本发明专利技术公开了一种聚酮类化合物pestalpolyol A在作为治疗阿尔茨海默病药物中的应用。本发明专利技术以阿尔茨海默病的秀丽隐杆线虫模型CL4176作为研究靶标、阿尔茨海默病的商品化药物加兰他敏为阳性对照，本发明专利技术从大量天然产物或人工合成化合物中筛选出能够有效抑制线虫CL4176麻痹的小分子化合物，麻痹实验结果证明，加入相同浓度的pestalpolyol A相比于阳性对照加兰他敏具有更好的抑制线虫麻痹的效果，在100μM浓度范围内该抑制作用具有浓度依赖性，且细胞毒性较小。
Polyketone compound pestalpolyol A as an application in the treatment of Alzheimer's disease
The invention discloses a polyketide compound pestalpolyol A in the application as drug treatment of Alzheimer's disease. The Caenorhabditis elegans CL4176 model of Alzheimer's disease as the research target, the commercialization of drug galanthamine in Alzheimer's disease as a positive control, the invention screening of small molecule compounds can effectively inhibit nematode CL4176 paralysis from a large number of natural products or synthetic compounds, paralysis, experimental results show that with the same concentration of pestalpolyol compared to A in the positive control of galanthamine has better inhibition effect of the nematode paralysis, inhibition is concentration dependent at 100 M concentration range, and low cell toxicity.
【技术实现步骤摘要】
聚酮类化合物pestalpolyolA在作为治疗阿尔茨海默病药物中的应用
本专利技术属于生物医药
，尤其涉及聚酮类化合物pestalpolyolA在作为治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(AD)是一种常见的老年性神经退行性疾病。该疾病的临床症状为记忆、认知和心理能力障碍逐步恶化，最终导致患者丧失生活自理能力、必须依靠别人的帮助才能进行日常生活。因此，阿尔茨海默的患者将给家庭和社会带来了沉重的经济负担。2014年世界卫生组织WHO统计，全球有超过3600万阿尔茨海默病患者，且到2050年，阿尔茨海默病人将达到11500万。β淀粉样蛋白肽(Aβ)是一种跨膜蛋白，它是阿尔茨海默发病中的关键致病因子。β淀粉样蛋白的前体通过β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用产生Aβ，并在大脑中积累造成早期的病理改变大脑斑块和神经元纤维缠结，这被认为是阿尔茨海默氏症的主要发病机理，也与阿尔茨海默病中的痴呆征兆相关。尽管对阿尔茨海默病的发病机制有所了解，但目前抑制或逆转阿尔茨海默氏病的药物仍然非常有限。因此以筛选对治疗阿尔茨海默病有效的药物是非常有意义的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于筛选出对治疗阿尔茨海默病的有效的化合物。该化合物是从拟盘多毛孢属菌株CR013中分离出的中间代谢产物，经光谱学、核磁共振成像和X射线晶体学鉴定其结构为聚酮类化合物pestalpolyolA。该化合物在阿尔茨海默病模型线虫株CL4176筛选模型中，比目前使用的商品化药物加兰他敏有更好的抑制线虫麻痹的效果。本专利技术的技术方案如下：聚酮类化合物pestalpolyolA在作为治疗阿尔茨海默病药物中的应用。所述pestalpolyolA的分子结构式如下：本专利技术采用秀丽隐杆线虫CL4176作为阿尔茨海默病药物筛选的动物模型，线虫模型CL4176可以在温度升高至25℃条件下诱导表达Aβ、出现神经肌肉麻痹的现象。再加之秀丽隐杆线虫的结构简单、身体透明、易于观察、繁殖周期短等生物学特征，使线虫CL4176成为阿尔茨海默病药物筛选的优秀动物模型之一。在本专利技术的研究中，以阿尔茨海默病的秀丽隐杆线虫模型CL4176作为研究靶标、阿尔茨海默病的商品化药物加兰他敏为阳性对照，本专利技术从大量天然产物或人工合成化合物中筛选能够有效抑制线虫CL4176麻痹的小分子化合物，最终发现聚酮类化合物pestalpolyolA具有较阳性对照加兰他敏更好的抑制线虫麻痹的效果，而目前国内外文献中均未见有pestalpolyolA对治疗阿尔茨海默病有效的报道。