用环介导等温扩增方法检测霍乱弧菌的试剂盒及方法技术

涉及一种用环介导等温扩增方法检测霍乱弧菌的试剂盒及方法。试剂盒包括环介导等温扩增反应液Ａ、Ｂｓｔ　　ＤＮＡ聚合酶Ｂ、显色剂Ｃ；反应液Ａ含有反应缓冲液、ｄＮＴＰ、硫酸镁、上游内引物ｇｔｃｃｃａｔｇｇｇｔａｇａｃｃａｃｃａｇａｔｔｔｔａａｃｃａｔｔｔｃｇａｃｃｇｇｔｔｃｔｃ、下游内引物ｔａｔｃｇｔｔｇａｇａｔｃｃｔｃｇｇｃｃｃｔｔｔｔｔｔｔｇｔｇｃａｇｃａｇｃａａｔｃａｇｔ、上游外引物ｔｇｃａｃｔｔａｇｇｃｇａｃａａｃｃ、下游外引物ａｃｇｃａｃａｇｇｔｔｔｔａｃｃｔｔｃａ和甜菜碱；检测霍乱弧菌的方法包括细菌ＤＮＡ的提取、霍乱弧菌的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高且成本低。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种用环介导等温扩增方法检测霍乱弧菌的试剂盒，其试剂包括：（１）环介导等温扩增反应液Ａ：含有１０×Ｔｈｅｒｍｏｐｏｌ反应缓冲液、３００－５００ｕＭｄＮＴＰ、２－４ｍＭ硫酸镁、０．８－１．２ｕＭ上游内引物、０．８－１．２ｕ Ｍ下游内引物、０．２－０．３ｕＭ上游外引物、０．２－０．３ｕＭ下游外引物和１－１．５Ｍ甜菜碱；其中：１０×Ｔｈｅｒｍｏｐｏｌ反应缓冲液含有２００ｍＭｐＨ８．８的三羟基甲基氨基甲烷－盐酸、１００ｍＭ氯化钾、１００ｍＭ硫酸铵 、２０ｍＭ硫酸镁和１％曲拉通Ｘ－１００；上游内引物为：ｇｔｃｃｃａｔｇｇｇｔａｇａｃｃａｃｃａｇａｔｔｔｔａａｃｃａｔｔｔｃｇａｃｃｇｇｔｔｃｔｃ；下游内引物为：ｔａｔｃｇｔｔｇａｇａｔｃｃｔｃｇｇｃｃｃｔｔｔｔｔｔｔｇｔｇ ｃａｇｃａｇｃａａｔｃａｇｔ；上游外引物为：ｔｇｃａｃｔｔａｇｇｃｇａｃａａｃｃ；下游外引物为：ａｃｇｃａｃａｇｇｔｔｔｔａｃｃｔｔｃａ；（２）ＢｓｔＤＮＡ聚合酶Ｂ：每微升含８个活性单位；（３）显色剂Ｃ： 为１０％的荧光染料ＳＹＢＲＧＲＥＥＮＩ。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任春华，胡超群，罗鹏，王青柏，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]