用于CDH3和CD3的双特异性抗体构建体制造技术

本发明专利技术涉及双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人CDH3的第一人结合结构域和结合T细胞表面上的人CDS的第二结合结构域。此外，本发明专利技术提供编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。另外，本发明专利技术提供用于产生本发明专利技术的抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医药用途和包含所述抗体构建体的试剂盒。

For the bispecific antibody CDH3 and CD3 constructs

The present invention relates to bispecific antibody constructs, comprising a combination of the first target cells on the surface of the CDH3 binding domain and T binding on the cell surface of human CDS binding domain second. In addition, the present invention provides polynucleotides encoding the antibody constructs, vectors containing the polynucleotides, and host cells transformed or transfected with the polynucleotides or vectors. In addition, the invention provides a method for producing antibody constructs of the invention, a pharmaceutical application of the antibody building body, and a kit containing the antibody constructs.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于CDH3和CD3的双特异性抗体构建体
本专利技术涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人CDH3的第一人结合结构域和结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本专利技术提供编码该抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本专利技术提供一种用于产生本专利技术的抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医学用途和包含所述抗体构建体的试剂盒。
技术介绍
钙粘着蛋白超家族在人类中涵盖100多个成员，包括所谓的典型钙粘着蛋白P-钙粘着蛋白、E-钙粘着蛋白、N-钙粘着蛋白和R-钙粘着蛋白，它们中的每一个在单个组的组织中均有活性(TakeichiM.Development，102：639-55(1988)，vanRoyF.，NatureRev.，V14：121-134(2014))。在成人组织和器官的发育以及各组织的稳态中，钙粘着蛋白均起着至关重要的作用(Conacci-SorrellM等人，JClinInvest，109：987-91，(2002))。钙粘着蛋白是跨膜糖蛋白，其通过形成钙依赖性连接(junction)并通过将机械刺激转化为电化学活性(这一过程被称为动力传导)来调节细胞-细胞粘附过程(GumbinerJ.Cell.Biol.，148：399-404(2000)；Yagi等人，GenesDev.，14：1169-1180(2000，Parades等人，BiochimicaetBiophysicaActa1826，297-311(2012))。胎盘钙粘着蛋白(P-钙粘着蛋白)，也称为钙依赖性细胞-细胞粘附蛋白3(CDH3)，是一种具有大约800个氨基酸的大的胞外结构域(ECD)的118kDa蛋白。该CDH3ECD包含五个钙粘着蛋白重复，本文中命名为(胞外)结构域1-5/Dom1-Dom5/D1-D5，每个钙粘着蛋白重复由约110个氨基酸组成。与P-钙粘着蛋白具有最高序列同源性的蛋白是具有53％序列同源性的E-钙粘着蛋白和具有39％同源性N-钙粘着蛋白。P-钙粘着蛋白的表达水平在健康成人个体中被认为是低的，并被限制在层状上皮细胞的基底部或下层，包括前列腺和皮肤、乳腺肌上皮细胞(TakeichiM.JCellBiol103：2649-58，(1986)和ShimoyamaY等人，CancerRes，49：2128-33(1989))。虽然P-钙粘着蛋白功能的缺失在基因敲除的小鼠中不是致死的，但是已表明其与发育缺陷以及乳腺上皮的增生和发育不良有关(G.L.Radice等人，J.CellBiol.139：1025-1032(1997))。相对于健康个体中的低基因表达水平，P-钙粘着蛋白的表达在一些疾病(包括如克罗恩病和结肠炎的免疫疾病)的情况下被上调(Hardy等人，Gut50：513-519(2002))。此外，认为P-钙粘着蛋白在癌细胞的原侵袭性方面起重要作用(Furukawa等人，MicroscopyRes.Technique38(4)：343-352(1997)；Parades等人，ClinCancerRes.11(16)，5869-5877(2005)；Parades等人，BiochimicaetBiophysicaActa1826，297-311(2012))。P-钙粘着蛋白的上调已见于多种肿瘤中，包括结肠直肠癌、肺癌(NSCLC)、乳腺癌(三阴性)、胰腺癌、头颈癌、甲状腺癌、宫颈癌、卵巢癌和胃(gastric)癌(Milic等人，CancerRes68：(19)7760-7768(2008)；Imai等人，ClinCancerRes14(20)6487-6495(2008)；Paredes等人，ClinCancerRes11(16)5869-5877(2005)；Dasgupta等人，OralOncology42，306-316(2006)；Jarzab等人，CancerRes；65：(4)1587-1597(2005)；Patel等人，Int.J.Cancer：106，172-177(2003)；Kim等人，HumanPathology41，877-885(2010))。此外，观察到P-钙粘着蛋白表达的增加与各种癌症类型患者的低存活率有关(SunL等人，AmJPathol.2011；179：380-90；Gamallo，ModernPathology，14：650-654，(2001)；Stefansson等人，J.Clin.Oncol.22(7)：1242-1252(2004)；Parades等人，CancerRes.64，8309-8317(2004))；TaniuchiK等人，CancerRes.2005；65：3092-9；ParedesJ等人，ClinCancerRes.2005；11：5869-77；HardyRG等人，Gut.2002；50：513-9；PeraltaSolerA等人，Cancer.1999；86：1263-72)。在心血管疾病之后，肿瘤(neoplasm)在非传染性疾病类的致死疾病中居第二位，2013年其在全球造成约830万人死亡(GBD2013Lancet2015；385：117-71)。自1990年以来，癌症病例的绝对值增加了45.6％，其原因可能是世界人口正在增加，人口老龄化和已确定的危险因素(如吸烟、超重、缺乏运动)的流行也在增加(GBD2013Lancet2015；385：117-71；TorreLA等人，CACancerJClin.2015；65：87-108)。在男性中，肺癌是导致死亡的主要原因，估计每年约有1,100万例，其次是肝癌和胃(stomach)癌。在女性中，乳腺癌是导致死亡的主要原因，每年约有50万例，其次是肺癌和结肠癌。据估计，2012年全球约有由男性中～1,20万例肺癌和女性中～170万乳腺癌引发的1400万新的癌症病例发生(TorreLA等人，CACancerJClin.2015；65：87-108)。所有的癌症对世界各地构成了巨大的社会负担，因此，对对抗该疾病的治疗选择有很高的需求。治疗癌症的常见策略涉及手术，然后是化学疗法、放射疗法或最近的靶向疗法或这些疗法的组合(如肿瘤学NCCN指南)。化学疗法试剂涵盖如5-氟尿嘧啶(5-FU)的核苷酸类似物、诸如奥沙利铂和拓扑异构酶抑制剂(如伊立替康)的DNA损伤剂或诸如多西他赛的微管抑制剂，这些试剂均导致肿瘤细胞增殖的抑制。靶向疗法包括例如选择性抑制突变的致癌激酶的小分子化合物，如被批准用于治疗黑色素瘤的BRAFV600E选择性化合物威罗菲尼(GarbeC.等人，RecentResultsCancerRes.2014；201：215-25)或被批准用于治疗肺癌(cancer)的间变性淋巴瘤激酶(ALK)抑制剂crizotinib和ceritinib(PallG.CurrOpinOncol.2015；27：118-24)。此外，还有基于抗体的化合物，如被批准用于治疗KRAS野生型结肠癌的识别并灭活表皮生长因子受体(EGFR)的西妥昔单抗和帕尼单抗(TolJ，PuntCJ.ClinTher.2010；32：437-53)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人CDH3的表位簇的第一人结合结构域，且包含结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域，其中所述人CDH3的表位簇包含在人CDH3的氨基酸位置291‑363(SEQ ID NO:36)中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.17 EP 15164154.51.一种双特异性抗体构建体，其包含结合靶细胞表面上的人CDH3的表位簇的第一人结合结构域，且包含结合T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域，其中所述人CDH3的表位簇包含在人CDH3的氨基酸位置291-363(SEQIDNO:36)中。2.根据权利要求1所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域结合包含在人CDH3的氨基酸位置291-327(SEQIDNO:34)中的表位。3.根据权利要求1所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域结合包含在人CDH3的氨基酸位置328-363(SEQIDNO:35)中的表位。4.根据权利要求3所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域还结合包含在人CDH3的氨基酸位置404-440(SEQIDNO:390)中的表位。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域还结合猕猴CDH3，优选地结合食蟹猴CDH3。6.根据权利要求1、2和5中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含选自下述的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，且所述VL区包含选自下述的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：a)如SEQIDNO:149中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:150中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:151中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:152中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:153中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:154中描绘的CDR-L3；b)如SEQIDNO:159中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:160中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:161中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:162中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:163中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:164中描绘的CDR-L3；c)如SEQIDNO:169中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:170中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:171中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:172中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:173中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:174中描绘的CDR-L3；d)如SEQIDNO:179中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:180中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:181中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:182中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:183中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:184中描绘的CDR-L3；e)如SEQIDNO:189中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:190中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:191中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:192中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:193中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:194中描绘的CDR-L3；f)如SEQIDNO:199中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:200中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:201中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:202中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:203中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:204中描绘的CDR-L3；g)如SEQIDNO:209中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:210中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:211中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:212中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:213中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:214中描绘的CDR-L3；h)如SEQIDNO:219中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:220中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:221中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:222中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:223中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:224中描绘的CDR-L3；i)如SEQIDNO:229中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:230中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:231中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:232中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:233中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:234中描绘的CDR-L3；和j)如SEQIDNO:239中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:240中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:241中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:242中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:243中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:244中描绘的CDR-L3。7.根据权利要求1、3、4和5中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含选自下述的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，且所述VL区包含选自下述的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：a)如SEQIDNO:279中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:280中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:281中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:282中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:283中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:284中描绘的CDR-L3；b)如SEQIDNO:289中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:290中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:291中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:292中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:293中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:294中描绘的CDR-L3；c)如SEQIDNO:299中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:300中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:301中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:302中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:303中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:304中描绘的CDR-L3；d)如SEQIDNO:309中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:310中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:311中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:312中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:313中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:314中描绘的CDR-L3；e)如SEQIDNO:319中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:320中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:321中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:322中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:323中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:324中描绘的CDR-L3；f)如SEQIDNO:329中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:330中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:331中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:332中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:333中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:334中描绘的CDR-L3；g)如SEQIDNO:339中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:340中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:341中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:342中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:343中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:344中描绘的CDR-L3；和h)如SEQIDNO:349中描绘的CDR-H1、如SEQIDNO:350中描绘的CDR-H2、如SEQIDNO:351中描绘的CDR-H3、如SEQIDNO:352中描绘的CDR-L1、如SEQIDNO:353中描绘的CDR-L2和如SEQIDNO:354中描绘的CDR-L3。8.根据权利要求6所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含VH区，所述VH区选自如SEQIDNO:155、SEQIDNO:165、SEQIDNO:175、SEQIDNO:185、SEQIDNO:195、SEQIDNO:205、SEQIDNO:215...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·韦斯，A·L·弗里斯克，R·齐尔茨，P·库弗，T·劳姆，D·劳，J·安拉尔，R·路特布斯，L·纳尔沃德，C·达尔霍夫，C·布鲁麦尔，P·霍夫曼，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE