DR3变体及其用途制造技术

本发明专利技术提供了具有与TL1A增加的结合亲和力的死亡结构域受体3(DR3)变体以及包含其的组合物。此外，本发明专利技术提供了所述肽或组合物的使用方法，包括但不限于自身免疫疾病和/或炎性疾病的治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术尤其涉及来源于在减少干扰素(IFN)-γ分泌中有效的死亡结构域受体3(DR3)的肽，及其使用方法，包括但不限于自身免疫疾病和/或炎性疾病的治疗。
技术介绍
哺乳动物免疫系统是通过信号调节的复杂细胞网络，所述信号通过许多分泌蛋白质和受体蛋白质传递。人肿瘤坏死因子(TNF)超家族包括至少19个成员，并且代表主要类别的刺激蛋白质。TNF-样1A(TL1A)是新近描述的TNF超家族的成员，其显示涉及一系列自身免疫炎性疾病，包括炎性肠病(IBD)、类风湿性关节炎(RA)和哮喘。TL1A是目前唯一已知的死亡结构域受体3(DR3)的配体，其占优势地由活化T细胞和内皮细胞表达。TL1A与DR3的结合很可能通过NF-κB相关途径的活化来触发增殖信号。显示TL1A通过与白细胞介素(IL)-12和IL-18协同作用来增加干扰素(IFN)-γ生产，并且因此可使免疫应答偏向1型T辅助细胞(TH1)样应答。首先显示TL1A由内皮细胞表达，并且它在这些细胞中的表达通过用TNF-α或IL-16处理得到显著增强。后续研究已显示TL1A也在尤其是来自患有炎性肠病(IBD)的患者的肠组织中的淋巴细胞浆细胞和单核细胞中表达。DR3，TL1A的受体，由CD4+T细胞和天然杀伤细胞表达，并且它的表达在T细胞活化后增加。尽管DR3具有可导致细胞凋亡的细胞内死亡结构域，但功能数据提示DR3的活性主要是促炎。有趣的是，TL1A的另一种天然受体是诱饵受体3(DcR3)，编码可以高亲和力结合TL1A的可溶性蛋白质。这种可溶性受体显示出广泛特异性，并且可结合其他TNF配体包括FasL和LIGHT。因此，由于三种TNF配体的多样化功能，难以限定DcR3对宿主免疫的贡献。使用克罗恩氏病(CD)的两种不同动物模型，显示肠道炎症的诱导与发炎粘膜中TL1A和DR3的显著上调有关。使用DR3缺陷小鼠的后续研究显示DR3表达是关于T细胞的免疫病理学所需的，包括实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)和过敏性肺炎症疾病模型中的局部T细胞累积和细胞因子生产。免疫病理学和临床疾病在肺炎症和EAE的小鼠模型两者中的DR3缺陷小鼠中急剧减少。另外，显示TL1A基因中的遗传变异促成日本和欧洲人口中对IBD的敏感性。最后，使用RA的实验模型的几项研究已显示TL1A-DR3相互作用对于该疾病的发病机理是关键的。TL1A途径在介导炎症和自身免疫病症中的作用致使它成为有吸引力的干预靶。TL1A与其内源DR3受体结合的阻断可导致下游信号传导效应的取消，并且因此预防各种炎性病症。存在治疗或改善炎性疾病或自身免疫疾病的更有效手段的长期需要。能够抑制TL1A诱导的IFN-γ分泌的试剂的开发因此是期望的。
技术实现思路
本专利技术在其一些实施例中提供了死亡结构域受体3(DR3)变体以及包含其的药物组合物。在一些实施例中，本专利技术的变体和组合物在减少TL1A诱导的IFN-γ分泌中是有效的。在一些实施例中，本专利技术的DR3变体可用于治疗或改善自身免疫疾病或病症和/或炎性疾病或病症。本专利技术部分基于下述出乎意料的发现：如本文公开的包含位点特异性氨基酸修饰(例如置换)的DR3变体具有增加的对TL1A的结合亲和力。像这样，示例性肽显示出相对于野生型(WT)DR35倍增加的TL1A结合亲和力。令人惊讶的是，DR3变体在抑制TL1A诱导的IFN-γ分泌中高度有效。根据一个方面，本专利技术提供了包含SEQIDNO：13(GGTRSPRCDCAGDFHKKIGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLVCPQDTFLAWENHHNSECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCKPGWFVECQVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLLCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF)的氨基酸的氨基酸分子或者其类似物或片段，其中所述氨基酸分子包含在选自下述的位置处的至少一个氨基酸置换：H15、I18、E38、V47、D51、W56、N61、A65、K93、Q101、Q104和L129。在一个实施例中，氨基酸分子包含SEQIDNO：1的氨基酸：GGTRSPRCDCAGDFX1KKX2GLFCCRGCPAGHYLKAPCTX3PCGNSTCLX4CPQX5TFLAX6ENHHX7SECX8RCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCX9PGWFVECX10VSX11CVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLX12CSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF；其中：X1是H或Q；X2是I、T或Y；X3是E或K；X4是V或P；X5是D或G；X6是W或R；X7是N或E；X8是A或T；X9是K、E或A；X10是Q或S；X11是Q或P；并且X12是L或P。根据一些实施例，氨基酸分子包含选自SEQIDNO：2-9的氨基酸序列。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：2的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：3的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：4的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：5的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：6的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：7的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：8的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子包含SEQIDNO：9的氨基酸。根据另一个实施例，氨基酸分子还包含抗体的可结晶片段(Fc)区的肽。根据另一个实施例，抗体的可结晶片段(Fc)区的所述肽包含SEQIDNO：10的氨基酸序列。根据另一个实施例，氨基酸分子还包括包含SEQIDNO：11(IEGRMDRS)的氨基酸序列的接头，其中所述接头融合至SEQIDNO：1的所述氨基酸的羧基末端以及抗体的Fc区的所述肽的氨基末端。根据另一个方面，本专利技术提供了包含本专利技术的氨基酸分子和运载体的组合物。根据另一个方面，本专利技术提供了多核苷酸分子，所述多核苷酸分子包含编码包含SEQIDNO：1的氨基酸分子的编码部分。根据另一个方面，本专利技术提供了包含多核苷酸分子的表达载体，所述多核苷酸分子包括编码包含SEQIDNO：1的氨基酸分子的编码部分。