一种环毛蚓溶栓成分的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种环毛蚓溶栓成分的提取方法，它包括如下步骤：(1)预处理：取环毛蚓鲜品或速冻品，切断或绞碎，加1-2倍重量的水，于36～40℃搅拌7-10h，离心，弃沉淀，收集上清液；(2)乙醇沉淀：加乙醇至浓度为73-80％，混匀，离心，收取沉淀物，干燥，即可。本发明专利技术还公开了前述方法制备得到的提取物。本发明专利技术提取方法可以有效提取环毛蚓的溶栓成分，得到的提取物溶栓活性高于现有提取方法制得的提取物，临床应用前景良好。

Extraction method of thrombolytic ingredient of earthworm

The invention discloses a method for extracting Pheretimoid thrombolytic components, which comprises the following steps: (1) pretreated wool products Yinxian ring or frozen goods, cut or broken, plus 1-2 times the weight of the water from 36 to 40 DEG C, stirring 7-10h, centrifugal sedimentation, abandoned, supernatant was collected; (2) ethanol precipitation: add ethanol to the concentration of 73-80%, mixing, centrifugation, drying, can collect sediment. The present invention also discloses the extract prepared by the method. The extraction method of the invention can effectively extract the thrombolytic component of the earthworm, and the obtained thrombolysis activity of the extract is higher than that obtained by the existing extraction method, and the clinical application prospect is good.

【技术实现步骤摘要】
一种环毛蚓溶栓成分的提取方法
本专利技术涉及一种环毛蚓溶栓成分的提取方法。
技术介绍
环毛蚓属的动物体长230-245毫米，体宽7-12毫米。背孔自第12节与第13节间开始。背面呈紫红色或紫灰色。环带占3节，位于第14-16节，无刚毛。体上具环生的刚毛，包括钜蚓科动物参环毛蚓Pheretimaaspergillum(E.Perrier)、通俗环毛蚓PheretimavulgarisChen、威廉环毛蚓Pheretimaguillelmi(Michaelsen)、栉盲环毛蚓PheretimaPectiniferaMichaelsen和湖北环毛蚓PheretimahupeienisMichaelsen1895等等。环毛蚓含地龙素(Lumbritin)、地龙解热素(Lumbrofebrin，为酪氨酸的衍生物)、地龙毒素(Terrestro-lumbrolysim)、黄嘌呤(Xanthine)、胆碱、胆甾醇、脂肪酸类、类脂化合物、核酸衍生物、多种氨基酸、维生素类及无机盐等物质，具有溶栓作用。目前，以环毛蚓制备的溶栓产品主要有龙心素胶囊(国药准字z20049005)，其提取方法(参考中华人民共和国药品监督管理局标准：龙心素胶囊)：取鲜地龙(包括威廉环毛蚓等)2500g，加水适量，加入稀氢氧化钠溶液调节pH值7.8-8.2，使其溶解，于15-20℃静置18-24小时，滤过，滤液离心，收集上清液，浓缩至相对密度为1.02-1.06(25℃)的清膏，加入醇使含醇量达72％静置4-5小时，滤过，沉淀物40℃以下真空干燥、粉碎、加淀粉139g，混匀、过筛，装入胶囊，制成1000粒，即得。现有提取工艺仍然完全有效提取环毛蚓的溶栓活性成分，有待进一步改进。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新的的环毛蚓溶栓成分提取方法。本专利技术环毛蚓溶栓成分的提取方法，它包括如下步骤：(1)预处理：取环毛蚓鲜品或速冻品，切断或绞碎，加1-2倍重量的水，于36～40℃搅拌7-10h，离心，弃沉淀，收集上清液；(2)乙醇沉淀：加乙醇至浓度为73-80％，混匀，离心，收取沉淀物，干燥，即可。优选地，乙醇沉淀之前，上清液先进行脱色和除重金属处理：在步骤(1)所得上清液中加入聚氯化铝或石英砂，搅拌，离心，弃沉淀，收集上清液。进一步优选地，所述聚氯化铝或石英砂的加入量上清液的0.1-0.3％(w/w)。优选地，步骤(1)中，所述环毛蚓为湖北环毛蚓、威廉环毛蚓、参环毛蚓、通俗环毛蚓或栉盲环毛蚓。优选地，步骤(1)中，所述湖北环毛蚓按照如下养殖方法制得：a、制备养殖床：翻耕土地，整畦，洒水，使土壤含水量为20-30％；b、蚓种投放：放原生湖北环毛蚓300—400条/平方米，让其自动钻入泥土中，15-20分钟后，去除未入土之蚓种；c、养殖管理：投料：每隔3天定点投放饲料1次，每次投料180～240g/平方米；湿度：保持土壤含水量在20-30％；温度：日最高气温超过35℃时，每天洒水3-5次，每次0.1-0.2kg/平方米；冬天时，养殖地铺10-20cm厚稻草垫；d、收获：饲养4-6月，收取成蚓。优选地，步骤(1)中，切断或绞碎至长度为1-2cm。优选地，步骤(1)中，加水的同时加入防腐剂。进一步优选地，所述防腐剂为苯甲酸钠，其终浓度为1-1.5‰(w/w)。优选地，步骤(1)中，于38℃搅拌9h。优选地，步骤(1)中，搅拌的转速为120-180rmp，优选地，步骤(2)中，加乙醇至浓度为75％。优选地，步骤(2)中，混匀的方式是搅拌，搅拌的时间为10min，转速120-180rmp。优选地，步骤(2)中，干燥的工艺是：37～42℃下干燥25～34h。优选地，所述干燥的工艺是：38℃干燥30h。本专利技术还提供了前述方法制备的提取物。本专利技术提取方法可以有效提取环毛蚓的溶栓成分，得到的提取物溶栓活性高于现有提取方法得到的提取物，临床应用前景良好。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。具体实施方式实施例1本专利技术提取方法提取方法：(1)速冻的鲜青蚓，用切药机切碎至长度为1-2cm，加1-2倍水(w/w)，同时加苯甲酸钠1-1.5‰(w/w)，于38℃下搅拌9小时，搅拌的转速为120-180rmp，离心10min，离心的转速为2500rpm，沉淀物弃去，收集上清液备用；(2)除重金属和脱色：取上清液，加聚氯化铝或石英砂0.1-0.3％，搅拌10min，转速120-180rmp，离心10min，离心的转速2500rpm，沉淀物弃去，收集离心液；(3)醇沉：将乙醇加入离心液中，使混合液乙醇浓度为75％，搅拌10min使溶液充分混匀，搅拌的转速120-180rmp，离心10min，离心的转速2500rpm，收取沉淀物；(4)干燥：沉淀物于38℃干燥至恒重，粉碎，加赋型物适量，混匀，得干燥粉末；(5)灭菌：密封包装，辐射灭菌，即得。(6)性状：气微腥，有引湿性，含有零星深色微粒的灰白色或微黄色粉末。鲜青蚓(即湖北环毛蚓)按照如下方法制备：(一)饲料配方粪料20％，植物饲料75％，其它成分5％。1粪料组成：牛粪和猪粪各一份。(由养牛场和养猪场提供)2植物饲料组成稻草20％，玉米杆20％，蔬菜等青饲60％。(由农户提供)3其它成分猪血粉，玉米粉，小麦麸各1份。(由农资市场提供)(二)饲料标准及制备方法1饲料标准：棕色或褐色、无酸臭、氨气等异味，质地松软不沾手，用手抓捏，从指缝中能流出1-2滴水珠，pH值在6—8之间，重金属含量应符合国家相关标准。2饲料制备方法取粪料20％，植物饲料75％，堆料发酵。堆料植物饲料切成5cm长，先铺地上20厘米厚，然后铺粪料10厘米，再铺植物饲料20厘米，粪料10厘米，直至堆到8层，占地长度和宽度不限，料堆松散，做成方形料堆，慢慢洒水，用水量50-100kg/平方米(即是50--100kg/2.4立方米)，直到四周有水浸出为止，用薄膜覆盖保温。发酵料堆开始自然发酵升温，10多天后，料堆温度达到60--70℃时，揭覆盖膜，进行翻堆，即上层翻到下层，四边的翻到中间，把粪料和草料拌匀，再洒水10--20kg/平方米(即是10--20kg/2.4立方米)湿润，再覆盖薄膜保温，使之充分发酵。腐熟10天后再翻堆，进行第三次重新制堆，盖膜。经过一个月的堆制发酵，得腐熟物。混合将腐熟物与上述其它成分(血粉，玉米粉，小麦麸各1份)混匀，即得。(三)鲜青蚓养殖步骤1养殖床准备在蔬菜地四周挖：深40cm，宽30cm的排水沟，翻耕土地，深度30厘米，并整理成宽2米的畦，两畦间隔40cm，在畦中央开沟，沟深30cm，沟宽30cm，在沟中放饲料，再在上面覆盖10cm厚泥土，洒水，使土壤保持20--30％含水量。2蚓种投放先将养殖床洒水润湿，使泥土润滑，便于蚓种钻入泥土中。在养殖床上放上成年种蚓，每平方300--400条，让其自动钻入泥土，15分钟后，未钻入泥土中的蚓种，不是受伤就是严重脱水，应除去。注明：第一批蚓种是野外挖取的原生湖北环毛蚓成蚓。可以在养殖床上面种些新鲜蔬菜等农作物，一方面有青饲料来源，另外也可为鲜青蚓生长、活本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种环毛蚓溶栓成分的提取方法，其特征在于：它包括如下步骤：(1)预处理：取环毛蚓鲜品或速冻品，切断或绞碎，加1‑2倍重量的水，于36～40℃搅拌7‑10h，离心，弃沉淀，收集上清液；(2)乙醇沉淀：加乙醇至浓度为73‑80％，混匀，离心，收取沉淀物，干燥，即可。

