1-醇及其衍生物是合成抗抑郁药物托莫西汀、尼索西汀的重要的中间体，具有重要的应用价值。目前合成手性醇的方法有物理法和化学法。物理法利用两种对映体的结晶速度和结晶形态不同，来对映体进行分离，但适用性极低，且产率低；化学拆分法是制备手性醇的常用方法，但需要手性试剂，理论产率仅为50％，工艺复杂，要求条件高；Pop等(Pop,LauraAncua；Czompa,Andrea；Paizs,Csaba；Toa,MonicaIoana；Vass,Elemer；Matyus,Peter；Irimie,Florin-Dan-Synthesis,2011,#18,p.2921本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改进的酮还原酶突变体，其特征在于，其具有(I)、(II)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(II)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的12至214位氨基酸经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；所述取代为取代1‑13个氨基酸；其中，所述突变体具有酮还原酶的活性。

【技术特征摘要】
1.一种改进的酮还原酶突变体，其特征在于，其具有(I)、(II)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(II)与SEQIDNO.1所示的氨基酸序列的12至214位氨基酸经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；所述取代为取代1-13个氨基酸；其中，所述突变体具有酮还原酶的活性。2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述取代为第12位、第13位、第15位、第77位、第87位、第122位、第124位、第128位、第147位、第163位、第170位、第193位或第214位中的任意一个或至少两个的氨基酸被取代；优选地，所述突变体的突变位点为F12Y、V13I、Q15S、I77G、P87C、P87R、F122V、Y124L、Y124F、L128F、D147N、T163W、T170K、I193V或F214T中的任意一个或至少两个的组合。3.根据权利要求1或2所述的突变体，其特征在于，所述取代为第87位、第124位、第128位、第147位、第163位、第193位或第214位中的任意一个或至少两个的氨基酸被取代；优选地，所述突变体的突变位点为P87R、Y124F、L128F、D147N、T163W、I193V或F214T中的任意一个或至少两个的组合；优选地，所述取代为第128位和第124位的两个氨基酸被取代，第124为和第163位的两个氨基酸被取代，第87位和第163位的两个氨基酸被取代，第128位和第193位的两个氨基酸被取代，第124位、第163位和第214位...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢江平，刘芳，于文燕，
申请(专利权)人：吉林凯莱英医药化学有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林,22