抑制血管发生和肿瘤生长的多肽化合物制造技术

本发明专利技术的某些实施方案提供了多肽组合物（如可与ＥｐｈＢ４结合的抗体及其抗原结合部分），以及抑制ＥｐｈＢ４活性的方法。本发明专利技术的另一些实施方案则提供了治疗肿瘤或治疗血管发生相关疾病的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求于2004年9月23日递交的美国临时申请60/612,908、于2004年9月23日递交的美国申请10/949,720以及2004年3月12日递交的美国申请10/800,350的优先权。相关申请的完整教导全部在此处引用作为参考。
技术介绍
EphB4，有时也称为肝配蛋白受体B4或肝细胞瘤跨膜激酶(HTK)，是跨膜受体蛋白-酪氨酸激酶家族中的一员。EphB4含有一个由配体结合结构域(也称为球蛋白结构域)、富半胱氨酸结构域以及一对III型纤连蛋白重复(见如图5)组成的细胞外结构域。胞浆结构域中含具有两个保守酪氨酸残基的近膜区、蛋白质酪氨酸激酶结构域、不育α基序(SAM)以及PDZ结构域结合基序。EphB4与膜结合配体肝配蛋白B2相互作用(Sakano，S.等人，Oncogene.1996 Aug 15；13(4)813-22；Brambilla R.等人EMBO J.1995 Jul 3；14(13)3116-26)。EphB4与Eph家族的其他成员一样，通过结合成簇的膜连接肝配蛋白配体而被活化(Davis S等人，Science.1994 Nov4；266(5186)816-9)，提示Eph受体的活化需要表达受体的细胞与表达配体的细胞间的接触。一旦配体结合，EphB4受体形成二聚体并自磷酸化近膜区的酪氨酸残基从而达到完全活化。一般认为当表达EphB4的细胞遇到表达肝配蛋白B2的细胞时，EphB4-肝配蛋白B2的相互作用和聚合会激发两种细胞内的信号转导。EphB4-肝配蛋白B2信号转导涉及血管发生(Wang等人.Cell.1998May 29；93(5)741-53；Gerety等人，Mol Cell.1999 Sep；4(3)403-14)。血管发生是从先前存在的微管结够的内皮中产生新的血管，是宿主体内实体肿瘤生长、进展和转移的关键步骤。在正常的生理性血管发生中，血管内皮与其周围基质成分间的自分泌、旁分泌以及邻分泌相互作用在空间和时间上都受到严格的调节。此外，促血管发生和血管稳定的细胞因子以及生长因子的水平和活性也保持平衡。与之相反，活跃肿瘤生长所必需的病理性血管发生持续不衰，是正常血管发生系统失调节的表现。特别是实体和造血系统类型的肿瘤，更与高水平的异常血管发生相关。一般认为肿瘤的发生包括一系列有序而相互作用的步骤，最终导致产生具有侵袭性生长潜能的自主性克隆。这些步骤包括持续的生长和无限的自我更新。肿瘤细胞种群的一般特征在于生长信号的自供给、对生长抑制信号敏感性降低以及对凋亡的耐受。起始异常生长的遗传的或细胞发生的事件通过阻断凋亡，将细胞维持在一个延长的“就绪”状态。本公开内容的目的在于提供可抑制血管发生和肿瘤生长的试剂和治疗手段。专利技术概述本公开内容一方面提供了抑制EphB4介导功能的多肽试剂，包括可以结合EphB4并通过特定途径影响EphB4的抗体及其抗原结合部分。正如此处所述，EphB4和肝配蛋白B2参与了多种疾病状态，包括癌症和与有害或过度血管发生相关的疾病。因此，此处公开的某些多肽试剂也可用于治疗此类疾病。此外，本公开内容涉及在多种肿瘤中EphB4和/或肝配蛋白B2常常高水平表达这一发现。因此，能够下调EphB4或肝配蛋白B2功能的多肽试剂可以通过直接作用于肿瘤细胞而影响肿瘤，也可以通过间接作用于肿瘤募集的血管发生过程而对肿瘤产生影响。在某些实施方案中，本公开内容提供了特别适于用下调EphB4或肝配蛋白B2功能的试剂治疗的肿瘤类型的鉴定。本公开内容的某些方面提供了可与EphB4胞外部分的表位相结合而抑制EphB4活性的分离的抗体或其抗原结合部分。分离的抗体或其抗原结合部分可结合于位于附图说明图1 EphB4序列中的氨基酸16-198的表位。