一种蜗牛蛋白酶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种蜗牛蛋白酶的制备方法，其解决了现有蜗牛蛋白酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，其步骤是：选用鲜活褐云玛瑙螺、清洗、粘液收集、第一次过滤、离心、第二次过滤、真空冻干、胶磨、保存。本发明专利技术广泛用于蜗牛蛋白酶的制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种酶的制备方法，具体地说是。
技术介绍
蜗牛蛋白酶是从蜗牛的足腺分泌的粘液中制备的生物活性蛋白，它富含天然尿囊素、钙、甘醇酸、骨胶原、蛋白质和维生素等保养肌肤必不可少的材料。此外，蜗牛粘液还是一种天然抗生素，能够杀死人们皮肤上的某些细菌，并能消除皮肤斑点和痤疮，因为它能渗透到皮肤的第三个层面。蜗牛分泌的粘液含有的化学成分具有紧肤作用，能够使皮肤迅速再生。从蜗牛粘液中提炼出的尿囊素可以使皮肤再生；蛋白质和维生素可以增加皮肤的营养，使肌肤更加细腻和光滑。而目前蜗牛蛋白酶的提取方法存在工艺复杂、操作性差和提纯率低的缺陷，保存条件高使得蜗牛蛋白酶价格居高不下，不能实现量产。
技术实现思路
本专利技术就是为了解决现有蜗牛蛋白酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，提供一种工艺简单、操作性强、提纯率高、成本低的蜗牛蛋白酶的制备方法。本专利技术提供，包括以下步骤:(I)蜗牛选购:选用鲜活褐云玛瑙螺；(2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物；(3)蜗牛粘液收集:取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流〈4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离重复5次，蜗牛分泌粘液后用滴管吸取至烧杯中；(4)第一次过滤:将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中；(5)离心:用低温离心机将第一次过滤后的粘液在0°C?5°C下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液；(6)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤；(7)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6%以下；(8)胶磨:将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中；(9)保存:200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。优选地，步骤(I)中选用的鲜活褐云玛瑙螺的重量为15克以上，所述步骤(2)中，冲洗用的清水温度为25°C;所述步骤(5)中，离心时的温度为:TC;所述步骤(7)中，蜗牛蛋白酶含水量为6%。本专利技术的有益效果是，本方法工艺简单、操作性强、提纯率高，可实现蜗牛蛋白酶的量产，蜗牛蛋白酶成品价格低，每100公斤蜗牛粘液可产1.2公斤蜗牛蛋白酶。本专利技术提取的蜗牛蛋白酶经过SB/T 10317-1999蛋白酶活力测定法进行酶活性实验，其酶活性为7.5Xl(T3u/g。【附图说明】图1是本专利技术的制备方法的过程图。【具体实施方式】如图1所示:(I)蜗牛选购:选用15克以上的鲜活褐云玛瑙螺(学名:Achatina Fulica)。(2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物，每次清洗还应仔细挑除已死掉的蜗牛。对于冲洗用的清水，其温度优选为25V。(3)蜗牛粘液收集:取50KG清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流〈4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离重复5次，蜗牛分泌粘液后用滴管吸取至烧杯中，50千克蜗牛可收集到5000克粘液。(4)第一次过滤:将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中。(5)离心:粘液用低温离心机在0°C?5°C下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液。对于离心温度，优选为3°C。(6)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤。(7)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6%以下，冻干的蜗牛蛋白酶为结晶体，呈米白色，5000克粘液可得60克蜗牛蛋白酶冻干粉。对于蜗牛蛋白酶含水量，优选为6%。(8)胶磨:将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中。(9)保存:200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。上述褐云玛瑙螺收集完粘液后需用清水与精饲料喂养5天后可再提取。【主权项】1.，其特征是包括以下步骤: (1)蜗牛选购:选用鲜活褐云玛瑙螺； (2)蜗牛清洗:将蜗牛置于放养箱中，用温度为18°C?28°C的清水冲洗，洗掉粪便和杂物； (3)蜗牛粘液收集:取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流〈4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复5次，蜗牛分泌粘液后，用滴管吸取至烧杯中； (4)第一次过滤:将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中； (5)离心:用低温离心机将第一次过滤后的粘液在0°C?5°C下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液； (6)第二次过滤:将上清液经过细菌滤器过滤； (7)真空冻干:滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6%以下； (8)胶磨:将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中； (9)保存:200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。2.根据权利要求1所述的蜗牛蛋白酶的制备方法，其特征是: 所述步骤(I)中选用的鲜活褐云玛瑙螺的重量为15克以上，所述步骤(2)中，冲洗用的清水温度为25°C;所述步骤(5)中，离心时的温度为:TC;所述步骤(7)中，蜗牛蛋白酶含水量为6%。【专利摘要】本专利技术涉及，其解决了现有蜗牛蛋白酶提取方法工艺复杂、操作性差、提纯率低、成本高的技术问题，其步骤是：选用鲜活褐云玛瑙螺、清洗、粘液收集、第一次过滤、离心、第二次过滤、真空冻干、胶磨、保存。本专利技术广泛用于蜗牛蛋白酶的制备。【IPC分类】C12N9-64【公开号】CN104745555【申请号】CN201510188191【专利技术人】刘斌, 杨磊 【申请人】威海圣奥罗生物科技有限公司【公开日】2015年7月1日【申请日】2015年4月20日本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蜗牛蛋白酶的制备方法，其特征是包括以下步骤：(1)蜗牛选购：选用鲜活褐云玛瑙螺；(2)蜗牛清洗：将蜗牛置于放养箱中，用温度为18℃～28℃的清水冲洗，洗掉粪便和杂物；(3)蜗牛粘液收集：取清洗干净的鲜活蜗牛，在工作台上静置，待其身体伸出外壳，用小型充电电源调整空载电压>900伏，负载电流<4毫安，瞬间电击蜗牛足部，一触即离，重复5次，蜗牛分泌粘液后，用滴管吸取至烧杯中；(4)第一次过滤：将收集好的粘液通过450目过滤网，收集在离心管中；(5)离心：用低温离心机将第一次过滤后的粘液在0℃～5℃下离心10分钟，离心转速为11000转/分，取上清液；(6)第二次过滤：将上清液经过细菌滤器过滤；(7)真空冻干：滤液用塑料容器进行真空冻干20小时，蜗牛蛋白酶含水量在6％以下；(8)胶磨：将冻干后的蜗牛蛋白酶在胶磨机中磨成粉末，分装在200g安瓶中；(9)保存：200g安瓶抽气封管，装箱后置于干燥阴凉处保存。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘斌，杨磊，
申请(专利权)人：威海圣奥罗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37