用于细胞免疫治疗的培养基制造技术

本发明专利技术提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；b)测量第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；c)将质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果质量因子的测量浓度在预定范围内，那么选择该第一血液制品用于细胞培养基并且可选地将第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择该第一血液制品。

Culture medium for cell immunotherapy

The invention provides a preparation method of the cell culture medium, the cell culture medium comprises a mixture of blood products from two or more donors, the method comprises the following steps: a) from the first donor at least first blood products; b) concentration of at least one quality factor measurement of blood products in the first C); the predetermined concentration range of concentration measurement and quality factor of the quality factor are compared; d) if the concentration measurement of quality factor in a predetermined range, then select the first blood products used in cell culture medium and can be selected to be the first choice of blood products into blood products, the first processing or not. The first choice of blood products.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有高质量标准的细胞培养基，特别用于免疫细胞的生长和扩增，并且涉及制备方法。
技术介绍
癌症治疗最有前途的进展之一是称作主动细胞免疫治疗(activecellularimmunotherapy)的新治疗类别。主动免疫治疗刺激患者的免疫系统，其目的是使用身体自身的免疫细胞促进抗原特异性抗肿瘤作用。为此，在体外培养免疫细胞以便增加细胞数目并影响分化。为了在体外培养细胞，必须要满足几个基本的环境要求，诸如，控制温度，细胞附着的基质，以及合适的生长培养基和保持适当的pH与渗透压的培养箱。细胞培养基配方在文献资料中已有详尽记载，并且很多培养基是在市场上可买到的。细胞培养基通常包括适当的能源来源和调节细胞周期的化合物。典型的培养基由如下物质组成：氨基酸补足物，维生素，无机盐，葡萄糖，和作为生长因子、激素与附着因子(attachmentfactor)来源的血清。除了作为营养物，培养基还有助于维持pH与渗透压。细胞培养基配方在文献资料中已有详尽记载，并且很多培养基是在市场上可买到的。对于免疫细胞特别是淋巴细胞的培养与扩增，细胞培养基通常来自血清或血浆，因为它们向免疫细胞提供了与身体的自然环境类似的环境。然而，在目前专业水平的培养基中扩增的淋巴细胞的增殖速度和活性还不够。此外，关于淋巴细胞扩增结果的数量、质量和存活率的可预测结果到目前为止还很少，并且通常作法是必需测试几批血清以便确定所需的质量。因此，本专利技术的目的是克服现有技术中的至少一个缺陷。
技术实现思路
本专利技术尤其是基于如下发现：所使用的细胞培养基的质量对用于细胞免疫治疗的淋巴细胞的扩增过程的结果具有重要影响。特别地，本专利技术人已经定义了决定细胞培养基在淋巴细胞扩增方面的质量的多个质量因子(qualityfactor)。专利技术人能够确定质量因子诸如雌二醇、皮质醇、IGF-1、胰岛素和SHBG必须以某些预定浓度存在。满足为各质量因子测定确定的标准的细胞培养基提供了培养哺乳动物细胞，尤其是免疫系统细胞的改进的结果。因此，本专利技术提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者(donor)的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；b)测量第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；c)将一个质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果该质量因子的测量浓度在该预定范围内，那么选择该第一血液制品用于细胞培养基并且选择性地将第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择该第一血液制品。