本发明专利技术公开了一种格尔德霉素脂质体的制备及应用，本发明专利技术中格尔德霉素脂质体由格尔德霉素与磷脂按一定的摩尔百分比组成，采用薄膜分散法制备，本发明专利技术所制备的脂质体性质稳定，具有缓释和靶向作用，本发明专利技术以S180腹水瘤小鼠为模型评价了格尔德霉素脂质体的抗肿瘤活性，结果表明格尔德霉素脂质体在更低的剂量情况下比格尔德霉素具有更优异的抗肿瘤效果，本发明专利技术以肝肿瘤细胞HepG2为模型评价了格尔德霉素脂质体抗肝肿瘤效果，结果显示格尔德霉素脂质体抑制肝肿瘤细胞生长，而且显示出比格尔德霉素更好的抗肝肿瘤效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药学领域，涉及一种药物格尔德霉素的新剂型，具体涉及一种格尔德霉素脂质体及制备方法。本专利技术还涉及格尔德霉素脂质体作为抗肿瘤剂的应用。
技术介绍
Hsp90抑制剂格尔德霉素(geldanamycin，GA)为我国开发的一种新型强效的苯醌安莎类抗生素，它是由土壤中的吸水链霉菌格尔德变种产生的，通过竞争性结合Hsp90N末端ATP/ADP结构域，特异性的抑制Hsp90所必需的ATP酶活性，从而抑制了 Hsp90分子伴侣功能，从而改变Hsp90构象，使其不能与其靶蛋白(即客户蛋白)结合，抑制其行使正常的分子伴侣功能，最终导致靶蛋白降解，继而阻断肿瘤赖以生存的信号通路网络。对细胞增殖、凋亡和癌症发生都具有重要影响。研究表明，格尔德霉素对乳腺癌，结肠癌，胃癌，恶性胶质瘤，前列腺癌，肺癌，肝癌等都有作用。但由于格尔德霉素有以下几方面限制1 在动物模型推荐的剂量下，表现严重的肝毒性，存在有效剂量限制。2 它在体内的代谢很不稳定并且水溶性极差，因此在临床研究中受到限制。如果对药物进行设计，在提高药效的同时并且降低毒副作用，具有靶向性的给药系统就是一个很好的选择。脂质体是一种最常见的比较成熟的靶向给药系统。脂质体药物静脉注射动物或人体后，可以成功的到达原发性肿瘤抑制其生长和转移，显示出较强的治疗效果，轻微的副作用。脂质体药物载体大多是由磷脂，胆固醇等物质作为膜材而构成双分子层的封闭囊泡结构，膜材对所包裹的药物作用体现在不仅可以有效的防治药物被体内酶的分解破坏和体液稀释，延长药物的作用时间，还可以提高药物的生物相容性，使其生物利用度增加，增强治疗效果。肿瘤的发生是细胞的恶性增殖与细胞凋亡之间平衡失调的结果，目前已经证实多种抗癌药物的作用机制是通过诱导细胞凋亡而发挥抗癌效果。因此特异性地诱导肿瘤细胞凋亡的药物和治疗方法已成为当今肿瘤学研究的热点之一。格尔德霉素抗癌的作用机制不仅在于抑制细胞增殖，还在于诱发肿瘤细胞凋亡，但是由于细胞凋亡是一个多阶段，多系统参与极其复杂的过程，格尔德霉素诱导凋亡的机制有待进一步研究，格尔德霉素新的剂型格尔德霉素脂质体在抑制细胞增殖方面是否会显示出更好的效果，未见研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗肿瘤药物脂质体，其包含抗肿瘤活性剂，磷脂，根据需要还可以加入除磷脂以外的其他辅料。本专利技术所述的抗肿瘤活性剂为Hsp90抑制剂，所述的Hsp90抑制剂为格尔德霉素或其衍生物，优选格尔德霉素。本专利技术所述的磷脂选自卵磷脂，大豆磷脂，脑磷脂或人工合成磷脂中的一种或多种。本专利技术所述的脂质体，其中的抗肿瘤活性剂与磷脂的比例，按摩尔比计算，为抗肿瘤活性剂2-10 磷脂90-98。本专利技术的脂质体中的抗肿瘤活性剂浓度为0. 5-4mg/L0本专利技术的另一目的在于提供制备格尔德霉素脂质体的方法。本专利技术的目的还在于将格尔德霉素脂质体应用于制备抗肿瘤药物。本专利技术的格尔德霉素脂质体的制备方法是，将格尔德霉素与磷脂用氯仿溶解后， 旋转真空蒸发成膜，加入PBS，超声水化，得到格尔德霉素脂质体。优选的，本专利技术的制备格尔德霉素脂质体的具体方法，如下按摩尔百分比取各组分抗肿瘤活性剂格尔德霉素2-10份；磷脂90-98份，将上述各组分置于茄形瓶中并用氯仿溶解，旋转真空蒸发成脂膜(37°C)。置于干燥器中避光放置池左右，充分挥去有机溶剂。将在37°C温浴好的PBS (PH = 7. 4)的缓冲溶液加入到脂膜中，先水浴超声(30°C超声分散15min)，并不时振摇。