一种大黄丹参提取物的指纹图谱的鉴别方法技术

本发明专利技术提供了大黄丹参提取物的指纹图谱鉴别方法，包括供试品溶液的制备、指纹图谱的测定、对照指纹图谱的确定和大黄丹参提取物指纹图谱的鉴别。通过对大黄丹参提取物进行高效液相色谱（HPLC）指纹图谱测定和分析，确定了9个大黄丹参提取物的特征峰，这些共有特征峰构成了大黄丹参提取物的指纹特征，可作为大黄丹参提取物的对照指纹图谱；对需要鉴别的大黄丹参提取物可以与对照指纹图谱进行比对，检查共有特征峰的情况，以鉴别质量。本发明专利技术具有方法简便、重现性好、特征峰明显、准确可靠等特点，有利于鉴别大黄丹参提取物的质量。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了大黄丹参提取物的指纹图谱鉴别方法，包括供试品溶液的制备、指纹图谱的测定、对照指纹图谱的确定和大黄丹参提取物指纹图谱的鉴别。通过对大黄丹参提取物进行高效液相色谱（HPLC）指纹图谱测定和分析，确定了9个大黄丹参提取物的特征峰，这些共有特征峰构成了大黄丹参提取物的指纹特征，可作为大黄丹参提取物的对照指纹图谱；对需要鉴别的大黄丹参提取物可以与对照指纹图谱进行比对，检查共有特征峰的情况，以鉴别质量。本专利技术具有方法简便、重现性好、特征峰明显、准确可靠等特点，有利于鉴别大黄丹参提取物的质量。【专利说明】
本专利技术涉及一种大黄丹参提取物指纹图谱的鉴别方法，具体地说是用高效液相色谱指纹图谱法来对大黄丹参提取物的有效成分进行质量控制的一种鉴别方法。
技术介绍
大黄具有攻积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒等功效，为《中华人民共和国药典2010版》一部收载品种。大黄为寥科植物掌叶大黄Rheum palmatum, L.、唐古特大黄Rheumtanguticum / Maxim, ex Balf.或药用大黄 Rheumoj-fIcinaleBaill.的干燥根和根莖。大黄药材中的主要成分是蒽醌苷及双蒽酮苷，其醌苷有:大黄酚-1-葡萄糖苷或大黄酚苷、大黄素-6-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-葡萄糖苷、大黄素甲醚葡萄糖苷、大黄酸-8-葡萄糖苷；掌叶大黄中还含有大黄素双葡萄糖苷、芦荟大黄素双葡萄糖苷、大黄酚双葡萄糖苷。双蒽酮苷有番泻苷A、B、C、D、E、F。游离型蒽醌类主要有:大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸。大黄又含有大黄鞣酸及其相关物质，如没食子酸、儿茶素、大黄四聚素。此外，大黄尚含有脂肪酸、草酸钙、葡萄糖、果糖和淀粉。目前大黄药材的质量控制方法主要有:以芦荟大黄素(C15HltlO5)、大黄酸(C15H8O6)、大黄素(C15HltlO5)、大黄酚(C10H10O4)和大黄素甲醚(C16H12O5)的总量测定作为含量测定方法《中华人民共和国药典2010版一部》；丹参主要含结晶性菲醌类化合物:丹参酮1、IIA、IIB，异丹参酮1、异丹参酮II，隐丹参酮，异隐丹参酮、羟基丹参酮IIA、丹参新酮、左旋二氢丹参酮1、丹参酚等。此外，尚含原儿茶醛、原儿茶酸、琥珀酸、熊果酸、乳酸、维生素E等。目前丹参药材的质量控制方法主要有:以丹参酮II A(C19H18O3)、丹酚酸B(C36H3tlO16)的含量测定作为含量测定方法《中华人民共和国药典2010版一部》；杨树声采用HPLC法同时测定丹参类药材中水溶性活性成分的含量(甘肃中医学院学报，2008年06期);王伟采用反相高效液相色谱法同时测定丹参药材中丹参素(I )、迷迭香酸(II )、紫草酸(III)、丹酚酸B (IV)的含量(安徽医药，Anhui Medicaland Pharmaceutical Journal, 2010年11期);宋洁瑾通过建立丹参药材的指纹图谱，对不同产地丹参药材质量进行评价(辽宁中医杂志，2008年03期)。中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。中国食品药品监督管理局于2000年颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，要求中药注射剂必须进行指纹图谱的研究，并建立其相关的标准。规范了中药指纹图谱的研究，从而掀起了国内近几年来对指纹图谱的研究热潮。目前，采用指纹图谱技术除了能反映几乎全部成分的含量、种类外，尚能反映成分的比例、未知成分(含量测定方法中可能已被作为无效或干扰成分扣除)的产生，更多的是从药物稳定性、安全性上进行监测。目前中药提取物产业发展迅速，但其质量控制技术水平不高，对质量控制较成熟的方法有单个成分含量测定或一类成分如总皂苷、总黄酮等的紫外分光光度测定法，不能对提取物进行全面直观的质量控制。本专利技术通过指纹图谱技术对大黄丹参提取物种的化学成分进行整体控制和综合评价，能够有效的鉴别大黄丹参提取物的质量。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种大黄丹参提取物的指纹图谱鉴别方法，通过指纹图谱测定对大黄丹参提取物进行全面而有效的鉴别。大黄丹参提取物的制备方法: 以大黄、丹参为原料，两味药材以重量份计为:大黄70-150g，丹参60-120g。取大黄、丹参,混合,加水煎煮,煎液浓缩后加乙醇沉淀,吸取上清液，回收乙醇,再加入明胶溶液静置除鞣质，将除鞣质后的上清液制成。