一种新的肌动蛋白结合蛋白及编码它的多核苷酸序列制造技术

本发明专利技术公开了分离的肌动蛋白结合蛋白基因的多核苷酸序列及其编码的多肽，以及制备这种多肽的方法。并且公开了通过检测该基因核酸水平的突变及多肽水平的改变，检测与该基因的核酸及其编码多肽异常有关的疾病的诊断方法，也公开了利用该基因的多核苷酸序列和多治疗与该基因异常有关的疾病的用途和用于上述治疗的药物组合物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种新的人肌动蛋白结合蛋白(以下简称为ABP)及编码它的多核苷酸序列，还涉及所述蛋白质和多核苷酸在诊断、预防和治疗与该蛋白质表达异常相关疾病中的应用。细胞骨架主要由3种蛋白纤维组成微管、微丝和中间丝，其中微丝是肌动蛋白的多聚体，与大量肌动蛋白结合蛋白和相关蛋白一起构成了肌动蛋白细胞骨架。肌动蛋白基因在进化上相当保守，来源于不同生物的肌动蛋白分子在功能上可以相互替代。肌动蛋白在体内以2种形式存在单体(G-actin)和多聚体(F-actin)。在哺乳动物细胞中，肌动蛋白细胞骨架对于细胞运动和表面重新建膜来说必不可少，它可以介导有丝分裂中细胞形状的变化；它对一些与收缩有关的活动非常重要，如肌肉收缩或胞质分裂时收缩环作用下的子细胞分离；它控制细胞与细胞间、细胞与底物间以及与粘着分子间的相互作用；它还参与跨膜信号传导、内吞作用、分泌作用、胞浆的组织、胞内机械作用力的产生、胞内运输和神经元形态发生等重要过程。迄今为止，肌动蛋白结合蛋白可以根据其功能特性分为肌动蛋白单体结合蛋白、加帽蛋白、交联蛋白、膜相关蛋白等几大类。然而，近年来发现一些肌动蛋白结合蛋白如Cofilin、Gelsolin和Profilin等往往同时具有以上多种功能，而且在肌动蛋白的同一位点可能有几大类蛋白同时与之作用，例如外周结合蛋白、肌动蛋白切割蛋白和交联蛋白都可以在相似位点与多聚体肌动蛋白发生作用。各种肌动蛋白结合蛋白与肌动蛋白协同作用，在细胞中发挥着多种多样的功能。例如Mayven Soltysik-Espanola M，Rogers RA，Jiang S，等人，分子细胞生物学(Mol Biol Cell)(1999)，10(7)2361-75]，一种主要在脑中表达的肌动蛋白结合蛋白，在N端有BTB／POZ结构域，可以自我聚合，可能与其它含此结构域的蛋白相互作用，C端有“kelch重复”，介导其与肌动蛋白的结合，在脑细胞的动态组织和轴突信号传递过程中起重要作用；肌浆球蛋白轻链激酶可以使肌浆球蛋白轻链磷酸化，调控肌浆球蛋白与肌动蛋白的结合，是平滑肌收缩的主要调节物，在治疗肌肉失调方面有重要作用；Synapsin I也是一种肌动蛋白结合蛋白，可以调控突触小泡在神经末端的运输；Villin是一种钙离子调节的肌动蛋白结合蛋白，主要产生于负责营养吸收的上皮细胞中，能够在体外调节肌动蛋白微丝的结构与组装，在微绒毛的形态发生中起重要作用；IQGAP是一种新认定的肌动蛋白结合蛋白，被认为是Cdc42和Rac GTP结合蛋白的靶分子，是高尔基体膜细胞骨架复合物的组成部分，介导膜内Cdc42对肌动蛋白细胞骨架的调控；在研究肌动蛋白结合蛋白对膜的组成的调控时发现，肌动蛋白结合蛋白可以使细胞膜上的粘着受体得到有效表达，且并不是通过与受体的直接作用或与肌动蛋白微丝的交联而起作用。在哺乳动物细胞中，肌动蛋白细胞骨架主要受Rho GTPase信号传导系统的调控，与Rho、Rac和Cdc42等蛋白相关，这也为疾病治疗提供了很多机会，如对肿瘤、高血压和真菌、细菌感染的治疗等。由于如上所述肌动蛋白结合蛋白在调节肌肉和微绒毛等组织器官的运动、在调节神经信号传递、细胞骨架的信号传导调控等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的肌动蛋白结合蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新肌动蛋白结合蛋白编码基因的分离也为确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和／或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的目的就是提供一种新的人肌动蛋白结合蛋白及编码它的多核苷酸。本专利技术涉及一种分离的多肽，它包含具有SEQ ID No．2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No．2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少80％相同性的多核苷酸。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制肌动蛋白结合蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与肌动蛋白结合蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术还涉及利用本专利技术的多核苷酸或其片段作为引物用于核酸扩增反应，或者作为探针用于杂交反应，或者用于制造基因芯片或微阵列的用途。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和／或多核苷酸在制备用于治疗癌症、免疫系统疾病、高血压、肾脏衰竭、肌肉萎缩、营养不良、神经细胞信号传导紊乱、病毒和细菌感染或胞外过量肌动蛋白的存在所引起疾病的药物的用途。本专利技术上述的和其它的方面对于本领域的技术人员来说，从本文以下的详细描述看应该是很清楚的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与ABP结合时，一种可引起该蛋白质改变从而上调该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合ABP的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与ABP结合时，一种可封闭或下调ABP的生物学活性或免疫学活性的分子。拮抗剂和抑制物可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合ABP的分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，它包含具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２氨基酸序列的多肽、或其保守性变体或其活性片段或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]