System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind()
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域,具体涉及肝类器官的构建方法及其应用。
技术介绍
1、人体肝是一种重要的器官,为生命提供许多重要的代谢功能,如脂质代谢、铵和胆汁的产生、凝血以及外源性化合物的解毒作用。然而,相关肝脏疾病如病毒性肝炎、酒精性脂肪肝、肝癌等疾病造成了沉重的社会负担,严重威胁人类的生命健康。因此,为了揭示肝脏疾病发生发展的机制,开发肝脏疾病的治疗方法,建立与人体高度相关的肝脏研究模型具有重要意义。
2、肝脏类器官是一种新兴的肝脏研究模型,具有人类肝脏的关键特征,如细胞构成和白蛋白合成、糖原合成、脂质积累等功能特征,在基础研究、药物研发等领域具有广泛的应用。与传统的动物模型相比,类器官模型不存在种属差异,具有和人体高度相关的表观代谢能力;与二维培养模型相比,具有与体内相似的细胞微环境、具有肝组织特异性细胞种群、能够模拟实质细胞和非实质细胞间的相互作用等优势。
3、目前,类器官构建多采用大块水凝胶直接包埋的方法,此方法影响养分和氧气供给,造成类器官生产效率低下、均一性差等问题。
技术实现思路
1、为弥补现有技术的不足,本专利技术提供了一种肝类器官的构建方法及其应用。
2、为实现上述目的,本专利技术采用如下技术方案:
3、本专利技术的第一方面提供了一种hahos肝类器培养基,所述培养基包括基础培养基、血清替代物、fgf、n-乙酰半胱氨酸、wnt激动剂、烟酰胺、胃泌素、促分裂增殖因子、hgf、毛喉素。
4、进一步,所述基础培养
5、进一步,所述血清替代物包括b27和/或n2。
6、进一步,所述fgf选自fgf10。
7、进一步,所述wnt激动剂包括wnt蛋白、r-spo。
8、进一步,所述wnt激动剂选自r-spo。
9、进一步,所述r-spo选自r-spo-1。
10、进一步,所述促分裂增殖因子包括egf、bdnf、kgf。
11、进一步,所述促分裂增殖因子选自egf。
12、进一步,所述b27的浓度为2%。
13、进一步,所述n2的浓度为1%。
14、进一步,所述fgf10的浓度为100ng/ml。
15、进一步,所述n-乙酰半胱氨酸的浓度为1.25mm。
16、进一步,所述r-spo-1的浓度为20ng/ml。
17、进一步,所述烟酰胺的浓度为10mm。
18、进一步,所述胃泌素的浓度为10nm。
19、进一步,所述egf的浓度为50ng/ml。
20、进一步,所述hgf的浓度为25ng/ml。
21、进一步,所述毛喉素的浓度为10μm。
22、本专利技术的第二方面提供了一种hahos肝类器官的构建方法,所述方法包括使用本专利技术第一方面所述的培养基培养hlcs。
23、进一步,所述hlcs由干细胞诱导而成。
24、进一步,诱导干细胞形成hlcs的培养基包括:第一培养基、第二培养基、第三培养基、第四培养基、第五培养基、第六培养基,
25、所述第一培养基包括:基础培养基、sp,
26、所述第二培养基包括:基础培养基、activin、bsa、sp,
27、所述第三培养基包括:基础培养基、activin、bsa、sp、its,
28、所述第四培养基包括:bsa、its,bmp、fgf、sp,
29、所述第五培养基包括:bsa、its、hgf、sp,
30、所述第六培养基包括:bsa、its、il-6家族细胞因子、dex、hgf、sp。
31、进一步,所述基础培养基选自advanced dmem/f12。
32、进一步,所述activin选自activina。
33、进一步,所述bmp选自bmp2。
34、进一步,所述fgf选自fgf4。
35、进一步,所述il-6家族细胞因子选自osm。
36、进一步,所述干细胞选自间充质干细胞。
37、进一步,所述间充质干细胞选自脂肪间充质干细胞。
38、进一步,所述sp的浓度为1%。
39、进一步,所述activin a的浓度为100ng/ml。
40、进一步,所述bsa为10%bsa 0.5mg/ml。
