一种三七皂苷类成分的分析方法技术

本发明专利技术提供了一种三七皂苷类成分的分析方法，包括三七皂苷的含量测定和指纹图谱测定，具体包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及采用超高效液相色谱测定复方丹参滴丸中三七皂苷类成分的含量和指纹图谱。本发明专利技术采用相同的色谱条件，可以同时测定三七皂苷类成分的含量与指纹图谱，具有很好的线性、重复性、稳定性和回收率，有助于更加全面控制复方丹参滴丸的质量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了，包括三七皂苷的含量测定和指纹图谱测定，具体包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及采用超高效液相色谱测定复方丹参滴丸中三七皂苷类成分的含量和指纹图谱。本专利技术采用相同的色谱条件，可以同时测定三七皂苷类成分的含量与指纹图谱，具有很好的线性、重复性、稳定性和回收率，有助于更加全面控制复方丹参滴丸的质量。【专利说明】
本专利技术属于中药领域，具体涉及一种三七皂苷含量测定及指纹图谱分析的检测方法。
技术介绍
复方丹参滴丸是由丹参、三七和冰片制成的滴丸剂，在临床上广泛用于冠心病、心绞痛的预防、治疗、急救，现已成为国内心血管市场上的主导品牌之一。复方丹参滴丸的主要成分为丹参素(danshensu, Da)、原儿茶醒(protocatechuic aldehyde, Pra)和丹酹酸B(salvianolic acid B, Sal B)。目前药典中复方丹参滴丸的含量测定方法为:以丹参素钠为对照品，采用高效液相色谱法测定丹参素的含量，具体方法为:(1)对照品溶液的制备:取丹参素钠对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0.16mg (相当于丹参素0.14mg)的溶液，即得；(2)供试品溶液的制备:取复方丹参滴丸5丸,置IOml量瓶中，加甲醇适量适量,超声处理2小时,放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取滤液即得；(3)分别精密吸取对照品溶液5 μ I与供试品溶液5-10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。中药指纹图谱是目前能够为国内外广泛接受的全面评价中药质量模式的一种方法。美国FDA在植物药制品指导原则中允许申报者提供产品的色谱指纹图谱资料，德国药用植物学会、英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会也都把指纹图谱作为质量控制标准的内容之一。国内学者谢培山也认为，中药质量需综合评价，指纹图谱分析是对中药及制剂进行综合宏观分析的可行手段之一。但有关于复方丹参滴丸中的三七皂苷类成分的指纹图谱方面的研究在国内外尚未见报道。复方丹参滴丸上市十余年中逐步建立了完善的工艺质量控制体系，目前正在以药品的形式进行FDA申报研究。但是，复方丹参滴丸组分中含量测定组分仍然较低，提升产品工艺质量控制水平，需要针对其中更多的中药化学成分进行深入研究，从而更加准确地把握产品质量，降低用药风险，同时为国际注册提供支持。复方丹参滴丸中，臣药三七的主要活性成分是三七皂苷和人参皂苷，而三七皂苷是三七区别于人参的特有活性成分。但是目前对于复方丹参滴丸中的三七皂苷类成分还没有有效的专属性的分析方法。为了更好地控制复方丹参滴丸的质量，需要，包括三七皂苷类成分的含量测定和指纹图谱测定方法，尤其是对三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的指纹图谱鉴别方法及定量方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供，包括三七皂苷的含量测定和指纹图谱测定。根据本专利技术所述的三七皂苷类成分的分析方法，包括以下步骤:(I)供试品溶液的制备:取复方丹参滴丸，精密称定，加入氨水溶液，超声；Sods柱，依次用水、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，过滤，即得；(2)对照品溶液的制备:分别精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，用甲醇溶解并稀释，即得；(3)三七皂苷的含量测定:取所述供试品溶液和对照品溶液，采用超高效液相色谱进行分析，测定三七皂苷的含量；(4)三七皂苷的指纹图谱测定:取所述供试品溶液，采用超高效液相色谱进行分析，得到指纹图谱。 根据本专利技术的实施方式之一，所述供试品溶液的制备为:取复方丹参滴丸10-30丸，精密称定后置于15ml刻度管中，加入0.5%-10%的氨水溶液l_10ml，超声至溶解；过1.0cm内径的ODS小柱，用50ml水洗后用100%甲醇洗脱至IOml容量瓶并定容，摇匀过0.22 μ m有机滤膜，即得。