和厚朴酚在制备抗肿瘤血管形成药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供一种和厚朴酚在制备抗肿瘤血管形成药物中的用途，该和厚朴酚英文名为ｈｏｎｏｋｉｏｌ，ＣＡＳ　　ｎｕｍｂｅｒ：３５３５４－７４－６，分子量：２６６．３３，本发明专利技术制备的和厚朴酚药物包括制剂允许的药物赋形剂或载体。本发明专利技术提供的和厚朴酚也在制备临床肿瘤化疗药物中的应用。剂型主要包括肠道或非肠道组合药的剂型。制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂。本发明专利技术提供的和厚朴酚药物组合物可促进低氧诱导因子－１的分解、抑制血管内皮生长因子和一氧化氮合成酶的表达，可有效抑制肿瘤的血管形成，且毒性低，具有很好的临床抗肿瘤药的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术属天然化合物的用途，涉及从植物提取的和厚朴酚的新用途，尤其涉及和厚朴酚在制备抗肿瘤血管形成药物中的用途。
技术介绍
近年来，肿瘤生长中的血管新生问题正日益受到重视，积累了一些关于肿瘤血管新生依赖性的证据，并发现血管新生受控于一系列正负调控因子。正常细胞是非血管新生性的(nonangiogenic)，无论是在癌前期还是癌变转化期都必须发生从非血管新生性到血管新生性的表型转换，肿瘤才能得以生长。血管新生模型的组织学观察发现血管新生有几个明显的分期1血管通透性增加引起血浆蛋白外渗(extravasation)及周围细胞外基质的降解；排列于已存血管腔面的内皮细胞开始从亲代母血管向血管新生刺激物方向游走迁移；位于迁移游走前沿后面的内皮细胞增生，而位于最邻近新毛细血管的内皮细胞开始分化形成新的管腔；新形成的管腔将最终开放与血流相通，继而一些毛细血管不断延伸，另一些因回流量较低而收缩消失。肿瘤组织的另一特点是形成新生血管以保证不断增殖的需要，血管形成愈丰富，肿瘤生长越旺盛2。血管新生是由许多基因参与调控的整体过程，包括诱导型一氧化氮合成酶基因(iNOS)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF的II型受体(flt-1)、胶原-4脯氨酸羟化酶(collegen proly-4hydroxydationase)、组织金属蛋白酶抑制因子(TIMP)、尿激酶型血浆纤溶酶激活子受体(uPA受体)、血小板来源生长因子(PDGF)、血浆纤溶酶原激活抑制因子-1(PAL-1)等，这些基因都是低氧诱导因子-1(HIF-1)的直接靶基因2，它们的表达产物参与新生血管形成的整个过程，因此，HIF-1在肿瘤新生血管形成过程中起着关键的作用。肿瘤组织常处于低氧状态，低氧状态使肿瘤组织内的HIF-1含量增加，HIF含量增加导致肿瘤血管生成，肿瘤血管丰富，肿瘤得以迅速发展。反之，若能有效控制肿瘤血管的生成，肿瘤就不能生长。肿瘤血管生成已成为肿瘤治疗的最重要的靶点之一2。和厚朴酚是从植物厚朴中提取的一种天然化合物。其化学结构如下 和厚朴酚在对其抗血栓3、抗焦虑4等体内实验时，证明能被胃肠道吸收，并具有体内滞留时间较长、没有明显毒副作用等特点。至今为止只有一篇报道和厚朴酚能抑制血管生成，但该报道只限于和厚朴酚阻断血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮生长因子II型受体磷酸化的阻断作用。而肿瘤血管生成的最关键因素是低氧诱导因子-1(HIF-1)及其作用的一系列靶基因的表达，如VEGF，一氧化氮合成酶等5。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种和厚朴酚在制备抗肿瘤血管形成药物中的用途，该和厚朴酚英文名为honokiol，CAS number35354-74-6，分子量266.33，化学命名为3，5’-diallyl-4，2’-dihydroxybiphenyl，分子式为C18H18O2，对人体毒性小，本专利技术制备的和厚朴酚药物包括制剂允许的药物赋形剂或载体。本专利技术的另一个目的是提供和厚朴酚在制备临床抗肿瘤药物中的应用。本专利技术所述的和厚朴酚药物可按本制剂领域已知方法制成肠道或非肠道组合药的剂型。制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂或注射剂。制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。本专利技术的关键之处是证明了和厚朴酚可抑制低氧诱导因子-1(HIF-1)的表达，促进低氧诱导因子-1的分解；和厚朴酚可抑制血管内皮生长因子和一氧化氮合成酶的表达；证明了和厚朴酚抑制血管生成的作用靶点。本专利技术的有益效果如下(1)和厚朴酚可有效抑制肿瘤的血管形成，实验证明该化合物可作用于低氧诱导因子-1，血管内皮细胞生长因子，一氧化氮合成酶等，能有效控制肿瘤血管的形成，具有临床应用前景；(2)和厚朴酚毒性低，而目前所用的临床抗肿瘤药物对人体都有较大的毒性；(3)和厚朴酚具有很好的临床抗肿瘤药的应用前景。