MiR-19调节剂及其用途制造技术

本发明专利技术提供了miR‑19调节剂及其用途，诸如用miR‑19抑制剂单独或与其他试剂组合促进血管生成和/或伤口愈合。本发明专利技术还提供了用miR‑19抑制剂治疗或预防动脉和心脏状况的方法。还提供了具有作为miR‑19抑制剂的化学基序的寡核苷酸，以及使用所述寡核苷酸在有此需要的受试者中抑制miR‑19的功能或活性的方法。

MiR-19 regulator and its use

The present invention provides miR regulator 19 and its uses, such as promoting angiogenesis and / or wound healing by using miR inhibitor 19 alone or in combination with other agents. The invention also provides a method for treating or preventing arterial and cardiac conditions with miR 19 inhibitor. A oligonucleotide having a chemical base order as a miR 19 inhibitor is also provided, and a method of using the oligonucleotide to inhibit the function or activity of miR 19 in the subjects with the need.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】MiR-19调节剂及其用途对相关申请的交叉引用本申请要求于2015年9月22日提交的美国临时申请No.62/222,079的优先权，其内容通过引用整体并入本文。关于联邦资助研究的声明本专利技术是在国家卫生研究院授予的资助号HL096670下在美国政府支持下完成的。美国政府可对本专利技术享有某些权利。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式提供以代替纸质副本，并且通过引用并入本显示书中。包含序列表的文本文件的名称是MIRG_048_02WO_SeqList_ST25.txt。文本文件为174KB，于2016年9月22日创建，并通过EFS-Web以电子方式提交。专利
本专利技术一般涉及miR-19功能和/或活性的调节剂，例如具有作为miR-19抑制剂的化学基序的寡核苷酸及其用途。专利技术背景微小RNA(miRNA)是一类小的，内源的且非编码的RNA，其能够通过靶向特定的信使RNA(mRNA)并诱导其降解或翻译阻止来负调节基因表达(Ambros，Nature431：350-355(2004)；Bartel，Cell136：215-233(2009))。新近的研究已经将mRNA降解定义为miRNA：mRNA靶物的主要机械论效应(Guoetal.，Nature2010；466：835-840)。MicroRNA已经涉及许多生物学过程，包括调节和维持心脏功能、血管炎症和血管病理学的形成(参见EvaVanRooijandEricOlson，J.Clin.Invest.117(9)：2369-2376(2007)；Chien，Nature447：389-390(2007)；KarthaandSubramanian，J.Cardiovasc.Transl.Res.3：256-270(2010)；Urbichetal.，Cardiovasc.Res.79：581-588(2008))。报告了MiRNA牵涉生物体的发育(Ambros，Cell113：673-676(2003))，并且在许多组织中(Xuetal.，Curr.Biol.13：790-795(2003)；Landgrafetal.，Cell129：1401-14(2007))，在病毒感染过程中(Pfefferetal.，Science304：734-736(2004))差异表达，并且与肿瘤发生有关(Calinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA101：2999-3004(2004))；Calinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA99(24)：15524-15529(2002))。因此，调节治疗性靶物中存在的微小RNA的功能/活性以开发针对多种状况的有效治疗。然而，靶向miRNA的基于反义的治疗剂的递送可以提出几种挑战。对miRNA的结合亲和力和特异性、细胞摄取的效率、和核酸酶抗性是基于寡核苷酸的治疗剂的递送和活性中的所有因素。例如，在将寡核苷酸导入完整细胞中时，它们通常受到核酸酶攻击和降解，导致活性的丧失。如此，有用的反义治疗剂应当对胞外和胞内核酸酶具有良好的抗性，以及能够穿过细胞膜。因此，需要鉴定与疾病相关的miRNA和通过调节与疾病相关的miRNA的活性来治疗疾病、损伤和/或状况的方法。本专利技术也满足这些需求并提供了相关的优点。当对受试者施用时，本文提供的寡核苷酸在效力、递送效率、靶物特异性、稳定性和/或毒性方面可具有优势。专利技术概述在一个方面，本文提供了促进有此需要的受试者中的伤口愈合的方法，其包括施用包含与miR-19互补的序列的miR-19寡核苷酸抑制剂。在一个实施方案中，施用miR-19寡核苷酸抑制剂降低miR-19的功能或活性。在一个实施方案中，miR-19寡核苷酸抑制剂选自表1。在一个实施方案中，所述方法进一步包括施用用于促进伤口愈合的另外的试剂。在一个实施方案中，另外的试剂是miR-92寡核苷酸抑制剂，其包含与miR-92互补的序列。在一个实施方案中，miR-92寡核苷酸抑制剂的施用降低了miR-92的功能或活性。在一个实施方案中，miR-92寡核苷酸抑制剂选自表2。在一个实施方案中，序贯施用miR-19寡核苷酸抑制剂和另外的试剂。在一个实施方案中，同时施用miR-19寡核苷酸抑制剂和另外的试剂。在一个实施方案中，该方法还包括添加生长因子。在一个实施方案中，生长因子是血小板衍生生长因子(PDGF)和/或血管内皮生长因子(VEGF)。在一个实施例中，受试者是人。在一个实施方案中，受试者患有糖尿病。在一个实施方案中，伤口愈合是针对慢性伤口，糖尿病性足溃疡，静脉淤滞腿溃疡或受压溃疡(pressuresore)。在一个实施方案中，与无治疗相比，miR-19寡核苷酸抑制剂的施用在伤口愈合期间产生增加的再上皮化，肉芽形成和/或新生血管发生的速率。在一个实施方案中，与无治疗或仅用miR-19寡核苷酸抑制剂或miR-92寡核苷酸抑制剂治疗相比，miR-19寡核苷酸抑制剂和miR-92寡核苷酸抑制剂的施用在伤口愈合期间导致增加的再上皮化，肉芽形成和/或新生血管发生的速率。另一方面，本文提供了包含与miR-19互补的序列的寡核苷酸抑制剂，其中所述序列还包含一个或多个锁定核酸(LNA)核苷酸和一个或多个非锁定核苷酸，其中至少一个非锁定核苷酸包含化学修饰。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂与miR-19a互补。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂与miR-19b互补。在一个实施方案中，锁定核酸(LNA)核苷酸具有2′至4′亚甲基桥。在一个实施方案中，化学修饰是2′O-烷基或2′卤代修饰。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂具有5′帽结构，3′帽结构或5′和3′帽结构。在一个实施方案中，所述寡核苷酸抑制剂还包含悬垂的亲脂性基团。在一个实施方案中，所述序列选自表1。另一方面，本文提供了药物组合物，其包含含有与miR-19互补的序列的寡核苷酸抑制剂，其中所述序列还包含一个或多个锁定核酸(LNA)核苷酸和一个或多个非锁定核苷酸，其中至少一个非锁定核苷酸包含化学修饰，或其药学可接受盐，以及药学可接受载体或稀释剂。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂与miR-19a互补。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂与miR-19b互补。在一个实施方案中，锁定核酸(LNA)核苷酸具有2′至4′亚甲基桥。在一个实施方案中，化学修饰是2′O-烷基或2′卤素修饰。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂具有5′帽结构，3′帽结构或5′和3′帽结构。在一个实施方案中，寡核苷酸抑制剂进一步包含悬垂的亲脂性基团。在一个实施方案中，所述序列选自表1。在一个实施方案中，所述药物组合物还包含miR-92寡核苷酸抑制剂，其包含与miR-92互补的序列。在一个实施方案中，所述序列选自表2。在一个实施方案中，组合物中miR-19寡核苷酸抑制剂的量与miR-92寡核苷酸抑制剂的量的摩尔比为约1：99至约99：1。在一个实施方案中，miR-19寡核苷酸抑制剂与miR-92寡核苷酸抑制剂的摩尔比率为约1：1。在一个实施方案中，药物组合物用于治疗有此需要的受试者的伤口的方法，所述方法包括将药物组合物施用至受试者。在一个实施方案中，伤口是慢性伤口，糖尿病性足溃疡，静脉淤滞腿溃疡或受压溃疡。在又一个方面，本文档来自技高网...

【技术保护点】
促进有此需要的受试者中的伤口愈合的方法，其包括施用包含与miR‑19互补的序列的miR‑19寡核苷酸抑制剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.22 US 62/222,0791.促进有此需要的受试者中的伤口愈合的方法，其包括施用包含与miR-19互补的序列的miR-19寡核苷酸抑制剂。2.权利要求1的方法，其中所述miR-19寡核苷酸抑制剂降低miR-19的功能或活性。3.权利要求1的方法，其中所述miR-19寡核苷酸抑制剂选自表1。4.权利要求1-3中任一项的方法，其还包括施用用于促进伤口愈合的另外的试剂。5.权利要求4的方法，其中所述另外的试剂是包含与miR-92互补的序列的miR-92寡核苷酸抑制剂。6.权利要求5的方法，其中所述miR-92寡核苷酸抑制剂的施用降低miR-92的功能或活性。7.权利要求5或6的方法，其中所述miR-92寡核苷酸抑制剂选自表2。8.权利要求4-7中任一项的方法，其中序贯施用所述miR-19寡核苷酸抑制剂和所述另外的试剂。9.权利要求4-7中任一项的方法，其中同时施用所述miR-19寡核苷酸抑制剂和所述另外的试剂。10.权利要求1-9的方法，其还包括添加生长因子。11.权利要求10的方法，其中所述生长因子是血小板衍生生长因子(PDGF)和/或血管内皮生长因子(VEGF)。12.权利要求1-11中任一项的方法，其中所述受试者是人。13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述受试者患有糖尿病。14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述伤口愈合是针对慢性伤口、糖尿病性足溃疡、静脉淤滞腿溃疡或受压溃疡。15.权利要求1-3中任一项的方法，其中与无治疗相比，所述miR-19寡核苷酸抑制剂的施用在伤口愈合期间产生增加的再上皮化、肉芽形成和/或新生血管发生的速率。16.权利要求5-9中任一项的方法，其中与无治疗或仅用miR-19寡核苷酸抑制剂或miR-92寡核苷酸抑制剂治疗相比，miR-19寡核苷酸抑制剂和miR-92寡核苷酸抑制剂的施用在伤口愈合期间产生增加的再上皮化、肉芽形成和/或新生血管发生的速率。17.寡核苷酸抑制剂，其包含与miR-19互补的序列，其中所述序列还包含一个或多个锁定核酸(LNA)核苷酸和一个或多个非锁定核苷酸，其中至少一个非锁定核苷酸包含化学修饰。18.权利要求17的寡核苷酸抑制剂，其中所述寡核苷酸抑制剂与miR-19a互补。19.权利要求17的寡核苷酸抑制剂，其中所述寡核苷酸抑制剂与miR-19b互补。20.权利要求17-19中任一项的寡核苷酸抑制剂，其中所述锁定核酸(LNA)核苷酸具有2’至4’亚甲基桥。21.权利要求17-20中任一项的寡核苷酸抑制剂，其中所述化学修饰是2’O-烷基或2’-卤代修饰。22.权利要求17-21中任一项的寡核苷酸抑制剂，其中所述寡核苷酸抑制剂具有5’帽结构、3’帽结构或5’和3’帽结构。23.权利要求17-22中任一项的寡核苷酸抑制剂，其进一步包含悬垂的亲脂性基团。24.权利要求17的寡核苷酸抑制剂，其中所述序列选自表1。25.药...

【专利技术属性】
技术研发人员：WC塞萨，CM达尔比，CL加兰特贝姆，
申请(专利权)人：米拉根医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US