一种催化效率提高的L-乳酸脱氢酶突变体及其构建方法技术
A L- lactic acid dehydrogenase mutant with improved catalytic efficiency and its construction method
The invention discloses a L lactic acid dehydrogenase mutant with improved catalytic efficiency and a construction method thereof, belonging to the field of gene engineering technology. On the basis of L lactate dehydrogenase, the molecular structure of L lactate dehydrogenase was transformed by site directed mutagenesis, and a strain of Escherichia coli of L lactic acid dehydrogenase was obtained. The mutant enzyme was 6.1 times higher than the enzyme activity, and the catalytic activity was increased by 4.2 times. The invention solves the restrictive problem of low activity of L lactic acid dehydrogenase, and provides a new idea for molecular transformation of L lactic acid dehydrogenase.
【技术实现步骤摘要】
一种催化效率提高的L-乳酸脱氢酶突变体及其构建方法
本专利技术涉及一种催化效率提高的L-乳酸脱氢酶突变体及其构建方法，属于基因工程
技术介绍
NADH依赖型L-乳酸脱氢酶(L-lactatedehydrogenase，L-LDH)能够不对称还原α-酮酸生成手性α-羟基酸，其广泛应用于生物制药、材料和食品等行业。例如L-苯乳酸(L-phenyllacticacid)是一种天然抑菌剂，也可由L-LDH不对称还原苯丙酮酸(phenylpyruvicacid，PPA)催化生成，可以替代食品添加剂和动物饲料中的抑菌剂，也可以作为合成多种药物的前体，还可以作为一种潜在的聚乳酸替代物，合成聚苯乳酸新型高分子材料。一些化学和生物方法可用于合成手性α-羟基酸，但与化学法相比，生物酶法由于其条件温和，环境友好，生成产物纯度高等优点，已成为主要合成方法。但现已发现的大多数野生型L/D-LDH对带有长脂肪链或芳香基团侧链的底物(苯甲酰甲酸，PPA，草酰乙酸等)表现出较低的活性，在一定程度上限制了L/D-LDH的广泛应用。随着人们对L/D-LDH的结构、功能和作用机理的认识不断深...
【技术保护点】
一种催化活性提高的L‑乳酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。
【技术特征摘要】
1.一种催化活性提高的L-乳酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是SEQIDNO.1所示的序列。2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是在如序列SEQIDNO.2所示的氨基酸的基础上，将第229位的异亮氨酸突变成了丙氨酸。3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的核苷酸序列是SEQIDNO.3所示的序列。4.一种含有权利要求1所述突变体的重组表达载体。5.一种表达权利要求1所述L-乳酸脱氢酶突变体的基因工程菌。6.一种权利要求5所述基因工程菌的制备方法，其特征在于，是以携带编码L-乳酸脱氢酶基因的重组质粒为模板，设计并合成引物，通过PCR进行定点突变，得到携带编码突变体基因的重组质粒，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中即得到重组大肠杆菌基因工程菌。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体是以下任意一种：pET-22b(+)、p...
【专利技术属性】
技术研发人员：李剑芳，刘艳，张婷，李雪晴，袁风娇，邬敏辰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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