本专利技术还包括细胞培养基，基于细胞培养基的体积，其包括：-浓度低于3ng/ml的CCL5；-浓度低于500pg/ml的嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)，-浓度低于100pg/ml的PDGF-88和/或CXCL-10；-浓度低于200pg/ml的IL-10；-浓度低于50pg/ml的IL-13；-浓度低于20pg/ml的IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP1b、PDGF、IL-1RA和/或TNFα；-浓度至少是65pmol/l，优选至少是75pmol/l，更优选至少是85pmol/l的雌二醇；-浓度至少是190nmol/l，优选至少是210nmol/l，更优选至少是220nmol/l的皮质醇；-浓度至少是80μg/l，优选至少是120μg/l，更优选至少是140μg/l的IGF-1；和/或-浓度低于31nmol/l，优选低于29nmol/l的SHBG。最后，本专利技术提供了细胞培养基用于培养细胞的用途。具体实施方式专利技术人已经发现，对于细胞培养免疫治疗，细胞培养基必须满足更高的质量标准。如实施例所示，各质量因子的差别导致淋巴细胞悬浮液的结果显著变化。特别地，使用质量因子在预定范围内的培养基，免疫细胞的生长、增殖或扩增引起细胞增殖速度、存活率和活性提高。鉴定这些质量因子能够确定制备细胞培养基，特别是用于免疫治疗用细胞群的细胞培养基的改进方法。因此，本专利技术提供了制备细胞培养基的方法，该细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，该方法包括如下步骤：a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；b)测量第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；c)将一个质量因子的测量浓度与该质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果该质量因子的测量浓度在该预定范围内，那么选择该第一血液制品用于细胞培养基并且选择性地将第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择该第一血液制品。根据本专利技术的方法提供了高质量细胞培养基，其与用于淋巴细胞扩增的因子组合得到强的细胞增殖能力和高活性的扩增的淋巴细胞。此外，该方法保证了提供质量稳定的细胞培养基用于促进淋巴细胞诸如T-细胞的体外扩增。如本文所用，“细胞培养基”或“生长培养基”是旨在供给动物或植物细胞生长的液体或胶体。生长培养基可以在pH、葡萄糖浓度、生长因子和其他营养物的存在方面存在不同。有两类细胞培养基：基于血液制品的培养基和合成培养基。根据本专利技术，“基于血液制品的培养基”含有至少一种血液制品。如本文所用，“合成培养基”是化学成分确定的培养基。这种培养基不含有任何天然来源的液体培养基(broth)诸如血液制品。相反，所有组分以确定的浓度加入到培养基中。如本文所用，“血液制品”是指哺乳动物的全血或全血的子集(subset)，尤其是血浆、血清或者血浆和血清的进一步的子集。如本文所用，“加工的血液制品”包括血浆、血清及其子集。如本文所用的“血浆”是指哺乳动物的血浆。它是血液的淡白色有时是黄色的液体组分，其通常将血细胞以悬浮态保持在全血中。血浆主要是水并含有溶解的蛋白质、葡萄糖、凝结因子(clottingfactor)、电解质、激素和二氧化碳。血浆可由血液制备，例如通过对含有抗凝剂的新鲜血液离心，其中血细胞沉在离心管底部。上清液则是血浆。如本文所用的“血清”是没有凝血因子(coagulationfactor)的血浆。如本文所用的“凝血因子”也指“凝结因子”，包括各种蛋白质，诸如纤维蛋白原、凝血酶原或因子VII。如本文所用的“全血的子集”是指来源于全血的溶液或悬浮液，包括全血的一部分组分。血浆和血清是全血的子集。如本文所用的“捐赠者”是指获得血液制品的哺乳动物，尤其是人。捐赠物可以是全血(WB)或者通过单采法(apheresis)取回(retrieved)的全血的特定组分。如本文所用的“单采法”是医学技术，其中捐赠者的血液经过一种设备，该设备分离出一种具体成分并将剩余成分返回血液循环。例如，血浆单采法(plasmapheresis)仅收集血浆，所有的其他组分返回捐赠者。如本文所用，从捐赠者“获得血液制品”是指从捐赠者取回血液的操作，尤其是直接从捐赠者的静脉取得血液。“细胞因子”，如本文所用，是种类广泛且松散的小蛋白质(～5–20kDa)，其在细胞信号传导中是重要的。它们由细胞释放并影响其他细胞的行为。细胞因子也可参与自分泌信号传导。细胞因子包括趋化因子、干扰素、本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备细胞培养基的方法，所述细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，所述方法包括如下步骤：a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；b)测量所述第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；c)将一个质量因子的测量浓度与所述质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果所述质量因子的测量浓度在所述预定范围内，那么选择所述第一血液制品用于所述细胞培养基并且选择性地将所述第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择所述第一血液制品。