41、进一步,所述its的浓度为1%。
42、进一步,所述bmp2的浓度为20ng/ml。
43、进一步,所述fgf4的浓度为30ng/ml。
44、进一步,所述hgf的浓度为20ng/ml。
45、进一步,所述osm的浓度为10ng/ml。
46、进一步,所述dex的浓度为1μm。
47、进一步,所述halos肝类器官的方法包括:
48、a)干细胞使用第一培养基培养,
49、b)步骤a)获得的细胞转入第二培养基培养,细胞向内胚层诱导,
50、c)步骤b)获得的内胚层细胞转入第三培养基培养,向腹侧前肠内胚层诱导,
51、d)步骤c)获得的腹侧前肠内胚层细胞转入第四培养基,向肝脏前体分化,
52、e)步骤d)获得的肝脏前体细胞转入第五培养基,肝细胞诱导,
53、f)步骤e)获得的肝细胞转入第六培养基培养,成熟肝实质细胞诱导,获得hlcs,
54、g)步骤f)获得的hlcs消化后,转入本专利技术第一方面所述的hahos肝类器培养基培养。
55、进一步,所述方法还包括在步骤g)后将细胞与ecm共培养。
56、进一步,步骤a)、c)的培养时间为48小时。
57、进一步,步骤b)的培养时间为24小时。
58、进一步,步骤d)、e)、f)的培养时间为5天。
59、进一步,步骤g)的培养时间为24小时。
60、进一步,步骤g)中使用胰蛋白酶消化hlcs。
61、进一步,所述ecm包括bme和matrigel。
62、进一步,所述ecm选自matrigel。
63、进一步,培养的条件为37℃、5%co2、95%空气。
64、本专利技术的第三方面提供了一种halos肝类器官培养基,所述培养基包括:培养基ⅰ和培养基ⅱ,
65、所述培养基ⅰ包括:基础培养基、血清替代物、ra,
66、所述培养基ⅱ包括:hcm、hgf、dex、il-6家族细胞因子。
67、进一步,所述基础培养基选自advanced dmem/f12。
68、进一步,所述血清替代物包括b27和/或n2。
69、进一步,所述il-6家族细胞因子选自osm。
70、进一步,所述ra的浓度为2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种hAHOs肝类器培养基,其特征在于,所述培养基包括基础培养基、血清替代物、FGF、N-乙酰半胱氨酸、Wnt激动剂、烟酰胺、胃泌素、促分裂增殖因子、HGF、毛喉素;
2.一种hAHOs肝类器官的构建方法,其特征在于,所述方法包括使用权利要求1所述的培养基培养HLCs;
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述hALOs肝类器官的方法包括:
4.一种hALOs肝类器官培养基,其特征在于,所述培养基包括:培养基Ⅰ和培养基Ⅱ,
5.一种hALOs肝类器官的构建方法,其特征在于,所述方法包括使用权利要求4所述的培养基培养hEPCs;
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述hALOs肝类器官的构建方法包括:
7.一种肝类器官,其特征在于,所述肝类器官由权利要求2-3或5-6任一项所述的方法构建而成。
8.一种移植材料,其特征在于,所述移植材料包括权利要求7所述的肝类器官。
9.一种使用权利要求7所述的肝类器官评价被检物质的药代动力学或毒性的方法;
10.如下任一项
...【技术特征摘要】
1.一种hahos肝类器培养基,其特征在于,所述培养基包括基础培养基、血清替代物、fgf、n-乙酰半胱氨酸、wnt激动剂、烟酰胺、胃泌素、促分裂增殖因子、hgf、毛喉素;
2.一种hahos肝类器官的构建方法,其特征在于,所述方法包括使用权利要求1所述的培养基培养hlcs;
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述halos肝类器官的方法包括:
4.一种halos肝类器官培养基,其特征在于,所述培养基包括:培养基ⅰ和培养基ⅱ,
5.一种hal...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。