检测Notch1基因热点突变的方法、引物、试剂盒及其应用技术

本发明专利技术公开了一种检测急性T淋巴细胞白血病(T‑ALL)有关的Notch1基因热点突变的引物、方法、试剂盒及其应用，其包括扩增检测Notch1基因热点突变区域外显子序列的6对引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明专利技术可快速地将与急性T淋巴细胞白血病(T‑ALL)相关的Notch1基因的热点突变检测出来。利用本发明专利技术完成的检测结果准确，可以辅助诊断急性T淋巴细胞白血病(T‑ALL)，对早期干预、早期治疗和产前诊断有重要的参考意义。

Methods, primers, kits and applications for detecting hot spot mutation of Notch1 gene

The invention discloses a method of detecting T cell acute lymphoblastic leukemia (T ALL), primer method, Notch1 gene mutation hot spot related kit and application thereof, which comprises 6 pairs of primers to detect Notch1 gene mutation hotspot region of exon sequences; by Sanger sequencing and sequencing primers. The invention can quickly and T cell acute lymphoblastic leukemia (T ALL) hot Notch1 gene mutation detection. The invention can complete accurate detection results, diagnosis of acute T lymphocytic leukemia (T ALL), which has important reference significance to early intervention, early treatment and prenatal diagnosis.

【技术实现步骤摘要】
检测Notch1基因热点突变的方法、引物、试剂盒及其应用
本专利技术属生命科学和生物
，特别涉及检测与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)发生有关的Notch1基因热点突变的引物和方法。
技术介绍
Notch信号通路由Notch受体、配体和胞内的效应分子组成。Notch在多个物种中均有表达，其家族成员的结构具有高度保守性，Notch信号通路更是在众多病理生理过程中发挥关键作用。Notch家族成员Notch1不仅全程参与正常T细胞的发育，同时也与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的发生密切相关。1991年，第1个人类Notch家族成员Notch1基因在发生t(7；9)(q34；q34.3)染色体易位的急性T淋巴细胞白血病中发现，由此揭示了Notch信号通路是一条影响细胞命运的保守而又重要的信号通路，几乎涉及所有细胞的增殖、分化和凋亡。与此同时，Notch信号通路在恶性血液病和实体瘤的形成和发展中所起的作用也日趋清晰。急性淋巴细胞白血病(ALL)是一种起源于淋巴细胞的B系或T系细胞在骨髓内异常增生的恶性肿瘤性疾病。异常增生的原始细胞可在骨髓聚集并抑制正常的造血功能，同时也可侵入骨髓外本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测Notch1基因热点突变的引物，其特征在于，包括：至少一对扩增引物用于Notch1基因，所述至少一对扩增引物选自Notch1‑Exon26‑F/Notch1‑Exon26‑R、Notch1‑Exon27‑F/Notch1‑Exon27‑R、Notch1‑Exon28‑F/Notch1‑Exon28‑R、Notch1‑Exon34‑1F/Notch1‑Exon34‑1R、Notch1‑Exon34‑2F/Notch1‑Exon34‑2R、Notch1‑Exon34‑3F/Notch1‑Exon34‑3R，其碱基序列为：Notch1‑Exon26‑F：GGACCTGAACTTGGATGTGNo...

【技术特征摘要】
1.检测Notch1基因热点突变的引物，其特征在于，包括：至少一对扩增引物用于Notch1基因，所述至少一对扩增引物选自Notch1-Exon26-F/Notch1-Exon26-R、Notch1-Exon27-F/Notch1-Exon27-R、Notch1-Exon28-F/Notch1-Exon28-R、Notch1-Exon34-1F/Notch1-Exon34-1R、Notch1-Exon34-2F/Notch1-Exon34-2R、Notch1-Exon34-3F/Notch1-Exon34-3R，其碱基序列为：Notch1-Exon26-F：GGACCTGAACTTGGATGTGNotch1-Exon26-R：GAATGCTGCCTCTACTCCTT；Notch1-Exon27-F：GCTCCTGGCACATACTCTNotch1-Exon27-R：TAGCAACTGGCACAAACA；Notch1-Exon28-F：CAGATAGAGTCGGCTGGTGCNotch1-Exon28-R：CCACTCATTCTGGTTGTCGTC；Notch1-Exon34-1F：CTTCCTCTGGTGATGGAACCTNotch1-Exon34-1R：GACTTCTTCCTCCGTGCCT；Notch1-Exon34-2F：AAGGCACGGAGGAAGAAGTNotch1-Exon34-2R：CGCAGAGGGTTGTATTGGT；Notch1-Exon34-3F：GAACCAATACAACCCTCTGCNotch1-Exon34-3R：GAAGGCTTGGGAAAGGAAG。2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括至少一对测序引物，所述至少一对测序引物与所述至少一对扩增引物同时选自Notch1-Exon26-F/Notch1-Exon26-R、Notch1-Exon27-F/Notch1-Exon27-R、Notch1-Exon28-F/Notch1-Exon28-R、Notch1-Exon34-1F/Notch1-Exon34-1R、Notch1-Exon34-2F/Notch1-Exon34-2R、Notch1-Exon34-3F/Notch1-Exon34-3R。3.如权利要求1～2之一所示的引物在辅助诊断急性T淋巴细胞白血病中的应用。4.一种检测Notch1基因热点突变的方法，包括以下步骤：(1)提取样本中的DNA；(2)利用至少一对扩增引物对(1)中的DNA进行扩增，获得扩增产物；(3)利用至少一对测序引物对(2)中的扩增产物进行测序，获得所述扩增产物的碱基序列；(4)将(3)中的碱基序列与Notch1基因外显子野生型参考序列进行比较，确定突变位点是否存在，其特征在于，所述至少一对扩增引物和所述至少一对测序引物同时选自Notch1-Exon26-F/Notch1-Exon26-R、Notch1-Exon27-F/Notch1-Exon27-R、Notch1-Exon28-F/Notch1-Exon28-R、Notch1-Exon34-1F/Notch1-Exon34-1R、Notch1-Exon34-2F/Notch1-Exon34-2R、Notch1-Exon34-3F/Notch1-Exon34-3R，其碱基序列为：Notch1-Exon26-F：GGACCTGAACTTGGATG...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄开新，吴鹏飞，王淑一，
申请(专利权)人：杭州艾迪康医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33