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的。 本专利技术大黄丹参提取物的指纹图谱鉴别方法，该方法包括如下步骤: (a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈或甲醇、乙腈甲醇混合溶剂为流动相A，以甲酸水溶液或冰醋酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液为流动相B。检测器为紫外检测器、示差检测器或蒸发光检测器； (b)精密吸取供试品溶液至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，收取滤液，备用。(C)测定法吸取供试品溶液适量，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。进一步优选的测定条件为: (a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长l(T25cm，内径3~5cm，粒径为f 10 μ m);以乙腈为流动相A，以0.0f 2%冰醋酸水溶液为流动相B ;紫外检测器，检测波长20(T400nm ;柱温2(T50°C，流速为每分钟0.2~2ml。(b)供试品溶液的制备精密吸取大黄丹参提取物供试品溶液0.5~Iml至10~20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。用微孔滤膜0.22~0.45 μ m滤过，收取滤液，备用。(c)测定法吸取供试品溶液5~40 μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，SP得。最佳测定条件: (a)色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5 μ m ;以乙腈为流动相A，以0.3%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为280nm ;柱温25°C ;流速为每分钟0.9ml。【权利要求】1.大黄丹参提取物的指纹图谱鉴别方法，其特征在于包括以下步骤: (O大黄丹参提取物的制备方法: 以大黄、丹参为原料，两味药材以重量份计为:大黄70-150g，丹参60-120g ;取大黄、丹参,混合,加水煎煮,煎液浓缩后加乙醇沉淀,吸取上清液，回收乙醇,再加入明胶溶液静置除鞣质，将除鞣质后的上清液制成； (2)供试品溶液的制备:精密吸取大黄丹参提取物供试品溶液0.5?Iml至10?20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.22?0.45 μ m滤过，收取滤液，备用； (3)指纹图谱测定:取供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录75分钟以内的色谱图，得到由其共有特征峰构成的大黄丹参提取物对照高效液相指纹图谱；其中高效液相色谱分析的条件如下:用十八烷基键合硅胶为填充剂；A g i I e n tZorbax Eclipse XDB C18色谱柱4.6本文档来自技高网...

【技术保护点】
大黄丹参提取物的指纹图谱鉴别方法，其特征在于包括以下步骤：（1）大黄丹参提取物的制备方法：以大黄、丹参为原料，两味药材以重量份计为：大黄 70‑150g，丹参60‑120g；取大黄、丹参，混合，加水煎煮，煎液浓缩后加乙醇沉淀，吸取上清液，回收乙醇，再加入明胶溶液静置除鞣质，将除鞣质后的上清液制成；（2）供试品溶液的制备：精密吸取大黄丹参提取物供试品溶液0.5～1ml至10～20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.22～0.45μm滤过，收取滤液，备用；（3）指纹图谱测定：取供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪，记录75分钟以内的色谱图，得到由其共有特征峰构成的大黄丹参提取物对照高效液相指纹图谱；其中高效液相色谱分析的条件如下：用十八烷基键合硅胶为填充剂；Agilent Zorbax Eclipse XDB C18色谱柱4.6×250mm；乙腈‑0.01‑2%冰醋酸为流动相梯度洗脱，梯度程序为：0min→5min→30min→45min→60min→62min→75min对应流动相：乙腈：2%→7%→15%→20%→35%→50%→50%；0.01‑2%冰醋酸：98%→93%→85%→80%→65%→50%→50%，检测波长为200nm‑400nm；流速为0.2ml/min‑2ml/min；柱温为20℃‑50℃；所得到的大黄丹参提取物的对照指纹图谱有9个共有特征峰，其相对保留时间分别为：1号峰：0.13，2号峰：0.18，3号峰：0.29 ，4号峰：0.66，5号峰：0.86，6号峰：0.93，7号峰：0.97，8号峰（S）：1.00，9 号峰：1.01。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：果德安，吴婉莹，赵丙贤，吕延英，刘蓉霞，姚帅，王俊平，赵兴，蔡录影，王丹丹，侯晋军，笪娟，
申请(专利权)人：西安世纪盛康药业有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61