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.06.10 DE 102014211052.11.制备细胞培养基的方法，所述细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，所述方法包括如下步骤：a)提供来自第一捐赠者的至少第一血液制品；b)测量所述第一血液制品中的至少一个质量因子的浓度；c)将一个质量因子的测量浓度与所述质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果所述质量因子的测量浓度在所述预定范围内，那么选择所述第一血液制品用于所述细胞培养基并且选择性地将所述第一选择的血液制品转化成第一加工的血液制品，否则，不选择所述第一血液制品。2.根据权利要求1所述的方法，其中采用来自不同捐赠者的多于一种的血液制品进行步骤a)至d)，并且将所述选择的血液制品或加工的血液制品合并形成所述培养基。3.制备细胞培养基的方法，所述细胞培养基包括来自两个或更多个捐赠者的血液制品的混合物，所述方法包括如下步骤：a)提供来自两个或更多个捐赠者的血液制品的至少第一混合物；b)测量所述第一混合物中的至少一个质量因子的浓度；c)将一个质量因子的测量浓度与所述质量因子的预定浓度范围进行比较；d)如果所述质量因子的测量浓度在所述预定范围内，那么选择所述第一混合物用于所述细胞培养基，否则，不选择所述第一混合物。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述血液制品选自全血、血浆、血清或其子集。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述至少一个质量因子选自细胞因子，或者选自雌二醇、皮质醇、性激素结合球蛋白(SHBG)、胰岛素和胰岛素样生长因子1(IGF-1)。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞因子选自如下：白细胞介素6(IL-6)、干扰素-γ(IFNγ)、白细胞介素1受体激动剂(IL-1RA)、白细胞介素5(IL-5)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子(TNFα)、CCL5(RANTES)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素1b(IL-1b)、嗜酸性粒细胞趋化因子、碱性FGF、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF-88)、C-X-C基序趋化因子10(CXCL-10)100pg/ml、白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素4(IL-4)、MCP1、白细胞介素8(IL-8)、MIP1a、白细胞介素10、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、白细胞介素15(IL-15)、白细胞介素7(IL-7)白细胞介素12p70(IL12p70)、白细胞介素17a(IL-17a)、白细胞介素9(IL-9)和白细胞介素21(IL-21)。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述质量因子选自SHBG、IGF-1、CCL5和IL-6。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中测试两个或更多个质量因子。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述质量因子选自CCL5、嗜酸性粒细胞趋化因子、PDGF-88、CXCL-10、IL-10、IL-13、IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP1b、PDGF、IL-1RA、TNFα、雌二醇、皮质醇、IGF-1和SHBG。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中测试四个质量因子，并且其中所述质量因子是SHBG、IGF-1、CCL5和IL-6。11.根据权利要求5至9中任一项所述的方法，其中基于所述血液制品的体积来限定的浓度范围是：-CCL5低于3ng/ml，-嗜酸性粒细胞趋化因子低于500pg/ml，-PDGF-88和CXCL-10低于100pg/ml，-IL-10低于200pg/ml，-IL-13低于50pg/m，-IL-1b、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL12p70、IL-15、IL-17a、IL-21、碱性FGF、EGF、IFNγ、GCSF、GM-CSF、MCP1、MIP1a、MIP1b、PDGF、IL-1RA和TNFα低于20pg/ml-雌二醇至少是65pmol/l，优选至少是75pmol/l，更优选至少是85pmol/l-皮质醇至少是190nmol/l，优选至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：雅克布·盖尔，马库斯·莫伊雷尔，厄内斯特·多杜，
申请(专利权)人：保利比奥斯博特有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE