海绵的化学成分提取方法技术

本发明专利技术涉及一种海绵的化学成分提取方法，步骤如下：将海绵样品搅碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏36.2g。经100~200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2,v/v)，得到粗组分。对上述粗组分进行进一步分离纯化，首先用手性柱进行分离，然后采用半制备高效液相色谱HPLC进行分离纯化。本发明专利技术综合利用TCL、CC、ODS、SephadexLH-20、HPLC等现代色谱分离技术，从海绵Pericharaxheteroraphis中分离得到7个化合物。包括5个咪唑类生物碱(PH-1~PH-5)，1个聚酮类化合物(PH-6)，1个核苷类化合物(PH-7)。除化合物PH-2其余化合物均为首次从本属海绵中获得。

Extraction methods of chemical constituents of sponge

Extraction method, chemical composition of the present invention relates to a sponge comprises the following steps: mixing crushed sponge samples, at room temperature with methanol extracted 4 times, each time for 3 days; combined extraction, vacuum concentration, three times with anhydrous methanol desalting, total extract 36.2g. Crude fractions were obtained by 100~200 vacuum column column chromatography (100:1 to 1:2, v/v) followed by gradient elution of petroleum ether / acetone. Further separation and purification of the crude components were carried out. Firstly, the column was separated by chiral column and then separated and purified by semi high performance liquid chromatography HPLC. The present invention comprehensively utilizes TCL, CC, ODS, SephadexLH-20 and HPLC and other modern chromatographic separation techniques to separate 7 compounds from sponge Pericharaxheteroraphis. 5 imidazole alkaloids (PH-1~PH-5), 1 polyketide compounds (PH-6), and 1 nucleoside compounds (PH-7) were included. In addition to compounds PH-2, all other compounds were obtained from this genus sponge for the first time.

【技术实现步骤摘要】
海绵的化学成分提取方法
本专利技术属于海洋生物医药
，具体涉及一种海绵的化学成分提取方法。
技术介绍
海洋生物碱作为海洋生物的一种特征次级代谢产物，以其结构的新颖性、多样性和显著的生物活性成为海洋天然产物的重要研究对象。到目前为止，海洋来源的天然产物已经超过20000个，其中约三分之一的化合物含有氮原子，在46个海洋药物中，33个属于生物碱。海绵一直是海洋生物碱的主要来源，研究报道Calcarea纲中富含咪唑生物碱，在过去的30年中，共分离得到60多个咪唑生物碱。这类生物碱具有显著的抗菌、抗炎和细胞毒活性。海绵是生物碱的主要来源，这些生物碱具有结构类型新颖，生物活性好的特征。Calcarea纲的海绵分布与全球各个海域，其中Leucetta和Clathrina属海绵被报道其特征性化学成分为咪唑类生物碱，在过去30年中，从这两个属中分离到的咪唑类生物碱已超过60个。咪唑类生物碱的结构以2-氨基咪唑环为基本母核，2位氨基通常连有取代基乙内酰脲，N1，C-4，C-5位常连有苯环取代基，C-4，C-5位连有苯环的称为naamines或naamidines，N1，C-4位连有苯环的结构类型称作isonaamines或isonaamidines。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种全面提取海绵中化学成分的方法。海绵的化学成分提取方法，步骤如下：将海绵样品搅碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏36.2g。经100~200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2,v/v)，得到粗组分。对上述粗组分进行进一步分离纯化，首先用手性柱进行分离，然后采用半制备高效液相色谱HPLC进行分离纯化。本专利技术综合利用TCL、CC、ODS、SephadexLH-20、HPLC等现代色谱分离技术，从海绵Pericharaxheteroraphis中分离得到7个化合物。包括5个咪唑类生物碱(PH-1~PH-5)，1个聚酮类化合物(PH-6)，1个核苷类化合物(PH-7)。除化合物PH-2其余化合物均为首次从本属海绵中获得。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。将海绵样品搅碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏36.2g。经100~200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2,v/v)，得到粗组分。在过减压柱的过程中，发现有很多黄色物质，对其进行HPLC分析，所示，推测是咪唑类生物碱的物质，因此对其进行针对性的分离。生物碱段（6.7g）取部分样品，经过中压液相砍段，洗脱条件如下：流速：20mL/min；检测波长：230nm320nm经过中压砍段后，分为3个主峰，主峰1~3，主峰1在C18柱上为一个单峰，但是核磁谱图信号显示为混合物，因此用手性柱进行分离，选用IC手性柱，液相条件为：流动相：100%甲醇；流速：0.7mL/min，检测波长：210nm，进一步分离得化合物PH-1(3.5mg)和PH-2(4.3mg)，主峰2进一步用半制备高效液相色谱HPLC进行分离纯化(YMC-PackODSC8,10×250mm,5μm；流动相：乙腈/水(65:35)：1‰HCOOH，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm)得到化合物PH-3(30mg)，主峰3也进一步用半制备高效液相色谱HPLC进行分离纯化(YMC-PackODSC8,10×250mm,5μm；流动相：乙腈/水(64:36)：1‰HCOOH，流速：1.5mL/min，检测波长：210nm)得到化合物PH-4(8mg)和PH-5(5.3mg)。从其他组分中以石油醚/丙酮(35:1)洗脱的硅胶柱层析后，再通过半制备高效液相色谱HPLC(流动相为甲醇/水80:20)进步纯化得化合物PH-6(5.0mg)。PH-7(3.4mg)是经过HPLC用10%甲醇/水制备出来的。分离得到的化合物的理化数据如下化合物PH-1：leucettamineC分子式：C12H13N3O2，分子量：231，黄色油状物。ESI-MS:m/z232[M+H]+。1H-NMR(500MHz，DMSO,TMS,δ)H：8.01(2H,d,J=8.6Hz,H-9,11),7.44(2H,s,NH2),6.92(2H,d,J=8.7Hz,H-8,12),6.36(1H,s,H-6),3.77(3H,s,13-OCH3),3.03(3H,s,N-CH3)。以上数据与文献对照一致，鉴定化合物PH-1为leucettamineC。化合物PH-2：leucettaamineB分子式：C12H11N3O3，分子量：245，黄色油状物。ESI-MS:m/z246[M+H]+。1H-NMR(500MHz，DMSO,TMS,δ)H:7.92(1H,s,H-9),7.50(2H,s,NH2),7.40(1H,d,J=8.0Hz,H-13),6.90(1H,d,J=8.1Hz,H-12),6.34(1H,s,H-7),6.02(2H,s,H-14),3.03(3H,s,N-CH3).。以上数据与文献对照一致，鉴定化合物PH-2为leucettamineB。化合物PH-3：pyronaamidine分子式：C25H27N5O6，分子量：493，黄色油状物。ESI-MS:m/z494[M+H]+。1H-NMR(500MHz，CDCl3,TMS,δ)H：8.01(2H,d,J=8.6Hz,H-9,11),7.44(2H,s,NH2),6.92(2H,d,J=8.7Hz,H-8,12),6.36(1H,s,H-6),3.77(3H,s,13-OCH3),3.03(3H,s,N-CH3);13CNMR(150MHz，CDCl3,TMS,δ)c147.8(s,C-2),126.8(s,C-4),132.7(s,C-5),153.9(s,C-7),161.2(s,C-9),164.8(s,C-11),31.0(t,C-12),22.9(t,C-13),30.2(q,C-14),24.3(q,C-15),130.0(s,C-1′),128.6(s,C-2′6′),113.3(s,C-3′5′),157.8(s,C-4′),115.9(s,C-1′′),147.0(s,C-2′′),135.4(s,C-3′′),151.2(s,C-4′′),103.8(d,C-5′′),123.2(d,C-6′′),55.0(q,4′-OCH3),60.9(q,3′′-OCH3),55.8(q,4′′-OCH3)。以上数据与文献对照一致，鉴定化合物PH-3为pyronaamidine。化合物PH-4：naamidineH分子式：C25H27N5O6，分子量：493，黄色油状物。ESI-MS:m/z494[M+H]+。1H-NMR(500MHz，CDCl3,TMS,δ)H：7.08(2H,d,J=8.6Hz,H-3′,5′),6.79(2H,s,J=8.6Hz,H-2′,6′),6.38(1H,d,J=8.6Hz,H-5′′),6.29(1H,s,d,J=8.6Hz,H-6′′),3.90(3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种海绵的化学成分提取方法，其特征在于，步骤如下：将海绵样品搅碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏36.2g，经100~200目的减压硅胶柱层析，石油醚/丙酮梯度洗脱(100:1到1:2,v/v)，得到粗组分。

【技术特征摘要】
1.一种海绵的化学成分提取方法，其特征在于，步骤如下：将海绵样品搅碎后，室温下用甲醇冷浸提取4次，每次浸泡3天；合并提取液，减压浓缩，用无水甲醇脱盐三次，得到总浸膏36.2g，经100~200目的减压硅胶柱层析，石油醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37