干细胞及其分离方法技术

本发明专利技术提供从哺乳动物的胰脏分离胰脏干细胞的方法和鉴别哺乳动物的胰脏干细胞的方法以及通过所述方法分离、鉴别得到的胰脏干细胞的用途。更具体地说，本发明专利技术提供哺乳动物的胰脏干细胞的分离方法和鉴别方法，所述方法包括对选自ｃ－Ｍｅｔ、ｃ－Ｋｉｔ、ＣＤ４５和ＴＥＲ１１９和Ｆｌｋ－１的２种或多种标志蛋白或编码该蛋白的基因的表达情况进行分析。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及哺乳动物的胰脏干细胞及其分离鉴别方法以及该细胞的用途。
技术介绍
已经报道了用作标志从小鼠胚胎肝脏中分离肝祖细胞的方法(Hepatology 32(6)，1230-1239(2000))、用作标志分离肝脏干细胞的方法(谷口英树第117次日本医学会研讨会“干细胞与细胞疗法”记录集，80-89(2001))。虽然认为存在器官固有的干细胞，但是未预见到干细胞中存在共同的标志。特别是对于分化为多种多样、在各方面发挥着生理学机能的胰脏干细胞，其分离鉴别方法现在仍未确定。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供胰脏干细胞的分离和鉴别方法。本专利技术的目的还在于提供胰脏干细胞以及提供该干细胞作为药物和/或试剂。本专利技术人为实现上述目的，进行了深入研究，结果发现了胰脏干细胞中这一共同标志的表达形式，利用该特征成功地实现了胰脏干细胞的适当分离和鉴别。经过进一步详细研究，结果发现以这一标志的表达形式为指标，可以更适当地分离、鉴别胰脏干细胞，从而完成了本专利技术。即，本专利技术如下所述。(1)从哺乳动物的胰脏分离胰脏干细胞的方法，该方法使用2种或多种对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119的标志蛋白或编码该蛋白的基因具有特异亲和性的物质进行。(2)从哺乳动物的胰脏分离胰脏干细胞的方法，该方法使用2种或多种对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119和Flk-1的标志蛋白或编码该蛋白的基因具有特异亲和性的物质进行。(3)上述(1)或(2)的方法，其中具有特异亲和性的物质为标志蛋白的抗体。(4)鉴别哺乳动物的胰脏干细胞的方法，该方法使用2种或多种对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119的标志蛋白或编码该蛋白的基因具有特异亲和性的物质进行。(5)鉴别哺乳动物的胰脏干细胞的方法，该方法使用2种或多种对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119和Flk-1的标志蛋白或编码该蛋白的基因具有特异亲和性的物质进行。(6)上述(4)或(5)的方法，其中具有特异亲和性的物质为标志蛋白的抗体。(7)从哺乳动物的胰脏分离胰脏干细胞的方法，该方法包括对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119的2种或多种标志蛋白或编码该蛋白的基因的表达情况进行分析的步骤。(8)从哺乳动物的胰脏分离胰脏干细胞的方法，该方法包括对选自c-Met、c-Kit、CD45、TER119和Flk-1的2种或多种标志蛋白或编码该蛋白的基因的表达情况进行分析的步骤。(9)鉴别哺乳动物的胰脏干细胞的方法，该方法包括对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119的2种或多种标志蛋白或编码该蛋白的基因的表达情况进行分析的步骤。(10)鉴别哺乳动物的胰脏干细胞的方法，该方法包括对选自c-Met、c-Kit、CD45、TER119和Flk-1的2种或多种标志蛋白或编码该蛋白的基因的表达情况进行分析的步骤。(11)胰脏干细胞，该胰脏干细胞用上述(1)、(2)、(7)或(8)中任一项的方法从哺乳动物的胰脏分离得到。(12)上述(11)的胰脏干细胞，该胰脏干细胞以c-Met+、c-Kit-、CD45-、TER119-的形式显示c-Met、c-Kit、CD45和TER119这四个标志。