然后探头超声(冰浴，超声:3min)。 即得格尔德霉素脂质体。上述涉及到的磷脂可以选用卵磷脂，大豆磷脂，脑磷脂或人工合成磷脂中的一种或多种。上述所制备的格尔德霉素脂质体中的抗肿瘤活性剂浓度为0. 2-10mg/L，优选为 0. 5-4mg/L。所制备的脂质体溶液经检测，粒径为150-200nm，Zeta电位为-20 _50mV，包封率达80%以上。本专利技术还包括所制备的格尔德霉素脂质体具有缓释功能，优选的各组分的配比为格尔德霉素0. 01-10% (W/V)，磷脂1-30% (W/V)，其余为ρΗ7· 4的等渗PBS，最优选的本专利技术的脂质体，制备如下格尔德霉素10摩尔；磷脂90摩尔，将上述各组分置于茄形瓶中并用氯仿溶解，旋转真空蒸发成脂膜(37°C)。置于干燥器中避光放置池左右，充分挥去有机溶剂。将在37°c温浴好的PBS (PH = 7. 4)的缓冲溶液加入到脂膜中， 先水浴超声(30°C超声分散15min)，并不时振摇。然后探头超声(冰浴，超声:3min)。即得格尔德霉素脂质体。其粒径为150_200nm，Zeta 电位在-20—50mV 之间。本专利技术以荷肉瘤S180小鼠为模型，采用尾静脉给药的治疗方案体内评价了本专利技术实施例1所制备的格尔德霉素脂质体的抗肿瘤活性，并与原料药格尔德霉素作比较，结果显示格尔德霉素脂质体在更低的剂量情况下比原料药物格尔德霉素具有更优异的抗肿瘤效果。同时也显示了格尔德霉素在低剂量时就达到了原料药物格尔德霉素在高剂量时的抗肿瘤效果。本专利技术选用肝癌HepG2细胞为模型，考察了格尔德霉素脂质体对肝肿瘤细胞增殖的影响，通过与格尔德霉素的比较来显示所制备的格尔德霉素脂质体具有更好的抗肿瘤效^ ο本专利技术提供了所制备的格尔德霉素脂质体，特别是优选方法制备的，经检测其质量外观均一，性质稳定，制备方法简单，具有缓释，靶向效果，改善了原料药物在体内的代谢不稳定且水溶性极差的限制。在动物模型中，所制备的格尔德霉素脂质体在较低剂量表现出优异的抗肿瘤效果，在肝肿瘤细胞模型中，格尔德霉素脂质体抑制肿瘤细胞的生长，显示出比格尔德霉素更强的抑制肿瘤细胞增殖的效果。本专利技术首次将格尔德霉素制成脂质体，目前，在国内外均未见格尔德霉素脂质体的报道，更没有相关制剂的上市，因此本专利技术具有实际应用前景与潜在经济价值。以下通过实验数据来说明本专利技术的有益结果，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。1、格尔德霉素脂质体的形态及稳定性观察通过透射电子显微镜和扫描电子显微镜呈像观察其微观结构，其呈圆形球状，见附附图说明图1，图2。具体操作方法1.透射电子显微镜呈像将制备好的脂质体，用三蒸水稀释一定倍数，取IOyL置于铜网表面，下衬滤纸，自然挥干后，准备透射电镜观察。调整电镜电子束电压为80KV，移动坐标，放大倍数，寻找观察粒子并拍照(见附图1)2.扫描电子显微呈像将制备好的脂质体，用三蒸水稀释一定倍数，取20 μ L于盖玻片上，自然挥干后，喷金， 准备扫描电镜下观察。调整电镜电子束电压为20KV，移动坐标，放大倍数，寻找观察粒子并拍照(见附图2)。通过随机选取三个剂型观察其稳定性。在4°C放置半个月，观察样品随时间延长粒径，电位，包封率的变化。通过对脂质体稳定性的考察发现，格尔德霉素脂质体在4°C条件下保存半个月，其粒径，电位，包封率都没有发生明显的变化，见附图3，图4。2、格尔德霉素脂质体的体外释放度考察格尔德霉素的体外释放通过以下方式实现制备载药量为100mg/L格尔德霉脂质体，精密吸取2mL于处理好的透析袋中，两端用透析夹加紧，置于含有50mL透析介质的广口瓶中。将广口瓶放入37°C空气恒温震荡器中，100次/分振荡，于lh，2h，4h，6h，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：崔国辉，崔纯莹，董税田，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：
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