【技术特征摘要】
1.一种环毛蚓溶栓成分的提取方法，其特征在于：它包括如下步骤：(1)预处理：取环毛蚓鲜品或速冻品，切断或绞碎，加1-2倍重量的水，于36～40℃搅拌7-10h，离心，弃沉淀，收集上清液；(2)乙醇沉淀：加乙醇至浓度为73-80％，混匀，离心，收取沉淀物，干燥，即可。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：乙醇沉淀之前，上清液先进行脱色和除重金属处理：在步骤(1)所得上清液中加入聚氯化铝或石英砂，搅拌，离心，弃沉淀，收集上清液；优选地，所述聚氯化铝或石英砂的加入量为上清液的0.1-0.3％(w/w)。3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤(1)中，所述环毛蚓为湖北环毛蚓、威廉环毛蚓、参环毛蚓、通俗环毛蚓或栉盲环毛蚓。4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于：所述湖北环毛蚓按照如下养殖方法制得：a、制备养殖床：翻耕土地，整畦，洒水，使土壤含水量为20-30％；b、蚓种投放：放原生湖北环毛蚓300-400条/平方米，让其自动钻入泥土中，15-20分钟后，去除未入土之蚓种；c、养殖管理：投料：每隔3天定点投放饲料1次，每次投料...

【专利技术属性】
技术研发人员：高努，高让，
申请(专利权)人：高努，
类型：发明
国别省市：四川,51