本发明专利技术公开了不吸水链霉菌W‑273聚酮产物的鉴定及其应用。本发明专利技术提供了提供了不吸水链霉菌(Streptomyces ahygroscopicus)W‑273CGMCC NO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备制霉菌素中的应用；不吸水链霉菌(Streptomyces ahygroscopicus)W‑273CGMCC NO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备具有抑菌功能产品中的应用。本发明专利技术的实验证明了，不吸水链霉菌W‑273能够产生一种聚酮产物，且这种聚酮产物具有制霉菌素成分A1的结构，对真菌具有良好的抑制作用，在农业生产上能够具有开发成生物防治产品的潜能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，尤其属于微生物次级代谢产物领域，具体涉及一种不吸水链霉菌W-273聚酮产物的鉴定及其应用。
技术介绍
链霉菌是一类来源于土壤的革兰氏阳性细菌，它可以产生大量的活性次生代谢产物,这些活性产物从功能上划分为抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、抗结核、免疫抑制等；从结构上划分为核苷类、多肽类、糖肽类、β-内酰胺类及聚酮类化合物等等,其中研究较多的聚酮类化合物主要包括大环内酯类、安莎类、聚醚类、蒽环类、角蒽环类及四环素类等。聚酮类化合物生物合成基因簇，是以羧酸缩合反应形式进行的。如红霉素(Streptomyceserytheara)和制霉菌素(Streptomycesnoursei)等。制霉菌素最早发现是由链霉菌Streptomycesnoursei所产生的一种抗真菌药，属于一种多烯类大环内酯，具有广谱性，对细菌无抑制作用。目前，在医学上主要用于内服治疗消化道真菌感染或外用于表面皮肤真菌感染，对农业昆虫的研究发现，高浓度制霉菌素处理能显著抑制褐飞虱体内类酵母共生菌数量,进而影响类酵母共生菌的营养合成功能。目前，关于其他链霉菌菌株可以产生制霉菌素及其在农业病害防治上的应用鲜有报道。因此，开发一种新的制霉菌素产生菌并将其应用在农业病害防治上，具有一定的创造性及新颖性，且进一步丰富了生物防治产品的种类。
技术实现思路
本专利技术一个目的是提供不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物的用途。本专利技术提供了不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备制霉菌素中的应用；或，不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备具有抑菌功能产品中的应用。上述制霉素为制霉素A1。本专利技术另一个目的是提供一种具有抑菌功能产品，其活性成分为不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物。上述中，所述抑菌为抑制红酵母菌；或所述提取物为甲醇提取物。本专利技术另一个目的是提供一种制备制霉菌素的方法。本专利技术提供的方法，包括如下步骤：1)发酵不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604，收集发酵产物；2)用有机溶剂萃取所述发酵产物，得到甲醇提取物，即得到制霉菌素。上述方法中，所述有机溶剂为甲醇、正丁醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿；或，在步骤2)中得到甲醇提取液后，还包括如下步骤：用液相色谱纯化所述甲醇提取液，收集保留时间与制霉菌素标准品一致的产物，得到制霉菌素；所述液相色谱纯化的条件为：流动相为乙腈和水等体积混合溶液；进样速度：0.5mL·min-1或1.0mL·min-1。进样量：10μL；柱温：25℃；检测波长：305nm。上述方法中，所述用甲醇萃取所述发酵产物包括如下步骤：1)收集所述发酵产物中的沉淀；2)向所述沉淀中加入所述甲醇混匀，反应，收集反应产物中的上清液，得到甲醇提取物。上述方法中，所述甲醇的加入量为按所述发酵产物与所述甲醇体积比为1：1的量加入；或所述反应的时间为30min-60min。上述方法中，所述发酵采用的培养基，每L由质量百分含量3.0％大豆粉、质量百分含量0.8％玉米粉、质量百分含量1.0％-4.0％燕麦片、质量百分含量0.01％-0.2％NaCl、质量百分含量0.01％-0.2％MgSO4、质量百分含量0.01％-0.2％％K2HPO4、质量百分含量0.01％-0.3％FeSO4、质量百分含量0.01％-1.0％CaCO3、质量百分含量0.01％-0.5％(NH4)2SO4和水组成；或，所述发酵采用的培养基，每L由质量百分含量3.0％大豆粉、质量百分含量0.8％玉米粉、质量百分含量2.0％燕麦片、质量百分含量0.02％NaCl、质量百分含量0.02％MgSO4、质量百分含量0.02％K2HPO4、质量百分含量0.02％FeSO4、质量百分含量0.5％CaCO3、质量百分含量0.25％(NH4)2SO4和水组成；或，所述发酵的条件为28℃、200r·min-1、96h。上述制霉素为制霉素A1。