(13)上述(11)的胰脏干细胞，该胰脏干细胞以c-Met+、c-Kit-、CD45-、TER119-、Flk-1-的形式显示c-Met、c-Kit、CD45、TER119和Flk-1这五个标志。(14)预防或治疗胰脏机能减退疾病的药物，该药物含有上述(12)或(13)的胰脏干细胞或从该干细胞分化而来的细胞。(15)预防或治疗肝、胆管或胃肠机能减退疾病的药物，该药物含有上述(12)或(13)的胰脏干细胞或从该干细胞分化而来的细胞。(16)筛选诱导哺乳动物的胰脏干细胞分化的物质的方法，该方法包括下述步骤(i)使胰脏干细胞与测试物反应的步骤，(ii)测定反应后细胞中胰脏标志的表达的步骤。(17)筛选诱导向哺乳动物的肝、胆管或胃肠分化的物质的方法，该方法包括下述步骤(i)使上述(12)或(13)的胰脏干细胞与测试物反应的步骤，(ii)测定反应后细胞中肝、胆管或胃肠标志的表达的步骤。(18)筛选哺乳动物的胰脏机能调节物质的方法，该方法包括下述步骤(i)使胰脏干细胞或从该干细胞分化而来的细胞与测试物反应的步骤，(ii)测定反应后细胞中胰脏标志的表达的步骤。(19)筛选哺乳动物的肝、胆管或胃肠机能调节物质的方法，该方法包括下述步骤(i)使上述(12)或(13)的胰脏干细胞或从该干细胞分化而来的细胞与测试物反应的步骤，(ii)测定反应后细胞中肝、胆管或胃肠标志的表达的步骤。专利技术详述本专利技术提供使用对选自c-Met、c-Kit、CD45和TER119的2种或多种，优选3种或多种，最优选4种全部标志蛋白或编码该蛋白的基因分别具有特异亲和性的物质，从哺乳动物的胰脏分离、鉴别胰脏干细胞的方法。本专利技术还提供使用对选自c-Met、c-Kit、CD45、TER119和Flk-1的2种或多种，优选3种或多种，更优选4种或多种，最优选5种全部标志蛋白或编码该蛋白的基因分别具有特异亲和性的物质，从哺乳动物的胰脏分离、鉴别胰脏干细胞的方法。本说明书中的“哺乳动物”具体是指人、牛、马、狗、豚鼠、小鼠、大鼠等。c-Met蛋白是原癌基因产物，作为具有酪氨酸激酶活性的肝细胞生长因子受体(HGF受体)发挥作用。已有关于其表达与胃、胆管等中的癌具有相关性的报道。c-Kit蛋白也是同样的原癌基因产物，是具有与巨噬细胞集落刺激因子或血小板衍生生长因子的受体相同结构的受体酪氨酸激酶，据报道与某些种类的肿瘤有关。CD45蛋白是白细胞共同抗原的一种，已知除红细胞、血小板及它们的祖细胞外，在所有的造血细胞中都有表达。已知TER119蛋白是选别类红细胞的有效的细胞表面标志。已知Flk-1蛋白是选别血管内皮细胞的有效的细胞表面标志。本专利技术以这些蛋白或编码这些蛋白的基因在胰脏干细胞中显示出特有的表达形式这一新发现为基础。本说明书中，“标志”如无预先说明，则是指由这样的在胰脏干细胞中显示出特有表达形式的一系列蛋白或编码这些蛋白的基因构成的各个组。所述标志蛋白随哺乳动物的种类等不同而具有不同的氨基酸序列，本专利技术中只要与其在胰脏干细胞中的表达形式一样，则这样的蛋白也可以用作标志蛋白都在本专利技术范围内。具体而言，各蛋白的氨基酸序列具有40％以上同源性的同源物也可以用作本专利技术的标志蛋白，即用作c-Met、c-Kit、CD45、TER119和Flk-1。本专利技术包括用对各标志蛋白或编码该蛋白的基因具有特异亲和性的物质分析这些标志蛋白和/或编码这些标志蛋白的基因的表达的步骤。本说明书中，对于“使用”这一用语，对其方法没有特别限制，具体而言，例如使用对标志蛋白具有特异亲和性的物质时，可以有利用与该标志蛋白的抗体进行抗原抗体反应的方法；或者使用对编码标志蛋白的基因具有特异亲和性的物质时，可以有利用杂交反应的方法(后面描述详细的操作)。作为对标志蛋白具有特异亲和性的物质，例如有对该蛋白具有特异亲和性的抗体或其片段，所述特异亲和性是指通过抗原抗体反应特异性识别该蛋白、并与其结合的能力。只要该抗体或其片段是可以与该蛋白特异性结合的物质即可，对其没有特别本文档来自技高网...

【技术保护点】
从哺乳动物的胰脏分离胰脏干细胞的方法，该方法使用２种或多种对选自ｃ－Ｍｅｔ、ｃ－Ｋｉｔ、ＣＤ４５和ＴＥＲ１１９的标志蛋白或编码该蛋白的基因具有特异亲和性的物质进行。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：谷口英树，铃木淳史，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]