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术加入相同浓度的pestalpolyolA相比于阳性对照加兰他敏具有更好的抑制线虫麻痹的效果，在100μM浓度范围内该抑制作用具有浓度依赖性，且细胞毒性较小。附图说明图1为比较pestalpolyolA及其结构类似物pestalpolyolB、pestalpolyolG、pestalpolyolE、pestalpolyolF对线虫麻痹的抑制效果；图2为不同浓度的pestalpolyolA在阿尔茨海默病线虫模型中对线虫麻痹的抑制效果。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步详细说明，但本专利技术并不局限于以下技术方案。实施例1筛选对阿尔茨海默病模型线虫株CL4176有疗效的化合物(1)将阿尔茨海默病模型线虫株CL4176培养在铺满大肠杆菌E.coliOP50的培养基上，15℃恒温培养箱中约3-4天，观察大部分线虫开始产卵即可同步化。(2)步骤(1)的虫子同步化后在15℃恒温培养箱中培养48h孵出L1。(3)准备含有NGM的培养皿。分别加入30μMpestalpolyolA及其结构类似物pestalpolyolB、pestalpolyolG、pestalpolyolE、pestalpolyolF各200μL并吹干，然后再加200μlE.coliOP50吹干后放置于37℃恒温培养箱过夜培养。每次实验设置空白对照组，即只加200μL的溶剂丙酮和200μLE.coliOP50，阳性对照组为200μL浓度为30μM加兰他敏Galantamine和200μLE.coliOP50，每次实验三个平行。(4)孵出的L1的线虫接到步骤(3)的培养板上，每个板大约20-30条虫。(5)将步骤(4)的线虫培养在15℃的恒温培养箱中40h后再将转移至25℃恒温培养箱中。(6)25℃恒温培养箱继续培养24小时后，对出现肌肉麻痹的线虫进行计数。用头发丝碰线虫，线虫没有完整的身体波动或者只有头部在动即视为麻痹。每隔两小时观察一次样品，直到阴性对照样品中的受试线虫全部麻痹。(7)对各种处理中线虫的麻痹率进行生物学统计，用GraphPadPrism5作图记录，见图1。如图1所示，加入30μMpestalpolyolA的实验组较加入相同浓度阳性对照加兰他敏能更好地抑制线虫麻痹，且与其它结构类似物pestalpolyolB、pestalpolyolG、pestalpolyolE、pestalpolyolF相比，pestalpolyolA具有最强的活性。实施例2不同浓度的pestalpolyolA治疗阿尔茨海默病(1)将CL4176线虫培养在铺满OP50的培养基上，15℃恒温培养箱中约3-4天，观察大部分线虫开始产卵即可同步化。(2)步骤(1)的虫子同步化后在15℃恒温培养箱中培养48h孵出L1。(3)准备含有NGM的培养皿，分别加入浓度为10，30，50，100，200，300，500μM的化合物pestalpolyolA200μL并吹干，再加200μL的E.coliOP50吹干后放置于37℃恒温培养箱过夜培养。每次实验设置空白对照组(只加200μL的溶剂丙酮和200μL的E.coliOP50)，阳性对照组(200μL的30μM加兰他敏Galantamine和200μL的E.coliOP50)，每次实验三个平行。(4)孵出的L1的线虫接到步骤(3)的培养板上，每个板大约20-30条虫。(5)将步骤(4)的线虫培养在15℃的恒温培养箱中40-44h后再将板转到25℃的恒温培养箱中。(6)步骤(5)中转温度后的22-24小时开始数虫，每隔两小时数一次计数，直到线虫全部麻痹。用头发丝碰线虫，线虫没有完整的身体波动或者只有头部在动即视为麻痹。(7)统计麻痹率，用GraphPadPrism5作图记录，见图2。如图2所示，实验组加入不同浓度的pestalpolyolA，在200μM浓度范围内pestalpolyolA均能显著的抑制线虫麻痹，且在100μM浓度范围内该抑制作用具有浓度依赖性。实施例3聚酮类化合物pestalpolyolA的细胞毒性检测MTT法：(1)收集对数期细胞，在96孔细胞板的3-10列每孔加入100μL细胞悬液,铺板并调整细胞密达到104/孔，于孔板2、11列再加100μL无细胞的培养基,孔板1、12列用100μL的无菌PBS填充。(2)5％CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满96孔细胞板孔底。细胞贴壁后即可加药，本实验在加药前一天下午铺板，次日上午加药。3和4列加10μM的药物，5和6列加30μM的药物，7和8列加50μM的药物，每孔10μL,设16个复孔。(3)5％CO2，37℃孵育48小时，本文档来自技高网...
【技术保护点】
聚酮类化合物pestalpolyol A在作为治疗阿尔茨海默病药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.聚酮类化合物pestalpolyolA在作为治疗阿尔茨海默病药物中的应用。2....
【专利技术属性】
技术研发人员：黄晓玮，赵沛基，孙诺竹玛，张东华，李玉宏，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：云南,53
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