利用酯酶同工酶电泳法对两系杂交水稻种子进行纯度检验的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用酯酶同工酶电泳法对两系杂交水稻种子进行纯度检验的方法，对以广占６３Ｓ为母本的两系杂交水稻品种丰两优一号、丰两优三号、丰两优香一号的父母本和杂交一代的酯酶同工酶进行电泳分离，找出杂交一代与父母本差异的特征谱带，用于对杂交一代种子受检样品的纯度检验。通过对丰两优一号、丰两优三号、丰两优香一号样品进行检验，其检验的纯度经与田间种植鉴定的纯度对照比较，二者的结果高度一致。适用于对以广占６３Ｓ及衍生系为母本的两系杂交水稻品种及其亲本真实性和种子纯度的检验。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种利用酯酶同工酶电泳法对两系杂交水稻种子进行纯度检验的方法，其特征在于：对以广占６３Ｓ为母本的两系杂交水稻品种丰两优一号、丰两优三号、丰两优香一号的父母本和杂交一代的酯酶同工酶进行电泳分离，找出杂交一代与父母本差异的特征谱带，用于对杂交一代种子受检样品的纯度检验；其具体步骤是：１）样品酯酶同工酶的提取：将种子浸种２４小时后，取发芽３－４天后的幼芽放入１．５ｍｌ离心管中，加入１００μｌ含４０％蔗糖和ｐＨ８．０的０．４ｍｏｌ／Ｌ三羟基氨基甲烷－盐酸的提取液，冰浴磨碎后，用冷冻离心机分离，提取酯酶同工酶制备液；２）置板、灌胶：将垂直板电泳槽玻璃板两侧用凡士林封住后，用琼脂糖封住底部；玻璃板之间按２０ｍｌ量倒入分离胶；待分离胶凝固后，再按８ｍｌ量倒入浓缩胶，插入样品梳；３）点样：浓缩胶凝固后，拔去样品梳，每孔点入２０μｌ酯酶同工酶制备液；４）电泳：点样结束后，电泳仪在稳压３００ｖ的条件下，以２０ｍＡ电流电泳，待指示剂线过浓缩胶后，调至３０ｍＡ，电泳时间为２．５小时；５）染色：指示剂线离胶板底部约１ｃｍ时结束电泳，取下胶片，先在由Ａ预处理液和Ｂ预处理液组成的混合液中预处理２０分钟，再置于由Ａ预处理液、Ｂ预处理液、固蓝Ｂ盐和丙酮组成的混合液中进行染色２０分钟，水洗后，即获样品电泳谱带。６）受检种子纯度检验：用上述方法分别获取标准电泳谱带和受检样品电泳谱带，将受检样品的电泳谱带与标准电泳谱带进行对照比较，获得受检样品的种子纯度。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王兆贤，陈先锋，王友存，徐四静，陈毓芬，李志双，
申请(专利权)人：合肥丰乐种业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]