使用OmpT蛋白酶突变体的多肽的切断方法技术

具有以下特征的多肽的切断方法：与多肽中希望的切断部位相关的Ｐ１位为精氨酸或赖氨酸，Ｐ１’为天冬氨酸、谷氨酸或脯氨酸，在从Ｐ１０位至Ｐ３或从Ｐ３’至Ｐ５’位的氨基酸序列中的任意部位连接配上１个碱性氨基酸或２个或３个碱性氨基酸（但是，配置１个碱性氨基酸时，除去Ｐ６或Ｐ４位），使用ＯｍｐＴ蛋白酶或对其Ｎ末端至第９７位的氨基酸进行了置换的突变酶，在该多肽中的希望切断部位进行切断。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及到利用大肠杆菌具有的OmpT蛋白酶或其突变体，从融合蛋白直接切出生理活性肽、蛋白质和它们的衍生物的方法。详细讲涉及到在使用大肠杆菌成熟型OmpT蛋白酶的融合蛋白的切断中，通过在切断部位的P3位、P4位以及P5位配置碱性氨基酸，使该切断部位的P1位和P1’位间的肽键的切断率上升的方法，以及使用对OmpT蛋白酶的N末端的第97位氨基酸进行置换后对该P1’位的底物特异性改变了的突变体，即使在P1’位的氨基酸为精氨酸或赖氨酸以外的氨基酸的情况也可以从融合蛋白有效游离、生产生理活性肽、蛋白质和它们的衍生物的方法。
技术介绍
大肠杆菌OmpT蛋白酶是存在于大肠杆菌外膜级分中，主要是有选择地切断碱性氨基酸对间的肽键的蛋白酶。与该大肠杆菌OmpT蛋白酶氨基酸序列具有同源性、而且具有或推定有蛋白酶活性的蛋白质在沙门氏菌(Salmonella)、耶尔森氏菌(Yersinia)、志贺氏菌(Shigella)等肠内菌中也发现了，这样的一组蛋白质被称为omptin family。大肠杆菌OmpT蛋白酶分子量约为33500。Sugimura等研究了OmpT蛋白酶底物特异性，报告了本酶是特异切断本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽的切断方法，其特征是：与多肽中希望的切断部位相关的Ｐ１位为精氨酸或赖氨酸，Ｐ１’为天冬氨酸、谷氨酸或脯氨酸以外的氨基酸，在从Ｐ１０位至Ｐ３位或从Ｐ３’位至Ｐ５’位的氨基酸序列中的任意部位连续配置１个碱性氨基酸或２个或３个碱性氨基酸，但是，配置１个碱性氨基酸时，除去Ｐ６或Ｐ４位，使用ＯｍｐＴ蛋白酶在该多肽中希望的切断部位进行切断。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥野和昭，薮田雅之，
申请(专利权)人：第一阿斯比奥制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]