一种新的人Fe65L2-2蛋白及编码它的多核苷酸序列制造技术

本发明专利技术公开了分离的人Ｆｅ６５Ｌ２－２基因的多核苷酸序列及其编码的多肽，以及制备这种多肽的方法。并且公开了通过检测该基因核酸水平的突变及多肽水平的改变，检测与该基因的核酸及其编码多肽异常有关的疾病的诊断方法，也公开了利用该基因的多核苷酸序列和多肽治疗与该基因异常有关的疾病的用途和用于上述治疗的药物组合物。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种新的人Fe65L2-2蛋白及编码它的多核苷酸序列，还涉及所述蛋白质及其编码多核苷酸序列在诊断、预防和治疗与该蛋白质表达异常相关疾病中的应用。Fe65是一个基因家族的总称，目前已发现的成员都有三个重要结构域PID1、PID2和WW区域。Fe65蛋白被认为是一个连接分子，包括有三个蛋白-蛋白相互作用区两个磷酸酪氨酸作用区(PID)或磷酸酪氨酸结合区(PTB)和一个含有两个保守色氨酸残基的WW区。其中，Fe65蛋白的PID2区域可与淀粉样沉淀前体蛋白(APP)的胞内结构域结合。Fe65的另一个PID／PTB区，即N末端的PID1区域，它可与CP2、LSF、LBP1等蛋白作用，参与一个复杂的细胞内运输过程。Fe65还有另一个区域-WW区域。WW区域为一个由38个半保守氨基酸组成的特征序列。WW区域主要功能是介入一系列复杂的细胞内信号传递作用。综上所述，Fe65的两个PID／PTB区域与WW区域都具有信号传递蛋白的特征，同复杂的信号传导网络有关。已知淀粉样沉淀是阿尔茨海默症的主要病理特征(Glenner，G．G．，等人，(1984)，生物化学生物物理研究通讯(Biochem．Biophy．Res．Commu．)，120885-890)。淀粉样沉淀的主要成分Aβ衍生自APP的蛋白质水解加工(Goldgaber，D．等人，(1987)，科学(Science)，235877-880；Kang，J．等人，(1987)，自然(Nature)，325733-736)。至少有三种分泌酶(secretase)即α-分泌酶、β-分泌酶和γ-分泌酶参与了APP的加工(Weidmann，A．等人，(1989)细胞(Cell)，57115-126；Esch，F．S．等人，(1990)科学2481122-1124；Seubert，P．等人，(1992)，自然，359325-327)。其中，经过β-分泌酶和γ-分泌酶切割APP产生Aβ，而α-分泌酶在形成Aβ之前于APP的Aβ结构域中切割得到APP。大量的Aβ的积累和聚集促进了淀粉样沉淀的形成。Sabo等人于美国专利5，928，882中指出，膜上APP蛋白的量与最终形成Aβ的量正相关。而Fe65可通过结合APP，增加APP从高尔基体中向质膜运输的量，或是增加了在被内吞后重新回到细胞表面的APP的量。因此，如果抑制Fe65与APP的结合，可降低膜上APP的量，从而可减少Aβ的形成和聚集。最近Tanahashi等人报道从人胎脑cDNA文库中克隆到的hFe65L2基因，它编码484个氨基酸，其序列与小鼠的Fe65L2蛋白有86％的同源性，并同时报道了一种缺少两个氨基酸残基的剪切变体(Tanahashi，H．等人，(1999)，神经科学通讯(NeuroscienceLetters)261143-146)。由于如上所述可知，Fe65蛋白与APP蛋白的相互作用对于Aβ的积累和聚集以及淀粉样沉淀的形成有重要影响，减少Fe65蛋白的含量或抑制其与APP蛋白结合对于治疗与Aβ的积累和聚集以及淀粉样沉淀的形成相关的疾病如阿尔茨海默症、痴呆等十分重要。因此本领域一直迫切需要更全面的鉴定和了解参与上述结合过程的Fe65家族的各个蛋白质成员，特别是鉴定这些蛋白质成员的氨基酸序列。本专利技术基于对Fe65家族中的一个新成员，即本专利技术的Fe65L2-2及其编码基因的分离与表征，为诊断、治疗和／或预防神经退行性疾病如与Aβ的积累和聚集以及淀粉样沉淀的形成相关的疾病打下了基础。本专利技术的蛋白具有针对上述疾病的诊断、治疗和／或用途的前景，因此分离其编码多核苷酸序列是非常重要的。本专利技术的目的就是提供一种新的人Fe65L2-2蛋白及编码它的多核苷酸序列。本专利技术涉及一种分离的多肽，它包含具有SEQ ID No．2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No．2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少89％相同性的多核苷酸，不包括已报道的hFe65L2基因。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选拮抗或抑制Fe65L2-2蛋白与APP蛋白质相互作用的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及利用所得的化合物治疗、检测和／或预防疾病的方法。本专利技术还涉及一种体外检测与Fe65L2-2蛋白含量增加或活性升高相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术还涉及利用本专利技术的多核苷酸作为引物用于核酸扩增反应、作为探针用于杂交反应以及用于制备基因芯片或微阵列的用途。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有针对本专利技术多肽的抗体或其免疫活性片段、或者是本专利技术多肽的模拟物、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及针对本专利技术的多肽的抗体和／或反义多核苷酸在制备用于治疗神经退行性疾病如阿尔茨海默症和痴呆等的药物的用途。本专利技术上述的和其它的方面对于本领域的技术人员来说，从本文以下的详细描述看应该是很清楚的。附图说明图1为用GCG软件包中的gap程序将人FE65L2-2的核酸序列(中间)与hFE65L2(下排)的序列作双序列比较的结果，发现多出一段21bp的序列。而在做相似性比较时可以找到与人FE65L2-2基因完全对应的基因组序列(上排)，其是序列号为ac005214的BAC。从比较的结果可看到这段21bp的序列位于内含子与外显子的交界处。其中斜黑体的部分为内含子部分。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽，它包含具有ＳＥＱ ＩＤ Ｎｏ．２氨基酸序列的多肽、或其保守性变体或其活性片段或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博容基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]