固定化酶、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种固定化酶、其制备方法及应用。其中，该制备方法包括以下步骤：采用聚乙二醇修饰交联剂，得到聚乙二醇修饰的交联剂；将游离的酶沉淀，然后加入聚乙二醇修饰的交联剂进行交联固定得到固定化酶。应用本发明专利技术的技术方案，采用聚乙二醇修饰的交联剂对酶进行固定，固定后作为无载体固定化酶具有更好的稳定结构，具有更强的机械稳定性。

Immobilized enzyme, its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
固定化酶、其制备方法及应用
本专利技术涉及生物催化
，具体而言，涉及一种固定化酶、其制备方法及应用。
技术介绍
生物催化已经成为重要药物部分、结构单元和中间体的绿色合成最有前景和最有利的技术之一，特别是为手性合成提供了独特的替代途径。合成化学家对连续流合成的兴趣日益增加，现在引起了对生物转化的关注。在工业过程中越来越多地使用酶作为催化剂导致对固定化形式的酶的需求增加，因为它提供了独特的工艺和成本优势。通常称为“生物催化剂”的固定化酶广泛用于工业有机合成和生物转化。生物催化剂可以使用全活细胞、死细胞、粗酶或纯化酶来生产，这取决于酶的类型和应用。酶的可扩大生产和蛋白质工程的进步使得生物催化剂有可能实现商业化应用，并且具有较好的经济价值。新型固定化平台的出现使得固定化酶在连续流动生物催化中完美整合。新型高效酶的发现和进化、强调生物催化的新型反向合成方法、降低的重组蛋白成本和酶固定化策略等都是生物催化在连续合成中应用的良好基础。从概念上讲，制备固定化酶所用的固定主要包括物理吸附、载体结合、包埋和交联等方法。其中，物理吸附依本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n采用聚乙二醇修饰交联剂，得到聚乙二醇修饰的交联剂；/n将游离的酶共沉淀，同时加入所述聚乙二醇修饰的交联剂进行交联固定得到所述固定化酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
采用聚乙二醇修饰交联剂，得到聚乙二醇修饰的交联剂；
将游离的酶共沉淀，同时加入所述聚乙二醇修饰的交联剂进行交联固定得到所述固定化酶。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述采用聚乙二醇修饰交联剂的步骤包括：交联剂与聚乙二醇混合，得到所述聚乙二醇修饰的交联剂；
优选的，所述聚乙二醇为PEG2000～PEG6000；
优选的，所述聚乙二醇与所以交联剂的质量比为1:5～5:1，更有选的，质量比为1:2～3:1；
优选的，所述交联剂为戊二醛或醛基化右旋糖苷
优选的，在室温下混合3～20小时。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶为ω-转氨酶、酮还原酶、环己酮单加氧酶、氨裂解酶、烯还原酶、亚胺还原酶、亮氨酸脱氢酶或腈水解酶。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将游离的酶沉淀包括：
将沉淀剂滴加至含游离酶的溶液中，或将含游离酶的溶液滴加至沉淀剂中；
优选的，所述将游离酶沉淀操作包括将沉淀剂滴加至含游离酶的溶液中，或将含游离酶的溶液滴加至沉淀剂中搅拌。


5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述沉淀剂为选自由硫酸铵、乙醇、正丙醇、异丙醇、乙腈、PEG2000-6000和丙酮组成的组中的一种或多种；其中，作为沉淀剂，硫酸铵的浓度为20～70g/100mL，优选为30～60g/100mL；乙醇的浓度为60～90g/100mL，优选为70～90g/100mL；正丙醇的浓度为50～90g/100mL，优选为60～80g/100mL；乙腈的浓度为50～90g/100mL，优选为60～70g/100mL；丙酮的浓度为50～90g/100mL，优选为60～80g/100mL；PEG2000-6000的浓度为10～60g/100mL，优选为20～40g/100mL。


6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇修饰的交联剂在酶沉淀和聚乙二醇修饰的交联剂进行交联的反应体系中的浓度为20mM～300mM，更优选为50～250mM；
优选的，所述反应体系的温度为2～30℃；
优选的，搅拌所述反应体系0.5～20h后抽滤，用缓冲液洗得到的固定化酶，优选的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。


7.一种固定化酶，其特征在于，所述固定化酶通过如权利要求1至6中任一项所述的制备方法制备得到。


8.根据权利要求7所述的固定化酶，其特征在于，所述固定化酶为ω-转氨酶、酮还原酶、环己酮单加氧酶、氨裂解酶、烯还原酶、亚胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪浩，詹姆斯·盖吉，肖毅，罗杰斯卡·维亚撒·威廉姆斯，崔瑜霞，张娜，赵佳东，高妍妍，
申请(专利权)人：吉林凯莱英医药化学有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22