在另一个实施例中，本专利技术提供了包含多核苷酸分子的表达载体，所述多核苷酸分子包含如SEQIDNO：12中所示的核酸序列。根据另一个方面，本专利技术提供了包含本专利技术的表达载体的细胞。根据另一个方面，本专利技术提供了包含本专利技术的表达载体和运载体的组合物。根据另一个方面，本专利技术提供了用于减少或抑制有此需要的受试者中的炎症、免疫应答或两者的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的本专利技术的氨基酸分子或包含所述氨基酸分子的组合物的步骤，由此抑制所述受试者中的炎症、免疫应答或两者。根据另一个实施例，所述减少或抑制炎症、免疫应答或两者是减少或抑制所述受试者中TL1A诱导的IFN-γ分泌。根据另一个实施例，所述受试者患有炎性肠病。根据另一个实施例，所述受试者患有牛皮癣。根据另一个实施例，所述受试者患有自身免疫疾病。根据另一个实施例，所述受试者患有哮喘。根据另一个实施例，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含SEQ ID NO：13(GGTRSPRCDCAGDFHKKIGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLVCPQDTFLAWENHHNSECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCKPGWFVECQVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLLCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF)的氨基酸的氨基酸分子或者其类似物或片段，其中所述氨基酸分子包含在选自下述的位置处的至少一个氨基酸置换：H15、I18、E38、V47、D51、W56、N61、A65、K93、Q101、Q104和L129。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.28 US 61/984,9101.一种包含SEQIDNO：13(GGTRSPRCDCAGDFHKKIGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLVCPQDTFLAWENHHNSECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCKPGWFVECQVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLLCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF)的氨基酸的氨基酸分子或者其类似物或片段，其中所述氨基酸分子包含在选自下述的位置处的至少一个氨基酸置换：H15、I18、E38、V47、D51、W56、N61、A65、K93、Q101、Q104和L129。2.根据权利要求1所述的氨基酸分子，所述氨基酸分子包含SEQIDNO：1的氨基酸序列GGTRSPRCDCAGDFX1KKX2GLFCCRGCPAGHYLKAPCTX3PCGNSTCLX4CPQX5TFLAX6ENHHX7SECX8RCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCX9PGWFVECX10VSX11CVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLX12CSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF其中：X1是H或Q；X2是I、T或Y；X3是E或K；X4是V或P；X5是D或G；X6是W或R；X7是N或E；X8是A或T；X9是K、E或A；X10是Q或S；X11是Q或P；和X12是L或P。3.根据权利要求1所述的氨基酸分子，所述氨基酸分子包含SEQIDNO：2GGTRSPRCDCAGDFHKKYGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLPCPQGTFLAWENHHNSECTRCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCAPGWFVECSVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLPCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF的氨基酸。4.根据权利要求1所述的氨基酸分子，所述氨基酸分子包含SEQIDNO：3GGTRSPRCDCAGDFHKKTGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLPCPQGTFLAWENHHESECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCEPGWFVECQVSPCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLPCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF的氨基酸。5.根据权利要求1所述的氨基酸分子，所述氨基酸分子包含SEQIDNO：4GGTRSPRCDCAGDFHKKYGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLVCPQGTFLAWENHHNSECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCEPGWFVECQVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLPCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF的氨基酸。6.根据权利要求1所述的氨基酸分子，所述氨基酸分子包含SEQIDNO：5GGTRSPRCDCAGDFHKKIGLFCCRGCPAGHYLKAPCTKPCGNSTCLPCPQDTFLARENHHNSECTRCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCAPGWFVECSVSQCVSSSPFYCQPCLDCGALHRHTRLPCSRRDTDCGTCLPGFYEHGDGCVSCPTSTLGSCPERCAAVCGWRQMF的氨基酸。7.根据权利要求1所述的氨基酸分子，所述氨基酸分子包含SEQIDNO：6GGTRSPRCDCAGDFQKKIGLFCCRGCPAGHYLKAPCTEPCGNSTCLPCPQDTFLARENHHNSECARCQACDEQASQVALENCSAVADTRCGCKPGWFVECQVSPCVSSSPFYCQPCL...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·哈诺尼，I·莱文，
申请(专利权)人：国家生物技术研究所公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL