miR‑491在制备用于治疗骨肉瘤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及miR‑491在制备用于治疗骨肉瘤的药物中的应用，包括制备抑制骨肉瘤生长、肺转移和肺转移性复发的药物。将miR‑491与药学上可接受的载体结合后，与抗肿瘤药物和/或药物可接受的辅料复配制成药物组合物。所述药物组合物以miR‑491为活性成分，其中，所述miR‑491的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。所述药物组合物含有与载体结合的miR‑491和/或药物可接受的辅料。本发明专利技术的体内和体外实验证明，miR‑491过表达后可以有效抑制骨肉瘤生长和肺转移；促进顺铂对骨肉瘤细胞的抑制作用和促凋亡作用，说明miR‑491加强含铂类药物的抗癌作用，能用于制备新型的骨肉瘤细胞肺转移的治疗药物，为临床上治疗肺转移性骨肉瘤提供可能。

MiR 491 used for preparing medicine in the treatment of osteosarcoma

【技术实现步骤摘要】
miR-491在制备用于治疗骨肉瘤的药物中的应用
本专利技术涉及医药和生物
，具体涉及一种microRNA在制备用于治疗骨肉瘤的药物中的应用。
技术介绍
骨肉瘤(Osteosarcoma)是起源于骨骼的恶性肿瘤，是骨恶性肿瘤中最多见的一种，其发病率在原发性骨恶性肿瘤中占首位，致残率、致死率高、主要发生在10-25岁年龄段。骨肉瘤患者中75％为青少年男性患者，预后极差，患者术后5年存活率为60％-70％，近些年并未得到进一步提升。治疗失败的主要原因是转移、复发和耐药。据文献报告有30％骨肉瘤患者对化疗产生耐药现象，并有80％的骨肉瘤患者因发生转移而死亡。据报告，骨肉瘤患者一旦发生转移其生存率仅为20-30％。肺转移是骨肉瘤转移的主要方式。在初诊患者中有20％的患者出现远处转移，其中90％为肺转移；接受正规治疗的患者中有50％的患者出现复发，其中80％为肺转移型复发，解决骨肉瘤肺转移和克服耐药可以进一步提高骨肉瘤患者的5年生存率。但目前还没有方法可以有效的治疗骨肉瘤的肺转移和耐药现象。已有大量实体瘤相关研究显示，肿瘤原发灶与转移灶之间在组织特点、基因组表达、细胞生物学行为等多个方面存在较多区别。利用免疫组化和基因测序技术对骨肉瘤患者原发病灶组织与转移灶组织进行检测对比，分析发现，患者原发病灶与骨转移病灶之间的生物学信息以及基因表达具有相似性。但部分转移灶，特别是肺转移灶在组织学和基因表达上与原发病灶具有较大差异。因此在治疗时，极有可能出现对原发病灶有效，而转移病灶无效的情况，反之亦然。在JAFFE等的研究中以阿霉素、顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺(ADM,DDP,MTX,IFO)为主大剂量化疗对骨肉瘤原发疾病取得了74％的5年生存率，但在转移或复发患者中明显疗效更低。这也从侧面证明了对原发灶与转移灶的治疗需要进一步的区分、细化，才能获得最佳效果。近来，人们越来越认识到miRNA是在发育、病理与生理条件下发挥重要作用的调控因子，参与肿瘤的发生、病毒的感染、细胞的分化与功能的发挥等一系列的生命过程中。miRNA是指由19-22个核苷酸组成的、非编码蛋白的RNA。这些小RNA分子非编码蛋白，通过降低mRNA的水平或与mRNA3’UTR相结合抑制翻译，从而降低体内的蛋白水平。非编码RNA分子占人类基因组总量的98％，非编码RNA与蛋白编码RNA的比例与发育的复杂性密切相关。通过对目标基因信使RNA的降解和翻译抑制对细胞生长、发育、分化、死亡等生物过程起着重要的作用。研究表明，人类基因中有1/3的基因直接收到miRNA的调控。最近研究表明包括骨肉瘤在内的大部分肿瘤中存在miRNA的异常表达，而且异常表达的miRNA与肿瘤的发生、发展和患者的预后密切相关。更重要的是靶向此类异常表达的miRNA可以有效的抑制骨肉瘤的转移和复发。miR-491是一种已知道的miRNA，其相关基本信息为：AccessionNo:MIMAT0002807，基本序列为5`-GGAGUACCUUCCCAAGGGGUGA-3`。已有研究报告表明miR-491在前列腺癌、肺癌、直肠癌、胃癌和乳腺癌中异常表达，且起抑癌的作用。然而，其对骨肉瘤的肺转移的影响还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抑制骨肉瘤肺转移的含有miR-491的药物组合物，为临床上治疗肺转移性骨肉瘤提供可能。本专利技术的一个方面提供了miR-491在制备治疗骨肉瘤的药物中的应用，所述miR-491的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示,为5`-GGAGUACCUUCCCAAGGGGUGA-3`。其中，miR-491序列包括经取代和/或缺失和/或添加一个或几个核苷酸，没有或经过化学修饰的特定序列的单链寡核苷酸分子、miR-491的前体或表达特定序列单链核苷酸分子的重组质粒，具有miR-491生物活性的衍生RNA。在一些优选的实施方案中，所述应用包括制备用于抑制骨肉瘤细胞生长、肺转移和肺转移性复发药物。在一些实施方案中，包括将miR-491与药学上可接受的载体结合后，与抗肿瘤药物和/或药物可接受的辅料复配制成药物组合物。本专利技术的另一个方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物以miR-491为活性成分，其中，所述miR-491的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示,为5`-GGAGUACCUUCCCAAGGGGUGA-3`。在一些实施方案中，所述药物组合物含有与载体结合的miR-491和/或药物可接受的辅料。在一些实施方案中，所述药物组合物中含有铂类抗肿瘤药物。在一些优选的实施方案中，所述抗肿瘤药物为顺铂。在一些实施方案中，所述药物组合物可以制备成常见的剂型，例如注射剂、颗粒剂、片剂、胶囊、气雾剂等；给药方式灵活多样。在一些实施方案中，所述载体为一种或多种载体，包括但不限于注射溶媒、等渗调节剂、pH调节剂、稳定剂、保护剂、稀释剂、粘合剂、吸附载体、杀菌剂、螯合剂、表面活性剂、填充剂或崩解剂等。其中，所述注射溶媒选自注射用水、注射用油、乙醇、甘油、聚乙二醇等；其中，所述等渗调节剂选自氯化钠、氯化钾、葡萄糖、碳酸氢钠、乳酸钠、甘油等，氯化钠浓度范围一般为0.5-0.9％，葡萄糖浓度范围一般为4-5％，甘油浓度范围一般为2.25％左右；其中，所述的pH调节剂选自乳酸、柠檬酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸、碳酸钠、碳酸氢钠等，乳酸的浓度范围一般为0.1％左右，柠檬酸的浓度一般为0.5％左右，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的浓度一般为1.7％和0.71％左右，碳酸钠、碳酸氢钠的浓度一般为0.06％和0.005％左右；其中，所述稳定剂选自肌酐、甘氨酸、肌酐的浓度一般为0.5-0.8％，甘氨酸的浓度一般为1.5-2.25％；其中，所述保护剂选自乳糖、蔗糖、麦芽糖、人血白蛋白，乳糖的浓度一般为2-5％，蔗糖的浓度一般为2-5％，麦芽糖的浓度一般为2-5％，人血白蛋白浓度一般为0.2-2％。在一些优选的实施方案中，所述药物组合物是溶液型、混悬型或乳剂型的注射剂。在一些优选的实施方案中，所述药物组合物通过局部注射、静脉注射或静脉滴注的方式给药。也可以采用本领域技术人员所熟知的给药技术进行给药。本专利技术的另一个方面提供了包含前述药物组合物的临床制剂。本专利技术中指的百分比均为体积百分比。本专利技术的有益效果体现在：(1)miR-491能抑制骨肉瘤细胞生长和侵袭能力；(2)miR-491抑制骨肉瘤细胞在活体内成瘤和转移；(3)miR-491能用于制备新型的骨肉瘤细胞肺转移的治疗药物，加强含铂类药物的抗癌作用。本专利技术的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本专利技术而了解。本专利技术的主要目的和其它优点可通过在说明书、权利要求书中所特别指出的方案来实现和获得。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为miR-491对顺铂引起的骨肉瘤细胞生长抑制的影响图；图2为miR-491对顺铂引起的骨肉瘤细胞凋亡的影响图；图3为miR-491对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响图；图4a、4b为在荷瘤模型动物中观察miR-491对骨肉瘤生长和顺铂抑癌作用的影响；图5a、5b为在骨肉瘤肺转移动物模型中观察miR-491对骨本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑491在制备用于治疗骨肉瘤的药物中的应用，其中，所述miR‑491的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.miR-491在制备用于治疗骨肉瘤的药物中的应用，其中，所述miR-491的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括制备用于抑制骨肉瘤生长、肺转移和肺转移性复发的药物。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，包括将miR-491与药学上可接受的载体结合后，与抗肿瘤药物和/或药物可接受的辅料复配制成药物组合物。4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物以miR-491为活性成分，其中，所述miR-491的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括将SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经取代和/或缺失和/或添加一个或...

【专利技术属性】
技术研发人员：许成雄，金花，许猛，罗松，李清，王东，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：重庆,50