例如，该表位可能处在与肝配蛋白B2结合的EphB4球蛋白结构域(GD)中。分离的抗体或其抗原结合部分可结合于位于图1 EphB4序列中的氨基酸324-429或430-537的表位。例如，分离的抗体或其抗原结合部分可以结合于EphB4的第一纤连蛋白样结构域(FND1)或第二纤连蛋白样结构域(FND2)。分离的抗体或其抗原结合部分可以抑制EphB4二聚化或多聚化并可以任选地抑制肝配蛋白B2刺激的EphB4自磷酸化。分离的抗体或其抗原结合部分可以抑制培养的内皮细胞形成脉管、体内组织的血管形成、植入动物角膜的组织的血管形成、植入动物体内的基质胶(matrigel)组织栓的血管形成和/或小鼠中人类肿瘤异种移植物的生长。优选的结合图1EphB4序列中氨基酸16-198的表位的抗体包括此处以No.001、No.023、No.035和No.079表示的抗体。优选的结合图1 EphB4序列中氨基酸428-537的表位的抗体包括此处以No.047、No.057、No.85H、No.098和No.138表示的抗体。本公开内容的某些方面提供了可与EphB4胞外部分的表位相结合而刺激EphB4活性的分离的抗体或其抗原结合部分。例如此处所述的分离抗体或其抗原结合部分可结合位于图1 EphB4序列中氨基酸324-429或430-537的表位，并刺激EphB4激酶活性。该分离的抗体或其抗原结合部分可以结合EphB4的FND1或FND2。该抗体可以选自此处以No.85L、No.091、No.121和No.131表示的抗体。本公开内容提供此处公开的任一抗体的人源化形式，以及含有至少一个来源于此处公开抗体CDR部分(特别是CDR3)的抗体及其抗原结合部分。在优选的实施方案中，抗体为与其将施用的受试者免疫相容的单克隆抗体，优选可临床施用于人体的抗体。本公开内容的某些方面提供了能够产生此处公开抗体的杂交瘤，特别是能产生选自以下抗体的杂交瘤，所述抗体表示为No.001、No.023、No.035、No.079、No.047、No.057、No.85H、No.098、No.138、No.085L、No.091和No.131。可产生抗体No.023(位于氨基酸16-198内的表位)、抗体No.091(活化激酶的抗体；位于氨基酸324-429的表位)、抗体No.098(位于氨基酸430-537的表位)、抗体No.131(位于氨基酸324-429的表位)以及抗体No.138(位于氨基酸430-537的表位)的杂交瘤储存于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，10801 University Boulevard，Manassas，VA20110-2209。ATCC中产抗体No.023、No.091、No.098、No.131和No.138的杂交瘤保藏识别号分别为PTA-6208、PTA-6209、PTA-6210、PTA-6214和PTA-6211。因此，本公开内容的某些具体方面提供了选自具有ATCC保藏识别号PTA-6208、PTA-6209、PTA-6210、PTA-6214和PTA-6211的杂交瘤细胞。惊奇的是，抑制配体结合的抗体、抑制EphB4激酶活化的抗体和活化EphB4激酶活性的抗体在生物测定中都抑制EphB4介导的事件。因此，本公开内容提供了治疗癌症的方法，包括向所需患者施用有效剂量的分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分可与位于EphB4胞外部分的本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分可结合ＥｐｈＢ４胞外部分的表位相并抑制ＥｐｈＢ４活性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：V卡拉斯诺佩洛夫，S佐祖尔亚，N科尔苔兹，R雷迪，P吉尔，
申请(专利权)人：瓦斯基因治疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]