提高格尔登素发酵水平的方法技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，尤其是涉及一种提高格尔登素发酵水平的方法。
技术介绍
放线菌是一类高GC含量的革兰氏阳性菌，目前已知抗生素中有60％以上是由放线菌合成。链霉菌是一类高等放线菌，具有强大的抗生素合成能力和复杂的形态分化，故一直受到人们的关注。聚酮类化合物是一类由放线菌产生的重要的次级代谢产物，其在抗肿瘤、抗寄生虫、抗生素领域都有极其重要的应用。前期的实验已经证明，聚酮类化合物的生物合成主要依赖I型、II型和III型聚酮生物合成基因簇，其主要使用的前体物是乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A、甲基丙二酰辅酶A、乙基丙二酰辅酶A等等。而这些前体物质主要是由初级代谢即EMP途径、TCA途径中的中间产物经过几步反应而形成。格尔登素(geldanamycin)属于I型聚酮类抗生素，主要由吸水链霉菌的一些亚种如S.hygroscopicusNRRL 3602、S.hygroscopicusJCM4427产生。格尔登素可以与细胞中的热击蛋白HSP90结合，阻碍其执行分子伴侣功能，抑制肿瘤细胞的分裂，因此有着强的抗肿瘤活性。除此之外，它还有一定的抗革兰氏阳性菌、真菌、疟疾、原生动物和...
【技术保护点】
一种提高格尔登素发酵水平的方法，其特征在于，通过将吸水链霉菌XM201基因组中编码格尔登素I型聚酮合酶的上游启动子PgdmA序列通过原位置换换成XM201基因组内源的高效启动子P5061，使得格尔登素聚酮链的合成效率提高，并使格尔登素在发酵中的产量得以提高。
【技术特征摘要】
1.一种提高格尔登素发酵水平的方法，其特征在于，通过将吸水链霉菌XM201基因组中编码格尔登素I型聚酮合酶的上游启动子PgdmA序列通过原位置换换成XM201基因组内源的高效启动子P5061，使得格尔登素聚酮链的合成效率提高，并使格尔登素在发酵中的产量得以提高。2.如权利要求书1所述的提高格尔登素发酵水平的方法，其特征在于，所述上游启动子PgdmA的序列如SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求书1所述的提高格尔登素发酵水平的方法，其特征在于，所述高效启动子P5061的序列如SEQ ID NO.2所示。4.如权利要求书1所述的提高格尔登素发酵水平的方法，其特征在于，构建步骤如下：第一步：设计并构建用于格尔登素上游启动子PgdmA与高效启动子P5061进行置换的载体I；第二步：将第一步构建得到的载体I通过接合转移导入受体菌吸水链霉菌XM201中进行同源重组；第三步：通过对突变株的筛选和阿泊拉霉素抗性验证，并通过PCR产物片段大小的差异筛选得到启动子置换的突变...
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