附图说明图1A为和厚朴酚对人结肠上皮癌细胞系RKO细胞内低氧诱导因子-1mRNA含量的影响。图1B为和厚朴酚对RKO细胞内低氧诱导因子-1mRNA含量影响的直方图。图2A为和厚朴酚对RKO细胞内低氧诱导因子-1蛋白质含量的影响。图2B为和厚朴酚对RKO细胞内低氧诱导因子-1蛋白质含量影响的直方图。图3A为和厚朴酚对RKO细胞内血管生长因子mRNA含量影响。图3B为和厚朴酚对RKO细胞内血管生长因子mRNA含量影响的直方图。图4为和厚朴酚对RKO细胞内血管生长因子蛋白质含量的影响。图5A为和厚朴酚对RKO细胞内一氧化氮合成酶的蛋白质含量的影响。图5B为和厚朴酚对RKO细胞内一氧化氮合成酶的蛋白质含量影响的直方图。图6A为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的mRNA含量的影响。图6B为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的mRNA含量影响的直方图。图7A为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的蛋白质含量的影响。图7B为和厚朴酚对RKO细胞内热休克蛋白70的蛋白质含量影响的直方图。图8为和厚朴酚对荷人大肠癌RKO细胞异种移植物的Balb/C裸鼠的治疗作用。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述实施例1和厚朴酚对肿瘤细胞内低氧诱导因子-1(HIF-1)mRNA的抑制HIF-1是肿瘤血管生成的最关键因子之一，HIF-1含量减少，肿瘤组织中的血管生成就会受阻，反之，肿瘤组织中的血管就会增生而促进肿瘤生长。(1)实验材料细胞株大肠癌细胞株RKO来源于美国American Type CultureCollection(ATCC)公司。试剂和厚朴酚，中国药品与生物制品鉴定所；逆转录试剂盒(Promage，美国)，逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)试剂盒，热稳定DNA合成酶(Taq酶上海生工)。仪器培养瓶，培养板，二氧化碳培养箱，PCR仪，FCM仪。(2)实验方法细胞培养分组根据不同和厚朴酚浓度分为5组，分别以1、2、3、4、5表示。1组为对照；2组加氯化钴(CoCl2)(150uM)；3组CoCl2(150uM)+和厚朴酚0.1ug/ml；4组CoCl2(150uM)+和厚朴酚0.5ug/ml；5组CoCl2(150uM)+和厚朴酚1ug/ml。药物诱导RKO细胞2×104每孔接种于24孔板，每组3个复孔；用含3％小牛血清的RPIM1640培养基稀释和厚朴酚储存液(5mg/ml)，充分混匀，配成所需浓度，并以此更换细胞培养液；药物作用1小时后加入CoCl2(对照组除外)，使其终浓度为150uM，继续培养3小时。收集细胞，提取RNA或蛋白质，做相应的RT-PCR。RT-PCR收集细胞，弃去培养液，冰生理盐水洗3次后用RNA提取试剂Trizol(每孔400ul)提取细胞RNA(按Trizol试剂说明进行)。RNA逆转录成cDNA按逆转录试剂盒方案进行，引物为寡核苷酸脱氧胸腺嘧啶(OligodT)。PCR的引物如表1。表1引物序列PrimersUpstream primer(5’-3’)Downstream primer(5’-3’)Size(bp)HIF-1α CCAGTTACGTTCCTTCGATCAG TCACCAAACAGAGCAGGAAAAG143PCR的反应体系按照PCR试剂盒方案进行。PCR条件如下HIF-194℃ 5分钟→本文档来自技高网...

【技术保护点】
和厚朴酚在制备抗肿瘤血管形成药物中的用途，和厚朴酚，英文名为ｈｏｎｏｋｉｏｌ，ＣＡＳｎｕｍｂｅｒ：３５３５４－７４－６，分子量：２６６．３３，化学命名为：３，５’－ｄｉａｌｌｙｌ－４，２’－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｂｉｐｈｅｎｙｌ，分子式为Ｃ ↓［１８］Ｈ↓［１８］Ｏ↓［２］，其特征是：和厚朴酚与药物赋形剂或载体组合，在制备抗肿瘤血管形成药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.和厚朴酚在制备抗肿瘤血管形成药物中的用途，和厚朴酚，英文名为honokiol，CAS number35354-74-6，分子量266.33，化学命名为3，5’-diallyl-4，2’-dihydroxybiphenyl，分子式为C18H18O2，其特征是和厚朴酚与药物赋形剂或载体组合，在制备抗肿瘤血管形成药物中的应用。2.根据权利要求1所述的和厚朴酚...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡汛，陈菲，王弢，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]