根据本专利技术的另一实施方式，所述对照品溶液的制备为:分别精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，用甲醇溶解并稀释，制成含三七皂苷R1浓度为0.01-0.lmg/ml、人参皂苷Rg1浓度为0.1-0.5mg/ml、人参皂苷Re浓度为0.01-0.06mg/ml、人参皂苷Rb1浓度为0.1-0.5mg/ml的混合对照品溶液。根据本专利技术的再一实施方式，所述超高效液相色谱的色谱条件为:色谱柱为C18色谱柱，流动相A相为乙腈或甲醇，流动相B相为水，梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为200_210nm。优选的，所述流动相A相为乙腈，所述梯度洗脱的梯度为:【权利要求】1.，包括三七皂苷的含量测定和指纹图谱测定，其特征在于，包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:取复方丹参滴丸，精密称定，加入氨水溶液，超声；SODS柱，依次用水、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，过滤，即得； (2)对照品溶液的制备:分别精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，用甲醇溶解并稀释，即得； (3)三七皂苷的含量测定:取所述供试品溶液和对照品溶液，采用超高效液相色谱进行分析，测定三七皂苷的含量； (4)三七皂苷的指纹图谱测定:取所述供试品溶液，采用超高效液相色谱进行分析，得到指纹图谱。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备为:取复方丹参滴丸10-30丸，精密称定后置于15ml刻度管中，加入0.5%-10%的氨水溶液1-1Oml，超声至溶解；过1.0cm内径的ODS小柱，用50ml水洗后用100%甲醇洗脱至IOml容量瓶并定容，摇匀过0.22 μ m有机滤膜，即得。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备为:分别精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，用甲醇溶解并稀释，制成含三七皂苷R1浓度为0.01-0.lmg/ml、人参皂苷Rg1浓度为0.1-0.511^/1111、人参皂苷1^浓度为0.01-0.06mg/ml、人参皂苷 Rb1 浓度为 0.1-0.5mg/ml 的混合对照品溶液。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱的色谱条件为:色谱柱为C18色谱柱，流动相A相为乙腈或甲醇，流动相B相为水，梯度洗脱；紫外检测器，检测波长为 200-210nm。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相A相为乙腈，所述梯度洗脱的梯度为: 6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述检测波长为203nm。7.—种通过权利要求1-6任一项所获得的三七皂苷的指纹图谱。8.根据权利要求7所述的指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱是由8个共有指纹峰构成的。9.根据权利要求7所述的指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱是由5个共有指纹峰构成的。10.根据权利要求9所述的指纹图谱，其特征在于，所述5个共有峰相对于参比峰的相对保留时间和相对峰面积分别为: I号峰,相对保留时间为0.77min，相对峰面积为0.19 ； S号峰,相对保留时间为1.0Omin，相对峰面积I ; 2号峰,相对保留时间为1.04min，相对峰面积0.11 ； 3号峰,相对保留时间为1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三七皂苷类成分的分析方法，包括三七皂苷的含量测定和指纹图谱测定，其特征在于，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取复方丹参滴丸，精密称定，加入氨水溶液，超声；过ODS柱，依次用水、甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，过滤，即得；（2）对照品溶液的制备：分别精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量，用甲醇溶解并稀释，即得；（3）三七皂苷的含量测定：取所述供试品溶液和对照品溶液，采用超高效液相色谱进行分析，测定三七皂苷的含量；（4）三七皂苷的指纹图谱测定：取所述供试品溶液，采用超高效液相色谱进行分析，得到指纹图谱。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：阚红玉，葛丹丹，侯春莲，边宁，孙玉侠，曹凤兰，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12