本专利技术另一个目的是提供一种制备不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604发酵产物的甲醇提取物的方法。本专利技术提供的方法，包括上述的步骤1)-2)：得到甲醇提取物。上述的方法制备的甲醇提取物也是本专利技术保护的范围；或所述甲醇提取物在制备具有抑菌功能产品中的应用也是本专利技术保护的范围。不吸水链霉菌W-273(Streptomycesahygroscopicus)于2014年8月26日，保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.9604，分类命名：不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)。本专利技术的实验证明，不吸水链霉菌W-273能够产生一种聚酮产物，且这种聚酮产物具有制霉菌素成分A1的结构，对真菌具有良好的抑制作用，在农业生产上能够具有开发成生物防治产品的潜能。附图说明图1为武夷菌素生物合成基因簇。图2为聚酮化合物骨架的合成。图3为制霉菌素成分A1的化学结构图。图4为聚酮产物的抑菌活性测定。图5为W-273发酵N,N-二甲基甲酰胺萃取液的液相色谱图。图6为制霉菌素纯品抑菌活性测定。图7为甲醇萃取液的抑菌活性测定。图8为W-273发酵甲醇萃取液的液相色谱图。图9为优化液相条件后W-273发酵甲醇萃取液的液相色谱图。图10为优化液相条件后W-273发酵甲醇萃取液的液相色谱图。图11为W-273发酵甲醇萃取液的质谱图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、不吸水链霉菌W-273生产聚酮产物的预测一、不吸水链霉菌W-273的聚酮生物合成基因簇的挖掘不吸水链霉菌W-273(Streptomycesahygroscopicus)于2014年8月26日，保藏于中国微生物保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.9604，分类命名：不吸水链霉菌武夷变种(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensis)。采用不吸水链霉菌W-273(Streptomycesahygroscopicusvar.wuyiensisstrainW-273)(保藏号：CGMCCNO.9604)作为通过全基因组扫描及测序缺口的填补，最终获得了12834bp与武夷菌素生物合成相关的连续聚酮基因簇序列，并利用专利一种链霉菌中聚酮生物合成基因簇及其扩增引物与试剂盒所公开的引物对，进行扩增，最后获得完整的基因簇序列。使用RAST软件对所获得的聚酮生物合成基因簇序列进行开放阅读框本文档来自技高网...
【技术保护点】
不吸水链霉菌(Streptomyces ahygroscopicus)W‑273CGMCC NO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备制霉菌素中的应用；或，不吸水链霉菌(Streptomyces ahygroscopicus)W‑273CGMCC NO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备具有抑菌功能产品中的应用。
【技术特征摘要】
1.不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备制霉菌素中的应用；或，不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物在制备具有抑菌功能产品中的应用。2.一种具有抑菌功能产品，其活性成分为不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604或其发酵产物或其发酵产物的提取物。3.根据权利要求1所述的应用或2所述的产品，其特征在于：所述抑菌为抑制红酵母菌；或所述提取物为甲醇提取物。4.一种制备制霉菌素的方法，包括如下步骤：1)发酵不吸水链霉菌(Streptomycesahygroscopicus)W-273CGMCCNO.9604，收集发酵产物；2)用有机溶剂萃取所述发酵产物，得到甲醇提取物，即得到制霉菌素。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述有机溶剂为甲醇、正丁醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿；或，在步骤2)中得到甲醇提取液后，还包括如下步骤：用液相色谱纯化所述甲醇提取液，收集保留时间与制霉菌素标准品一致的产物，得到制霉菌素；所述液相色谱纯化的条件为：流动相为乙腈和水等体积混合溶液；进样速度：0.5mL·min-1或1.0mL·min-1。6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述用甲醇萃取所述发酵产物包括如下步骤：1)收集所述发酵产物中的沉淀；2)向...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛蓓孛，张克诚，刘炳花，赵文珺，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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