在自身免疫疾病的免疫治疗中应用的自身抗原及其结构上相关的蛋白制造技术

本发明专利技术涉及自身抗原ＨＣ ｇｐ－３９，和包含的氨基酸序列表现了与ＨＣｇｐ－３９的氨基酸序列，更特别地与氨基酸序列ＹＫＬＶＣＹＹＴＳＷＳＱＹＲＥＧＤＧＳＣＦＰＤＡＬＤＲＦＬＣＴＨＩＩＹＳＦＡＮＩＳＮＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）至少５０％同源性的蛋白在哺乳动物自身免疫疾病关节软骨损伤的抗原特异治疗中诱导免疫系统耐受性的用途。自身抗原ＨＣ ｇｐ－３９，和包含的氨基酸序列表现了与氨基酸序列ＹＫＬＶＣＹＹＴＳＷＳＱＹＲＥＧＤＧＳＣＦＰＤＡＬＤＲＦＬＣＴＨＩＩＹＳＦＡＮＩＳＮＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）至少５０％同源性的关节炎发生蛋白也适合在动物，优选地在小鼠中引发关节炎。本发明专利技术进一步涉及包含上述自身抗原和／或上述关节炎发生蛋白的药物组合物，在测试样品中测定自身反应Ｔ细胞的诊断方法和在上述方法中使用的测试试剂盒。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新颖的自身抗原及其相关蛋白，它们在治疗自身免疫疾病关节软骨慢性损伤中的用途，含有上述自身抗原和/或蛋白的药物组合物，在测试样品中测定自身反应T细胞的诊断方法和在上述方法中使用的测试试剂盒。免疫系统是建立在区别外来抗原(非自身抗原)和自身抗原(自体抗原，来自个体自己的身体内)的原理上，这种区分通过对自身抗原的耐受性机制得到。免疫系统针对外来抗原保护个体，并在与外来抗原接触时通过激活特异细胞(如T和B淋巴细胞)和产生可溶性因子(如白细胞介素，抗体和互补因子)应答。免疫系统所应答的抗原被抗原呈递细胞(APCs)降解并且在细胞表面表达了与主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类糖蛋白相结合的抗原片段。MHC-糖蛋白-抗原-片段复合物通过它的T细胞受体识别与MHCⅡ类蛋白连接的抗原片段呈递给T细胞并与其结合。T细胞活化，即增生和/或合成白细胞介素，导致活化的淋巴细胞扩散到发病的抗原(Grey等，美国科学，261:38-46,1989)。自身抗原也不断地加工并作为抗原片段由MHC糖蛋白呈递到T细胞(Jardetsky等，自然353:326-329,1991)。因此自身识别是免疫系统固有的，在正常情况下，免疫系统对自身抗原是有耐受性的，而避免了它们的自身抗原激活免疫应答。当对自身抗原的耐受性丧失时，免疫系统由一个或多个自身抗原激活，导致自身反应T细胞的活化并产生抗体，这种现象称为自身免疫性。因为免疫反应一般是破坏性的，即意味着破坏入侵的外来抗原，所以自身免疫反应可以引起构成身体本身的组织的破坏。T细胞在自身免疫疾病中所起的作用已由几项研究证实。在小鼠中，实验的自身免疫脑脊髓炎(EAE)是由高限制性T细胞群介导，通过它们对髓磷脂基础蛋白(MBP)复合物的单一抗原决定基的特异性与MHCⅡ类分子连接。在Lewis鼠(对各种自身免疫疾病有高度敏感性的品种)中，已表明疾病由T细胞介导。人类自身免疫疾病也被认为与自身攻击T细胞的发育有关。在不同的疾病，如类风湿关节炎(RA)中牵涉到破坏性自身免疫反应，类风湿性关节炎中，由于大量的活化的淋巴细胞和MHCⅡ类表达细胞的存在导致慢性炎症过程，破坏了关节软骨的完整。仅仅软骨的存在看来是维持局部的炎症反应必须的已证明软骨的降解是与类风湿性关节炎中对软骨敏感的自身反应T细胞的活性相联系的(Sigall等，Clin.Exp.Rheumat.6:59,1988；Glant等，Biochem.Soc.Trans.18:796,1990；Burmester等，Rheumatoid arthritis Smolen,Kalden,Maini(Eds)Springer-Verlag Berlin Heidelberg,1992)。而且通过外科手术从RA病人中去除软骨已证明可减少炎症过程(G.S.Panayi等，Clin.ExD.Rheumatol.11(suppl.8):S1-S8,1993)。因此软骨蛋白被认为是靶自身抗原，能够刺激T细胞。这些自身反应T细胞的活化导致自身免疫疾病的发生。然而，在类风湿性关节炎发病时起作用的自身抗原的成分的鉴定至今仍难以捉摸。导致软骨损伤的炎症反应可用几种药物治疗，如类固醇药物。但是，这些药常常是免疫抑制性药物，是非特异的，并有毒副作用。非特异性免疫抑制的缺点使之成为高度不受欢迎的治疗方法。