【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种乳腺癌干细胞分离方法,包括以下步骤:1)将乳腺癌细胞系或原代乳腺癌组织消化成单细胞悬液;2)按预定密度和层数配置不同密度Percoll分离液,按密度高低依次叠加,制成Percoll不连续密度梯度分离液;3)将消化 后的单细胞悬液叠加到Percoll不连续密度梯度分离液顶端,离心分离;4)吸出离心后Percoll分离液中分层的各亚群细胞,PBS洗;5)将分离出的各亚群细胞中每个亚群各设实验管和对照管,实验管和对照管分别加入Hoechst 33342以及Hoechst33342、Verapamil至预定终浓度,水浴并PBS洗后,用流式细胞仪检测出肿瘤干细胞比例最高的亚群;6)如该肿瘤干细胞比例最高的亚群达到预定的富聚度,则用流式细胞仪分选备用;7)如该肿瘤干细 胞比例最高的亚群未达到预定的富聚度,则调整Percoll分离液的密度,重复以上相关步骤,直至筛选出肿瘤干细胞达到预定富聚度的Percoll分离液密度,再用流式细胞仪分选已富聚亚群中的肿瘤干细胞备用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:王水,刘晓安,许健,凌立君,
申请(专利权)人:江苏省人民医院,
类型:发明
国别省市:84[中国|南京]
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