抗原特异的，非毒性的免疫抑制治疗方法提供了非常有吸引力的对非特异免疫抑制的改进方案。这种抗原特异性治疗方法涉及了用靶自身抗原或其氨基酸序列表现了与靶自身抗原的氨基酸酸序列同源性的抗原，或由上述自身抗原或由上述抗原派生的合成的T细胞反应性肽来治疗病人。这些合成的肽对应于自身抗原的T细胞抗原决定基，并可以用于诱导对它们自身和对自身抗原特异的T细胞耐受性。尽管用负责活化免疫系统的很相同的抗原来使免疫系统脱敏看起来反常，但是靶(自身)抗原的控制用药在免疫系统的脱敏中可以是非常有效的。免疫系统的脱敏或免疫耐受性是基于此长期观察的现象已喂养或吸入抗原或抗原决定基的动物当通过系统路径导入该抗原或抗原决定基时对该抗原或抗原决定基产生系统免疫应答的能力更低。为了有效地使用耐受性治疗方法来治疗T细胞介导的软骨损伤，就非常需要鉴定负责的自身抗原或其氨基酸序列表现了与靶自身抗原氨基酸序列序列同源性的抗原，并使病人对激活导致炎症过程的T细胞的自身抗原脱敏。本专利技术的目的是提供自身抗原，和其氨基酸序列表现了与自身抗原的氨基酸序列足够同源性的蛋白，上述自身抗原和/或蛋白适合在患有T细胞介导的软骨损伤的病人中诱导对负责的软骨抗原特异的T细胞耐受性。本专利技术进一步的目的是提供关节炎动物测试模型，此模型适合用于筛选抑制关节炎症状的新药。本专利技术的另一个目的是提供测定涉及关节软骨损伤的自身反应T细胞的方法和在上述方法中使用的测试试剂盒。令人吃惊地发现人类软骨糖蛋白39(下文中称为HC gp-39)是类风湿性关节炎病人中的靶自身抗原，它激活特异T细胞，结果导致或介导炎症过程。HC gp-39的关节炎发生性质在Balb/c小鼠中得到证明。单独的皮下注射上述蛋白到Balb/c小鼠中能在动物中引发关节炎症状。HC gp-39诱导疾病过程的特征在于通过在前足和/或反足中周期性出现的复发和从温和的关节炎逐渐地发展到更严重的症状。而且，观察到的受损关节的对称性分布，与观察到的周期性发生的复发和结节的形成一起，与关节炎，尤其是类风湿性关节炎中的疾病进程相像。甚至更令人吃惊地发现施用HC gp-39导致了免疫耐受性，并且更重要的是导致延迟和/或抑制了关节炎的发生。更令人吃惊地发现包含的氨基酸序列表现了与HC gp-39的氨基酸序列至少50％同源性的蛋白能够在注射入动物时诱导关节炎。尤其是包含的 氨 基 酸 列 表 现 了 与 氨 基 酸 序 列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND(SEQ ID NO:1)至少50％同源性的蛋白能在动物中以如所描述的HCgp-39一样的方式诱导关节炎。优选地，这些关节炎发生蛋白包含的氨基酸表现了与HC gp-39的氨基 酸 序 列，更 特 别 地 与 氨 基 酸 序 列YKLVCYYTSWSQYREGDGSCFPDALDRFLCTHIIYSFANISND(SEQ ID NO:1)至少70％，更优选地80％，最优选地90％的同源性。根据本专利技术的关节炎发生蛋白与SEQ ID NO:1的氨基酸序列的序列同源性的百分比应理解为由广泛使用的序列比较程序比如FASTA(W.R.Pearson和D.J.Lipman，美国国家科学院院报USA,85,2444-2448,1988)测定。根据本专利技术的适当的关节炎发生蛋白是例如猪肝素结合38kDa蛋白牛39kDa乳清蛋白，人YKL-39蛋白，鼠乳房退化39kDa蛋白，人输卵管特异糖蛋白，鼠输卵管特异糖蛋白，仓鼠输卵管特异糖蛋白，牛输卵管特异糖蛋白，人壳三糖酶前体蛋白和鼠分泌蛋白YM-1前体。根据本专利技术，关节炎发生蛋白非常适合诱导免疫系统对同源自身抗原的系统耐受性，可以用于推迟和/或抑制哺乳动物中关节炎的发生。HC gp-39存在于病人和健康成年人的血清中，但是蛋白在病人血清中的浓度是健康成年人的大约2倍。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用作治疗物质的蛋白，该蛋白包含的氨基酸序列表现了与氨基酸序列ＹＫＬＶＣＹＹＴＳＷＳＱＹＲＥＧＤＧＳＣＦＰＤＡＬＤＲＦＬＣＴＨＩＩＹＳＦＡＮＩＳＮＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）至少５０％的同源性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：AMH布茨，GFM威荷登，ES伯斯，
申请(专利权)人：阿克佐诺贝尔公司，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]